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孙璐: 作品数：15 被引量：38H指数：4; 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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抗TNF-α中和抗体通过升高脂联素水平减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用被引量：2: 2012年; 目的:阐明心肌缺血/再灌注(MI/R)时,脂联素(APN)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系,以及使用中和抗体阻断TNF-α可否提高血浆APN,进而发挥心肌保护作用。方法:96只成年雄性C57小鼠和36只ob/ob小鼠均采用30 min缺血/再灌注(I/R)建立MI/R模型。96只C57小鼠分为假手术组、手术+盐水对照组及手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=32);36只ob/ob小鼠分为ob/ob假手术组、ob/ob手术+盐水对照组及ob/ob手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=12)。假手术或缺血20 min后,腹腔注射给予单次抗TNF-α中和抗体或盐水干预。分别采用ELISA检测TNF-α与APN血浆水平;小鼠心脏超声评估心脏LVEF;伊文氏蓝/TTC染色检测心脏梗死面积;以及TUNEL/Caspase-3活性检测观察心肌细胞凋亡。结果:血浆ELISA测定发现,MI/R后,小鼠血浆TNF-α水平在再灌后1 h即显著升高,后缓慢下降。注射抗TNF-α中和抗体可在再灌后1 h即中和TNF-α(P<0.01),同时在再灌注3 h、8 h、1 d及3 d后4个时间点,较给予盐水对照显著升高血浆APN(P<0.01)。通过小鼠心脏超声、伊文氏蓝/TTC染色和TUNEL/Caspase-3活性检测发现,与给予盐水的对照相比,腹腔注射抗TNF-α中和抗体可提高小鼠的心肌功能(P<0.05)、减少梗死面积(P<0.01)及心肌细胞的凋亡(P<0.01)。而在ob/ob小鼠中,通过以同样的实验方法证实,单次注射抗TNF-α中和抗体已不能提高血浆APN的含量,其减轻心肌损伤的作用同样被显著削弱,但给予APN球状片段仍可发挥心肌保护作用。结论:以抗TNF-α的中和抗体阻断TNF-α可逆转MI/R后血浆APN的降低并发挥心肌保护作用,提示抗TNF-α中和抗体发挥的心肌保护作用可能部分通过提高APN实现。; 高超刘毅杨强孙璐杨璐陶凌王海昌; 关键词：脂联素小鼠

脂联素通过APPL1减轻缺氧/复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡被引量：5: 2012年; 目的:探讨APPL1在脂联素(adiponectin,ANP)拮抗SD乳鼠心肌细胞(neonatal cardiomyocytes)缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用。方法:分离SD乳鼠心肌细胞并培养。通过对培养的心肌细胞H/R损伤模拟缺血/再灌注(simulated ischemia reperfusion,SI/R)后,随机分为对照组、H/R组、H/R+APN组及H/R+APN+APPL1 RNAi组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的生存率,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡,Westernblot检测APPL1蛋白的表达。结果:与对照组相比,H/R组吸光度值明显降低(P<0.01),凋亡指数(AI)显著上升(P<0.01)。与对照组和H/R组相比,H/R+APN组中APPL1的表达明显上升(P<0.05)。以RNAi抑制APPL1表达后,与H/R+APN组相比,H/R+APN+APPL1 RNAi组凋亡指数率(%)明显上升[(28.32±4.13)%vs.(9.78±2.16)%,P<0.01]。结论:APN可显著抑制H/R损伤诱导的心肌细胞凋亡,促进心肌细胞存活,其拮抗作用与上调APPL1蛋白的表达相关。; 李冬冬张海锋孙璐张荣庆王海昌陶凌; 关键词：脂联素心肌细胞乳鼠

白黎芦醇减轻Ⅱ型糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用被引量：3: 2012年; 目的:探讨白黎芦醇(RSV)减轻Ⅱ型糖尿病(T2DM)小鼠心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)的作用及其机制。方法:采用喂养高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立T2DM小鼠模型。造模成功后立即给予RSV(10 mg/kg)每日1次灌胃,连续3周。实验分为正常假手术组、正常手术对照组、DM假手术组、DM手术对照组、RSV组、CpC组,每组20只。手术方式采用心脏冠状动脉左前降支结扎30 min、再灌注3 h或24 h。抑制剂组于术前1 h腹腔注射Compound C(20 mg/kg)。用TTC染色法检测心肌梗死(MI)面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,ELISA法检测caspase-3活性、血浆脂联素(APN)水平,Western blot法检测AMPK、p-AMPK及脂肪组织APN的含量。结果:喂养高脂饮食结合小剂量STZ能够成功建立T2DM小鼠模型。与DM手术对照组相比,RSV饲喂能够减轻T2DM小鼠MI/RI,减小MI面积、减少心肌细胞凋亡(P<0.01),降低caspase-3的活性(P<0.05)。RSV还能够上调脂肪组织APN表达,逆转T2DM小鼠低APN血症(P<0.01)。AMPK抑制剂Compound C可显著减弱RSV的心肌保护作用(P<0.05)。结论:RSV可通过逆转T2DM小鼠的低脂联素血症,在MI/RI时发挥对心肌的保护作用。; 杨强王海昌高超冯世栋孙璐刘毅陶凌; 关键词：白藜芦醇脂联素小鼠

无标签重组人硫氧还蛋白的大规模表达、纯化及活性检测被引量：2: 2012年; 目的:利用基因工程的方法原核表达无标签的重组人硫氧还蛋白(rhTrx)并对其进行大规模表达、纯化和鉴定。方法:从人胚胎肾HEK293细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增、酶切后连入pET-22b(+)载体构建重组质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,经两步离子交换层析纯化重组蛋白,采用SDS-PAGE、Western blotting、HPLC、MALDI-TOF-MS及经典的胰岛素二硫键还原法对重组蛋白进行鉴定。结果:构建成功了rhTrx基因表达载体;实现了rhTrx在原核细胞中的可溶性表达;纯化出的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting分析证实为rhTrx;HPLC和MALDI-TOF-MS分析表明,纯化出的目的蛋白纯度大于95%;胰岛素二硫键还原法证实纯化出的rhTrx具有生物学活性。结论:成功构建了rhTrx的原核表达体系,建立了rhTrx的纯化和鉴定方法,为其进一步的理论研究和生产开发提供了有效基础数据。; 郭云萍孙璐张立剑王增禄高超杨强刘毅张英起屈延陶凌; 关键词：表达纯化生物活性

人血浆脂联素分离纯化及活性鉴定: 2011年; 目的:从人血浆中分离纯化各亚型脂联素(APN),建立人血浆APN活性的检测方法,同时获得制备抗APN各亚型特异性抗体所需的抗原。方法:将-80℃保存的人血浆融解后稀释,采用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化人血浆中不同亚型的APN。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和ELISA检测纯化的产物及回收率。通过孵育人脐静脉内皮细胞后,检测磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)的水平反映APN的活性。结果:所获不同亚型的APN均具有生物学活性,高聚体APN激活AMPK的能力最强。APN活性回收率为40%。结论:建立了一种能够快速、简便从人血浆中分离纯化APN及其亚型并保持其天然的生物学活性的方法,为APN的深入研究奠定了基础。; 廉坤王海昌王汝涛靳温孙璐马新亮陶凌; 关键词：脂联素分离纯化活性鉴定

人硫氧还蛋白同ASK1的结合与硫氧还蛋白氨基酸位点的关系被引量：2: 2011年; 目的:通过对硫氧还蛋白(Trx)突变体与凋亡信号调节激酶-1(ASK1)结合能力的研究,揭示Trx的氨基酸位点与其抗氧化抗凋亡性的关系,进一步阐述Trx在细胞凋亡中的作用。方法:构建人类野生型Trx(pcDNA-hTrx-H is tag,TrxA)和人类Trx 49位突变体(pcDNA-hTrx-Y49F-H is tag,TrxB)及ASK1质粒(pCDNA-ASK1-HA tag)。用TrxA、TrxB质粒分别与ASK1质粒共转染入HEK-293A细胞。实验分为对照组(CON)、ASK1质粒转染组、TrxA+ASK1质粒共转染组及TrxB+ASK1质粒共转染组。于转染24 h后,裂解细胞,裂解细胞前20 m in加入不同浓度的过氧化氢。将裂解产物进行W estern b lot检测转染的结果,运用免疫共沉淀(co-immunoprec ip itation)法检测ASK1与Trx在过氧化物作用下解离的程度,采用TUNEL法及检测Caspase-3的活性法检测HEK-293A细胞的凋亡。结果:与ASK1转染组细胞的凋亡指数(73.8±6.93)%及Caspase-3活性[(69.3±3.57)nmol/(h.mg蛋白)]相比,TrxA+ASK1共转染组细胞的凋亡率(49.8±4.62)%明显减少,Caspase-3的活性降低[(51.4±3.61)nmol/(h.mg蛋白)],(P<0.05)。TrxB+ASK1共转染组的凋亡率(22.4±5.07)%更少,Caspase-3的活性降低更明显[(30.1±2.48)nmol/(h.mg蛋白)](P<0.01)。与TrxA+ASK1共转染组相比,TrxB+ASK1共转染组的细胞凋亡数及Caspase-3的活性下降更明显(P<0.05)。此外,在过氧化氢干预下,TrxB与ASK1的结合同TrxA与ASK1的结合相比较,前者更紧密。结论:Trx中第49位的酪氨酸突变为苯丙氨酸后,Trx与ASK1的结合能力增强,Trx抗凋亡的作用明显增加。说明Trx与ASK1的结合能力与Trx的氨基酸位点明显相关,进而可影响Trx抗细胞凋亡的能力。; 贺媛夏陈海孙璐王汝涛靳温陶凌王海昌; 关键词：硫氧还蛋白细胞凋亡

脂联素与冠状动脉慢血流现象的关系被引量：1: 2012年; 目的探讨脂联素(APN)与冠状动脉慢血流现象(CSFP)之间的关系。方法采用校正TIMI帧计数(CTFC)将入选病例分为两组:CSFP组35例及对照组35例。所有患者均于冠脉造影术中肝素抗凝管取血浆5 ml,静置离心,-80℃冻存。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测APN水平。常规化验血常规、肝、肾功、血脂、血凝全套、空腹血糖、糖化血红蛋白。分析APN与CSFP之间关系。结果两组基线资料相当,冠脉CSFP组脂联素水平较对照组明显减低。结论 APN水平减低与CSFP密切相关。; 常快乐王斌廉坤孙璐王海昌陶凌; 关键词：冠状动脉慢血流脂联素冠状血管造影术动脉粥样硬化

阿托伐他汀联合尼可地尔治疗冠状动脉慢血流的临床研究被引量：10: 2012年; 目的通过对伴有胸痛症状的冠状动脉慢血流(CSF)患者临床资料进行分析,观察阿司匹林、尼可地尔及阿托伐他汀对CSF的疗效及血浆脂联素(APN)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法经冠状动脉造影(CAG)诊断为CSF且伴有胸痛的患者35例,患者知情同意,给予阿司匹林100mg1次/d,尼克地尔5mg3次/d,阿托伐他汀20mg1次/晚。采取自身前后对照方法,观察治疗3个月后患者胸痛症状改善程度,以及APN及hs-CRP水平的变化。结果经治疗患者胸痛症状明显改善,有效率82%;经治疗血浆APN水平较前明显升高;hs-CRP水平较前明显减低,前后比较有统计学差异(P<0.05)。结论他汀联合尼可地尔对缓解CSF患者的胸痛症状疗效显著,可显著提高CSF患者的血浆APN水平,减低血浆hs-CRP水平。; 常快乐王海昌孙璐廉坤陶凌; 关键词：冠状血管 C反应蛋白质阿托伐他汀钙慢血流

无标签人源性脂联素球状结构的表达、纯化与活性检测: 2013年; 目的:利用基因工程方法构建无标签人源性脂联素球状结构(gAd)基因的原核表达载体,并对重组蛋白进行诱导表达、纯化及鉴定。方法:从正常人脂肪组织里提取总RNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增、酶切后连入pET-22b(+)载体构建重组质粒pET-22b(+)-gAd,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经低温、低浓度IPTG诱导使其可溶性表达,采用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析三步分离纯化,得到不带任何标签的人源性gAd;运用SDS-PAGE、Western印迹、HPLC对重组蛋白进行鉴定,通过对AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平检测纯化蛋白的生物学活性。结果:构建了原核表达载体pET-22b(+)-gAd,实现了人源性gAd在原核细胞中的可溶性表达,纯化的蛋白经SDS-PAGE和Western印迹分析证实为gAd,HPLC分析蛋白纯度达到95%以上;通过对AMPK磷酸化水平的检测,证明纯化的gAd具有高生物学活性。结论:重组表达和纯化了无标签、高生物学活性的人源性脂联素球状结构,为其进一步的理论研究、生产开发奠定了基础。; 张立剑孙璐李冬冬郭云萍王增禄刘毅张英起陶凌; 关键词：表达纯化活性检测

氯沙坦联合苯那普利对早期糖尿病肾病患者血浆APN及hs-CRP的影响被引量：2: 2013年; 目的研究苯那普利联合氯沙坦对2型糖尿病肾病患者血浆脂联素（APN）及高敏C反应蛋白（hs—CRP）的影响。方法选择我院心血管内科住院的早期2型糖尿肾病患者84例，随机分为苯那普利组（常规组）及苯那普利联合氯沙坦组（联合组）各42例。常规组给予苯那普利10—20mg／d，治疗6个月；联合组给予苯那普利10mg／d，联合氯沙坦50—100mg／d，治疗6个月。分别检测两组患者入院、治疗3和6个月的血浆APN、hs—CRP变化。结果治疗后两组血浆APN较前入院前明显升高，hs-CRP明显减低（P〈0．05）。治疗3及6个月后，联合组血浆APN水平较常规组明显升高，hs-CRP较常规组明显减低（P〈0．05）。结论双重RAS阻滞剂具有明显肾保护作用，可升高2型糖尿病肾病患者血浆APN水平，降低血浆hs—CRP水平。; 常快乐王海昌孙璐廉坤陶凌; 关键词：苯那普利氯沙坦糖尿病肾病 APN 尿蛋白

孙璐

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