付洁
- 作品数：43 被引量：55H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学文化科学更多>>
- HER-2反义寡核苷酸对靶基因抑制作用的时相变化与微观分布研究
- 2008年
- 目的：研究靶向HER-2基因、具有不同活性的反义硫代寡核苷酸（S-ODNs）在SK—BR-3细胞内的微观分布差异，以及与靶基因转录和翻译抑制作用的关系。方法：运用实时定量PCR和Western印迹方法检测反义寡核苷酸对细胞靶基因转录和翻译抑制的时相性变化，用激光扫描共聚焦显微镜（LsM）观察6-羧基荧光素标记S-ODNs在靶细胞内的分布。结果：反义S—ODNs能够在mRNA与蛋白水平抑制HER-2的表达。不同序列的抑制活性各不相同，但最大抑制强度均出现于转染后48～72h之间，此后靶基因表达逐渐恢复。高活性序列主要均匀分布于细胞核，且持续时间长，低活性序列呈点状分布于胞质，少量分布于细胞核且持续时间短。结论：活性不同的S-ODNs亚细胞分布有显著区别，且分布变化与对靶基因的抑制效应具有对应关系。
- 李鹏尚明美王强付洁宋海峰刘秀文汤仲明
- 关键词：HER-2硫代反义寡核苷酸实时定量PCR亚细胞分布
- 阳离子脂质体-小干扰RNA复合物的处方优化及其治疗前列腺癌的体外研究被引量：3
- 2014年
- 目的研究小干扰RNA(siRNA)的新型阳离子脂质体的制备,考察此脂质体-小干扰RNA复合物对LNCap细胞中靶mRNA的沉默效应。方法采用逆向蒸发法制备新型阳离子脂质体,并加入鱼精蛋白和小牛胸腺DNA以增加其对小干扰RNA的压缩,评价其理化性质;以LNCap细胞为模型,以lipofectamine 2000作为阳性对照,用RT-PCR方法研究脂质体-小干扰RNA复合物对前列腺癌细胞中靶基因Plk-1的沉默效应。结果制备的脂质体(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵胆固醇的最佳比例为3∶1,粒径为(117±4.3)nm,Zeta电位为(47±3.6)mV;新型阳离子脂质体小干扰RNA复合物的入胞效率显著提高,荧光显微镜显示LNCap细胞内小干扰RNA含量明显升高。结论本实验所制备的阳离子脂质体具有较高转染效率,脂质体-小干扰RNA复合物的沉默效果显著。此新型阳离子脂质体有望成为小干扰RNA等基因治疗药物的高效传递系统。
- 王啸林葛华王清清李淼高新付洁宋海峰
- 关键词：阳离子脂质体小干扰RNALNCAP前列腺癌
- 辐射相关microRNA研究进展被引量：2
- 2014年
- microRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约22核苷酸的非编码单链RNA分子,主要以碱基互补方式与靶基因mRNA的3'非翻译区特异性结合,通过降解mRNA或抑制蛋白翻译合成而实现对靶基因的转录后调控。研究发现,miRNA在电离辐射诱导的生物学反应中发挥重要作用。我们从以下层面概述辐射相关miRNA的研究进展,即辐射调节miRNA表达、miRNA对辐射后DNA损伤的调节、miRNA参与的辐射生物学效应。
- 王瑜付洁宋海峰
- 关键词：电离辐射MICRORNA
- 酶连桥接技术在反义寡核苷酸药物癌泰得血浆毒代动力学分析中的应用
- 目的利用高灵敏度的酶联桥接分析法(ELBA),研究恒河猴静脉滴注不同剂量反义寡核苷酸癌泰得重复给药4周的毒代动力学(toxicokinetics,TK)行为。方法恒河猴分别在15,30 mg/kg,q2d的剂量下重复静脉...
- 孙云娟刘潜付洁王清清宋海峰
- 新型抗氧化肽SS31体外辐射防护作用及其机制的初步研究被引量：1
- 2012年
- 为探讨新型抗氧化剂SS31在体外对细胞的辐射防护作用和初步机制,用60Coγ射线照射细胞,用不同浓度的SS31对细胞进行干预,观察照射后细胞的增殖、生存状态、细胞内ROS水平和线粒体膜电位的改变,并将药物干预组和阴性对照组进行比较。结果发现:7.5 Gy的γ射线照射后24–72 h,细胞增殖活性显著降低;48 h内细胞凋亡和坏死比率显著增加,并伴随胞内ROS增长、线粒体膜电位下降和细胞周期阻滞。SS31能明显改善这些反应,药物干预组与阴性对照相比有统计学差异。通过本实验,观察到了SS31具有明显的体外辐射防护作用,提示其有潜力作为一种新型的辐射防护剂。
- 邹佳杨伟志王清清付洁董立厚向慎思高新孙云娟宋海峰
- 关键词：抗氧化辐射防护
- siRNA作为基因治疗药物的研究难题被引量：2
- 2007年
- RNA干扰(RNA i)现象的发现与研究,为基因治疗带来新的契机,虽然小干扰RNA(siRNA)较单链反义寡核苷酸显示了更好的稳定性与基因沉默效果,但却同样面临基因治疗药物存在的共同问题,如体内的靶向性与有效性、完善的定量分析方法等等。因此,siRNA作为治疗药物还有诸多困难需要克服。目前的研究主要集中在:修饰方式与递送系统研究,以提高siRNA体内的稳定性与靶向性;siRNA定量分析方法学研究,以考察其体内药动学行为并进一步阐明其体内作用机制。
- 付洁宋海峰钱小红
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA基因治疗药动学
- 慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平被引量：3
- 2013年
- 目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293T细胞,经嘌呤霉素(puromycin)筛选后获得稳定表达慢病毒介导UBC9 shRNA的混合细胞集落,分别用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测UBC9的表达情况,瞬时转染方法检测UBC9表达水平对ERβ类泛素化修饰水平的影响。结果建立了稳定敲低UBC9的293T细胞株,UBC9降低能够抑制ERβ类泛素化修饰水平。结论 UBC9在ERβ类泛素化修饰反应中发挥重要作用。
- 李玮妮陈立涵程龙徐小洁付洁关鑫刘婕张浩叶棋浓
- 关键词：慢病毒属UBC9ERΒRNA干扰
- 靶向人乙型肝炎病毒siRNA的构效关系研究被引量：1
- 2008年
- 目的:在体外模型HepG2.2.15细胞中研究靶向人乙型肝炎病毒(HBV)小分子干扰RNA(siRNA)的构效关系。方法:靶向HBV基因不同位置合成21条siRNA,分析多条siRNA在HBV 8个基因型(共120条序列)中的保守性情况以及siRNA的二级结构特点。利用乙肝表面抗原(HBsAg)ELISA定量方法与荧光定量PCR方法检测siRNA在不同浓度下(1,10,100 nmoL/L)对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒HBsAg和mRNA表达的抑制情况。SPSS进行定量构效关系(QSAR)分析。结果:半数(13/21)的siRNA以浓度依赖模式抑制靶基因的表达(P<0.05)。其中537,672,1263,1658等序列活性显著高于阳性对照序列。QSAR分析显示siRNA基因型同源性(P<0.01)、S/P和X区(P<0.05)与siRNA活性有紧密关系;重叠基因[S/P/前基因组(pregenome)mRNA]区域局部靶mRNA二级结构保守性、发卡环、多茎环和茎的碱基数目与siRNA活性相关(R=0.994,P=0.009)。结论:siRNA的靶点序列、siRNA本身的一级序列与二级结构对其抑制靶基因的活性有显著影响,具有明显的构效关系。优选siRNA可能作为治疗多基因型乙肝感染的候选序列。
- 付洁汤仲明高新赵帆钟辉李鹏温茂荣孙效宋海峰钱小红
- 关键词：定量构效关系重叠基因
- 电穿孔基因导入技术在临床前与临床试验中的应用
- 2009年
- 电穿孔基因作为非病毒递送手段之一,可安全、有效地将外源核酸导入靶组织或器官。近年来用电穿孔法进行基因治疗的报道不断增多,优势日趋显著。本文重点阐述了电穿孔在基因治疗中的优势、影响因素及在临床前和临床试验中应用。
- 栾好飞付洁宋海峰
- 关键词：电穿孔基因治疗临床前研究
- 前列腺表面膜抗原适配子-阳离子脂质体-双小干扰RNA复合物治疗前列腺癌的体外分析被引量：3
- 2016年
- 目的制备基于前列腺表面膜抗原(prostate surface membrane antigen,PSMA)适配子靶向前列腺癌的双小干扰RNA(small interference RNAs,siRNA)的新型阳离子脂质体,并分析该适配子-脂质体-双siRNA复合物对前列腺癌细胞的靶向性及抑制增殖作用。方法采用逆向蒸发法制备阳离子脂质体-双siRNA[Polo样激酶1(Polo-Like Kinase 1,PLK1)和B7H3(B7-homolog 3)基因]复合物,并对阳离子脂质体、鱼精蛋白与总si RNA比例进行优化。脂质体包裹双siRNA后,通过特异反应插入PSMA适配子A10。对PSMA适配子介导的双siRNA靶向入胞递送系统进行粒径和Zeta电位评价;以LNCap细胞为模型,Western blot法检测脂质体-双功能si RNA对靶基因的沉默效应;基于竞争结合的流式法检测递送系统对靶细胞的亲和性;增殖活性试验检测递送系统体外对前列腺癌细胞的抑制作用。结果阳离子脂质体与总siRNA的最佳比例为300∶1,鱼精蛋白与总siRNA的最佳比例为1.7∶1。A10-脂质体-双siRNA递送系统可以与细胞表面PSMA抗原结合,具有较高的细胞亲和性;对LNcap细胞中PLK1和B7H3基因可以高效沉默;对肿瘤细胞增殖的抑制作用大于单独沉默PLK1或B7H3基因,双沉默siRNA递送系统在抑制肿瘤细胞生长方面具有协同效应。结论制备的PSMA适配子-脂质体-双siRNA递送系统具有前列腺癌细胞靶向性,且在抑癌方面可以发挥协同作用,提示了该双功能siRNA基因治疗药物系统的潜在应用性。
- 付洁王啸林刘玉杰张晶王芳向慎思高新王清清宋海峰
- 关键词：小干扰RNA适配子PLK1前列腺癌
