唐键
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 供职机构：暨南大学医学院生殖免疫研究中心更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用H_2O_2提高GS115rhZP3培养中的溶氧和目的蛋白产量被引量：2
- 2004年
- 目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)在毕赤酵母中表达量的影响.结果:H2O2可提高培养基的溶氧量.当H2O2浓度为5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高.结论:在rhZP3毕赤酵母工程菌摇瓶培养中,加入H2O2可提高rhZP3的表达量.
- 肖銮娟谢琪璇潘善培唐键
- 关键词：过氧化氢毕赤酵母溶氧
- 猪卵透明带ZP3α真核表达载体的构建及体外瞬时表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :构建猪卵透明带ZP3α真核表达载体 ,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法 :采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段 ,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达 ,然后采用RT -PCR和间接免疫荧光技术 (IIF)检测pZP3α在mRNA水平的转录和蛋白质水平上的表达。结果 :真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α构建成功 ,用RT -PCR和IIF技术检测到了pZP3α在HeLa细胞中的转录与表达。结论 :真核表达载体pVAX1-pZP3α的成功构建和表达为研制开发有效的人用卵透明带DNA避孕疫苗奠定了基础。
- 孙彩军潘善培谢琪璇肖銮娟唐键
- 关键词：猪卵透明带DNA疫苗免疫避孕
- 壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达被引量：4
- 2004年
- 目的:发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗.方法:首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3αDNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α,然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊,测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率,用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构,并体外转染HeLa细胞,用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达.结果:pZP3αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊,对重组质粒pVAX1-pZP3α的包裹率达90%以上.AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等,平均为224 6nm,形状为球形、椭圆形等.体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达.结论:壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功,为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础.
- 孙彩军潘善培王彬谢琪璇肖銮娟唐键蔡继业
- 关键词：卵透明带DNA疫苗壳聚糖纳米微囊免疫避孕
- 重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：16
- 2003年
- 利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris中 ,用高浓度G4 18筛选高拷贝菌株 ,然后甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果发现P .pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中 ,并且可溶性好。纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体发生交叉反应 ,证实表达的目的蛋白具有反应原性。
- 唐键谢琪璇潘善培肖銮娟董鲁张春雪孙彩军
- 关键词：毕赤酵母
- 重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化
- 透明带(ZP)是哺乳类动物卵细胞膜外包被的一层特殊的非细胞结构,是精子与卵细胞识别和结合的部位。人卵透明带蛋白ZP3是精卵识别和结合过程中的初级精子受体,因而成为研究孕前型避孕疫苗的潜在靶抗原。体内自身透明带抗体的存在会...
- 唐键
- 关键词：巴氏毕赤酵母基因表达蛋白纯化
- 文献传递
