吴耀丽
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达
- 2011年
- 【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。
- 孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼
- 关键词：克隆原核表达真核表达
- 猪XCL1基因原核表达、多克隆抗体制备及产物活性鉴定
- 趋化因子(chemokines, chemoattractant cytokines)是能够使细胞定向移动的小分子细胞因子,在促使细胞迁移和活化过程中发挥重要作用,对机体的免疫系统非常重要。淋巴细胞趋化因子(Lympho...
- 吴耀丽
- 关键词：多克隆抗体MTT
- 文献传递
- 猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定
- 2011年
- 目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响。结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800。重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料。
- 吴耀丽温俊歌孙岩张德礼
- 关键词：多克隆抗体间接ELISAMTT
