吕然博
- 作品数：9 被引量：30H指数：3
- 供职机构：兰考县人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胚嗅鞘细胞与鼠胚胎脊髓组织联合移植对大鼠脊髓损伤的治疗(英文)被引量：3
- 2006年
- 背景:脊髓损伤高发且后果严重,至今尚无有效措施挽救丧失的神经功能。哺乳动物嗅觉系统的一类特殊胶质细胞的移植引起关注。目的:观察人胚嗅鞘细胞和大鼠胚胎脊髓共同移植在促进大鼠横断脊髓轴索再生方面是否产生协同作用。设计:开放性实验。单位:无锡第三人民医院细胞室,苏州大学附属第一医院神经外科,东南大学附属中大医院神经外科。材料:实验于2002-09/2004-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成。①选取清洁级成年雌性SD大鼠36只,随机数字表法分成4组:人胚嗅鞘细胞组10只、鼠胚胎脊髓组10只、联合移植组10只,模型组6只。②取12周左右的流产新鲜人胚胎(产妇知情同意)用于嗅鞘细胞的培养纯化。③取孕14d的SD大鼠1只,施行剖腹手术将胎鼠连同胎膜一同取出,用于新鲜胚胎脊髓的制备。方法:①4组大鼠均建立脊髓半切洞模型。模型组在损伤洞腔内填塞明胶海绵加全培养基8μL,在损伤上下各1mm处注射相同培养基2μL;人胚嗅鞘细胞组明胶上给予嗅鞘细胞悬液8μL,损伤上下各1mm处注射细胞悬液2μL;鼠胚胎脊髓组将组织碎块直接填塞在洞腔内,外覆明胶;联合移植组将同样大小的胚胎脊髓填塞在洞腔内,然后用微量加样器将8μL的嗅鞘细胞悬液注入洞腔,外覆明胶,在洞腔上下各1mm处注射细胞悬液2μL,按层缝合肌层皮肤。②定期对各组大鼠进行行为学评定,结合病理学观察,并通过辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺逆行示踪技术,评价嗅鞘细胞和胚胎脊髓对神经元存活、纤维再生的影响。主要观察指标:①人胚嗅鞘细胞体外培养及纯化。②体外免疫细胞化学分析。③大鼠后肢运动功能BBB评分测定结果。④移植物及受损脊髓修复的免疫组化检测结果。⑤辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺示踪对各组被标记的皮质及中脑红核神经元的定量分析情况。结果:①人�
- 吴卫江惠国桢吕然博苗宗宁
- 关键词：细胞移植嗅神经脊髓损伤
- 人胚嗅鞘细胞不同取材及培养方法对纯度的影响被引量：14
- 2004年
- 目的通过对多种方法的比较获得较为理想的取材和纯化嗅鞘细胞的措施。方法应用3种不同的取材方法各获取20份样本,对取材引起的细胞损伤以及同一条件下培养10d后细胞纯度进行对照;在将细胞接种密度统一调整到106/ml后应用3种纯化方法各对20份样本处理并作纯度比较;同样密度和接种数量的原代细胞各取10份种植于3种不同培养皿,对细胞贴壁速度和最终纯度进行检验;对3种常用的细胞接种密度104/ml、105/ml、106/ml统一其他培养条件后作比较。结果我们从中筛选出最佳取材方法为直接挤压法,其获得的细胞纯度为82.56%,明显高于传统分离法(66.24%)和机械过滤法(61.35%);最好的纯化嗅鞘细胞方法为免疫吸附法,其细胞纯度达到94.66%,而差速贴壁法(81.59%)和化学试剂法(76.45%)均由于损失细胞太多不可取;同时发现包被培养皿对纯化细胞意义重大,P75包被组不仅培养细胞的纯度最高(87.69%),而且还有利于OECS的快速贴壁;高密度接种细胞对提高细胞的最终纯度也是非常有利,3组(接种密度分别为104/ml、105/ml、106/ml)培养10d后的p75阳性细胞率差异巨大,分别为34.61%,49.39%,71.55%。结论应用最佳取材及培养方法收获大量嗅鞘细胞将对其进一步的基础研究以及将来应用于临床奠定基础。
- 吴卫江惠国桢陆华吕然博
- 关键词：取材纯度细胞培养
- 人胚嗅鞘细胞的原代培养纯化和颅脑损伤的移植实验研究
- 第一部分:人胚嗅鞘细胞分离培养目的建立体外培养纯化人胚嗅鞘细胞的模型,观察不同时期人胚嗅鞘细胞形态学变化.结论本试验成功培养了人胚嗅鞘细胞,为进一步临床移植应用研究提供纯度较高的人胚嗅鞘细胞.第二部分:人胚嗅鞘细胞不同取...
- 吕然博
- 关键词：嗅鞘细胞脑外伤
- 文献传递
- 脊髓半切洞损伤后人胚嗅鞘细胞移植的时机选择被引量：3
- 2004年
- 目的 通过对脊髓损伤后不同时间进行嗅鞘细胞移植治疗产生的不同效果进行比较 ,从而选择细胞移植治疗脊髓损伤的最佳时机。方法 将 2 0只SD大鼠分成 3组 ,制成脊髓半切洞模型 ,第 1组予损伤后即刻移植细胞 ,其余 2组分别予伤后 2周和 4周移植等量的细胞 ,每组动物均饲养 1月后处死 ,观察比较治疗前后动物不同时间的神经功能评分 ,应用HRP TMB神经示踪计数伤侧中脑红核大细胞的数量 ,间接评价脊髓轴索再生的程度。结果 无论是神经功能评定还是中脑红核大细胞计数结果 ,伤后 2周和 4周组的动物均优于伤后即刻移植组 ,差异有显著性 ( P <0 0 5 ) ,伤后 4周组要优于 2周组 ,但 2组间差异无显著性。
- 吴卫江惠国帧吕然博苗宗宁王玲
- 关键词：脊髓损伤嗅鞘细胞
- 婴幼儿外伤后脑梗死65例临床分析
- 2011年
- 目的分析婴幼儿外伤后脑梗死的临床特点,探讨其发生机制和治疗方法。方法总结分析65例患儿的临床资料。结果婴幼儿外伤后脑梗死好发于单侧基底节区,CT病灶多呈类似圆形或卵圆形的低密度区,占位效应不严重或不明显,本组均痊愈。结论头外伤史明确,但较轻,多为偏瘫或单瘫。基底节区供血的动脉易受损害的解剖生理特点及婴幼儿自主神经功能不健全是其主要发生机制。应尽早给予钙通道阻滞剂、神经营养剂、改善脑血液循环药物、小剂量脱水剂和激素,配合早期开始功能锻炼,即可获得较好的效果。
- 白国书李国建王景波吕然博冯会宾宋彦涛陈慧峰王岩
- 关键词：婴幼儿颅脑损伤脑梗死
- 嗅成鞘细胞移植对中枢神经系统脱髓鞘疾病的治疗作用被引量：1
- 2004年
- 中枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)中的白质对各种有害因素诸如感染、中毒、退行性变及营养缺乏产生的典型反应是脱髓鞘性变。对脱髓鞘疾病的病理机制及转归、应用嗅鞘细胞(olfactoryen-sheathingcells,OECs)治疗该疾病的实验研究和临床应用前景、嗅鞘细胞同目前另两个热点细胞即雪旺氏细胞和少突胶质细胞作用的比较等一一进行阐述。针对该项成鞘细胞移植技术仍存在的不足,有必要对嗅鞘细胞的分子生物学基础进行更深入的研究。
- 吴卫江陆华惠国帧吕然博苗宗宁王玲
- 关键词：嗅成鞘细胞细胞移植中枢神经系统脱髓鞘疾病CNS
- 用于临床移植的不同时期人胚胎嗅鞘细胞的形态学变化被引量：3
- 2004年
- 目的:建立体外培养纯化人胚嗅鞘细胞的模型,观察不同时期人胚嗅鞘细胞形态学变化。方法:采用无血清培养技术,差速贴壁+免疫吸附的纯化方法,培养并纯化取自3～7个月人胚嗅球的嗅鞘细胞。根据GFAP免疫组化染色结果统计培养所得嗅鞘细胞纯度。结果:此培养方法可获得大量、高纯度的嗅鞘细胞。结论:成功培养了人胚嗅鞘细胞,为进一步临床移植应用研究提供纯度较高的人胚嗅鞘细胞。
- 吕然博杨天明惠国帧吴卫江苗宗宁王玲
- 关键词：移植手术形态学中枢神经系统
- 嗅鞘细胞的生物学特性及其在脊髓损伤再生中的应用被引量：3
- 2003年
- 脊髓损伤是一种严重威胁人类生命健康的疾患。既往观念认为,脊髓损伤后,将引起损伤平面以下运动、感觉和括约肌功能全部或部分永久丧失。一旦发生将给患者以至整个家庭及社会带来沉重的经济、精神负担。近年来,随着神经生物学,神经解剖学,细胞生物学的飞速发展,使得脊髓损伤与再生的研究有了突破性进展。现在研究认为脊髓损伤后一般治疗效果较差,究其原因主要是中枢神经系统的内在微环境不利于轴突的再生。因此,为了促进中枢神经系统损伤后轴突再生,改善损伤区再生微环境很重要。目前的治疗脊髓损伤主要有以下方法:阻滞抑制分子;清除抑制细胞;胚胎脊髓组织移植;周围神经移植;细胞移植:神经膜细胞,胚胎神经干细胞,嗅鞘细胞,转基因能分泌神经营养因子的细胞。其中嗅鞘细胞因在体外具有促进轴突再生并促进其较长距离延伸,髓鞘化脊髓轴突的能力而使之成为近年来最为吸引人注目的一种治疗脊髓损伤的有力工具。
- 吕然博杨天民
- 关键词：嗅鞘细胞生物学脊髓损伤神经再生细胞移植
- 人胚嗅鞘细胞与胚胎脊髓组织联合移植对大鼠脊髓损伤的治疗作用被引量：4
- 2006年
- 目的探讨人胚嗅鞘细胞(OECS)和大鼠胚胎脊髓组织(ESC)联合移植在促进大鼠横断脊髓轴索再生方面有无协同作用。方法将体外培养纯化的OECS及新鲜获取的胎鼠脊髓组织用作治疗大鼠脊髓半切洞损伤模型的移植物,通过对动物定期进行行为学评定,结合病理学观察,并通过辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺(HRP-TMB)逆行示踪技术,评价OECS和ESC对神经元存活、纤维再生的影响。结果OECS和ESC联合移植对损伤脊髓具有明显保护作用并能促进宿主脊髓轴突再生,ESC不能帮助再生轴索返回宿主组织;而OECS除能帮助再生轴索突破胶质屏障外更能使再生轴突髓鞘化,并具有一定的迁移能力。结论OECS和ESC联合移植在促进大鼠脊髓功能恢复中起到了互补和协同的作用。
- 吴卫江惠国桢吕然博苗宗宁
- 关键词：嗅鞘细胞胚胎脊髓脊髓损伤
