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绵羊痘病毒和山羊痘病毒双重PCR检测方法的建立及应用被引量：4: 2012年; 为建立鉴别绵羊痘病毒(SPPV)和山羊痘病毒(GTPV)的检测方法,本研究针对这2种病毒的基因组序列,分别设计2对特异性引物,通过对引物浓度、退火温度等的优化,建立了快速鉴别检测SPPV和GTPV的双重PCR方法。该方法分别扩增出SPPV长度为177 bp和GTPV长度为222 bp的目的片段。特异性试验结果显示,该方法对牛疙瘩皮肤病病毒、犬细小病毒、大肠杆菌O157、沙门氏菌、健康羊组织和牛组织均无扩增。敏感性试验显示,该方法最低可检测1.725×107copies/μL的SPPV和1.71×106copies/μL的GTPV。应用该方法对50份临床病料样品进行检测的结果与病毒分离鉴定结果一致,均检出5份感染GTPV的病料和2份感染SPPV的病料,表明该方法可以用于临床病料样品的检测。; 肖雯聂福平王昱肖进文周雪梅丁森周庆李应国刘力; 关键词：绵羊痘病毒山羊痘病毒双重PCR

一株产脂肪酶芽孢杆菌的鉴定及其脂肪酶基因LIP的克隆分析: 2013年; 依据形态学和生理生化特征,将一株产脂肪酶芽孢杆菌BL03初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。提取该菌核酸,PCR扩增出地衣芽孢杆菌脂肪酶基因LIP,克隆到pMD19-T载体后进行PCR鉴定及序列测定和生物信息学分析,结果表明该菌LIP基因片段完整,开放阅读框为615bp,编码204个氨基酸,与已发表地衣芽孢杆菌脂肪酶基因(GeneID:3098655)相比,核酸序列相似为99.67%,推导编码氨基酸序列相似性为99.02%,该基因的获得为其异源表达及相关研究奠定了基础。; 刘生峰肖进文周蓓莉杨俊聂福平王昱周庆李应国; 关键词：地衣芽孢杆菌脂肪酶基因克隆

TaqMan探针荧光PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7方法的建立被引量：5: 2012年; 肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagie Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的传染病病原菌,以EHEC O157:H7标准菌株rfbE保守区设计一对特异引物和一条探针,建立了检测EHEC O157:H7核酸的荧光定量PCR检测方法。实验结果表明荧光定量PCR检测方法特异性好,最低检测限为20 cfu/mL,线性范围是102～108cfu/mL。稳定性试验表明批内变异系数和批间变异系数分别为2.06%和2.45%。; 刘生峰肖进文刘利成杨俊王昱聂福平周庆李应国; 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7 荧光PCR

重庆口岸4种重要外来入侵植物的鉴定被引量：1: 2017年; 文章对重庆万州港、重庆寸滩港、重庆植物种苗指定口岸及重庆汉氏哈泊装卸有限公司码头等4处主要港口进行本底调查,对危害较严重的长芒苋、紫茎泽兰、菟丝子及加拿大一枝黄花等外来入侵植物进行检疫鉴定研究。; 陆丽华周庆刘生峰滕少娜; 关键词：外来入侵植物紫茎泽兰菟丝子加拿大一枝黄花

羊痘病毒属病毒ORF132的克隆及序列分析被引量：1: 2011年; 目的为得到实验室现有的山羊痘、绵羊痘、疙瘩皮肤病病毒的ORF132基因序列,以便于后续研究。方法本实验在参考GenBank公布的羊痘病毒、疙瘩皮肤病病毒ORF132基因序列的基础上,设计了3对引物,对1株山羊痘病毒,1株绵羊痘病毒,两株疙瘩皮肤病病毒进行PCR扩增,克隆扩增产物,进行测序分析。结果测序结果在NCBI网站进行比对后发现其与标准毒株有较大相似性,同时存在不同的变异现象。结论羊痘病毒属的3种病毒同源性极高,相比之下,ORF132基因具有较好的特异性,通过该次的基因分析,可为PCR引物设计和基因芯片探针设计提供基础。; 丁森聂福平王昱肖进文周雪梅肖雯黄鹤刘生峰周庆李应国蔡家利; 关键词：羊痘病毒测序分析

食品中3种致病菌多重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4: 2012年; 建立用多重聚合酶链式反应(Multiplex polymerase chain reaction,mPCR)同时检测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的方法。以沙门氏菌的gyrB基因、单核细胞增生性李斯特菌的gyrB基因、金黄色葡萄球菌的coa基因作为目的基因,分别设计3对引物,通过优化反应体系,建立3种致病菌的多重PCR检测体系。采用单重PCR检测时,灵敏度可达0.423ng/mL(沙门氏菌)、2.5ng/mL(金黄色葡萄球菌)和0.36ng/mL(单核细胞增生性李斯特菌);而采用三重PCR检测时,灵敏度较单重PCR有所下降,分别为2.43ng/mL(沙门氏菌)、2.5ng/mL(金黄色葡萄球菌)、3.6ng/mL(单核细胞增生性李斯特菌)。初步建立能同时、快速、灵敏地检测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的三重PCR方法。; 周蓓莉肖进文刘生峰李应国周庆聂福平王昱杨俊; 关键词：食源性致病菌食品

蓝舌病病毒10型和20型及23型多重RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2018年; 为建立可同时鉴别检测蓝舌病病毒（BTV）10型、20型及23型的方法,本研究针对这三型病毒VP2基因保守区,设计合成了3对特异性引物,经过条件优化,建立了单管同时鉴别BTV 10型、20型、23型的多重RT-PCR方法。结果显示,该方法可同时扩增出BTV 10型696 bp、BTV20型293 bp和BTV 23型356 bp三条特异性的片段,对BTV其他基因型以及小反刍兽疫病毒（PPRV）、口蹄疫病毒（FMDV）的核酸均无扩增;该方法最低可检测1.696×103copies/L的BTV10、1.375×103copies/L的BTV20和1.317×103copies/L的BTV23。利用建立的多重RT-PCR方法对67份临床样品进行检测,结果与OIE推荐的BTV套式RTPCR方法符合率为100%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法特异性好,具有较强的检测敏感性,可用于蓝舌病病毒血清型的鉴别。; 黄秋华聂福平周庆杨俊王昱艾军唐昌杰陈冉越李应国王国民胡世君; 关键词：蓝舌病病毒多重RT-PCR

出口生皮宠物用品生产加工卫生质量的HACCP研究与应用: 肖进文刘尧志蔡金生周丽周庆; 该课题首次将HACCP原理应用于生皮宠物用品生产加工的卫生质量控制，属国内首创。课题通过研究产品加工过程带菌量的消长变化规律识别产品加工过程卫生质量的显著性危害；引入食品加工工艺中的热力杀菌理论——比奇洛（Bigelow...; 关键词：

地衣芽孢杆菌BL03脂肪酶基因LIP的克隆及序列分析: 2012年; [目的]克隆地衣芽孢杆菌BL03的脂肪酶基因LIP并对其序列进行分析。[方法]以地衣芽孢杆菌BL03基因组核酸为模板,PCR扩增得到地衣芽孢杆菌脂肪酶基因,用pMD19-T载体克隆后进行PCR鉴定及序列测定和生物信息学分析。[结果]测序结果表明该片段完整开放阅读框大小为615 bp,与已发表的地衣芽孢杆菌LTP基因(GeneID:3098655)相比,核酸序列相似为99.67%;推导编码氨基酸序列相似性为99.02%。[结论]该基因的获得为其异源表达及相关研究奠定了基础。; 刘生峰肖进文周蓓莉周庆聂福平王昱杨俊李应国; 关键词：地衣芽孢杆菌脂肪酶基因克隆

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周庆