李栋梁
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人呼吸道合胞病毒G蛋白非复制型腺病毒重组体的构建和鉴定
- 目的：人呼吸道合胞病毒/(Human Respiratory Syncytial Virus，RSV/)广泛分布于世界各地，是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚无特异性防治方法，世界卫生组织将发展RSV...
- 李栋梁
- 关键词：人呼吸道合胞病毒G蛋白RT-PCR真核表达
- 文献传递
- 人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P的表达鉴定被引量：1
- 2006年
- 本研究根据编码A亚型人呼吸道合胞病毒(HumanRespiratorySyncytialVirus,HRSV)核壳体蛋白(Nucleocapsidprotein,N)和磷蛋白(phosphoprotein,P)的基因序列,各设计一对特异性的引物,应用RT-PCR技术,从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得n和p的基因片断,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。获得的重组质粒通过脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,72h后再用Westernblot鉴定蛋白的表达。结果显示真核表达载体pcDNA3.1(+)/N和pcDNA3.1(+)/P的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变,利用蛋白印记方法也检测到了N和P的特异性条带。于是我们认为成功构建了含有HRSVN和P编码基因的真核表达载体,在真核细胞内能顺利表达。为进一步开展HRSV反向遗传学等研究奠定了基础。
- 虞结梅何金生李栋梁杨兵袁媛
- 关键词：磷蛋白真核表达
- A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达被引量：2
- 2006年
- 目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒(HRSV)G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RTPCR技术,从感染HRSV的HEp2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEMTeasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切鉴定后,脂质体法转染COS7细胞,RTPCR和Westernblotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3.1(+)G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS7细胞后,RTPCR检测到G基因有转录,Westernblotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。
- 李栋梁宋蔚汪红俊李群黄保军胡春松罗畅民何金生
- 关键词：呼吸道合胞体病毒
- 可表达骨形态发生蛋白-4的真核表达载体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的构建含有骨形态发生蛋白(hBMP)-4的真核表达载体pcDNA3·1(+)/hBMP-4。方法将质粒pCS2(+)/hBMP-4用EcoRⅠ单酶双切获得目的基因片段,真核载体pcDNA3·1(+)用EcoRⅠ酶切线性化,对上述两种酶切产物分别回收纯化后进行连接,筛选出正确的转化子,并进一步转染COS-7细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western-blot检测。结果获得了含有目的基因片段的真核表达载体,酶切及基因测序提示构建正确,RT-PCR检测到目的基因的转录,Western-blot检测到hBMP-4蛋白表达。结论利用非定向克隆技术将目的基因转移至真核表达载体中,为进一步研究目的基因打下基础。
- 王兴宇汪春兰李栋梁赵宇王帮河何金生
- 关键词：骨形态发生蛋白质类基因表达
- 人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白非复制型重组腺病毒的构建和表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建含有A亚型人呼吸道合胞病毒（Human Respiratory Syneytial Virus，RSV）融合糖蛋白（Fusion glycoprotein，F）基因的非复制型第一代重组腺病毒（First generation adenovirus vector，FGAd），并研究F基因在重组腺病毒中的表达。方法利用限制性内切酶Xho I和Hind Ⅲ从质粒pGEM3zf-F中切下目的基因F，克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV，再与pAdeasy-1在大肠埃希菌BJ5183中进行同源重组，鉴定正确后，用脂质体法转染293细胞，Western Blot鉴定目的基因表达。结果获得了表达RSVF基因的非复制型重组腺病毒FGAd／F，Western Blot检测到F基因的表达。结论获得一株可表达A亚型RSVF的非复制型重组腺病毒FGAd／F，可用于体内研究观察其免疫效果及免疫保护作用。
- 袁媛何金生付远辉张梅唐倩李栋梁魏薇屈建国洪涛
- 关键词：重组腺病毒呼吸道合胞病毒
- 人呼吸道合胞病毒F基因的克隆、真核表达与鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的克隆人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/F,并进行表达和鉴定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然后克隆到pGEM-3zf载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),行酶切鉴定,脂质体法转染COS-7细胞,应用Western blotting方法分析F基因表达情况。结果测序证实得到HRSV F基因序列,序列分析显示没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blotting方法检测到了F蛋白的特异性条带。结论成功克隆HRSV F基因,并在真核细胞中获得表达。
- 袁媛何金生张梅宋蔚李栋梁虞结梅杨兵
- 关键词：人呼吸道合胞病毒F基因真核表达
