黄佳俊
- 作品数：15 被引量：10H指数：2
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程理学更多>>
- 一种DBAT突变酶R363H及其应用
- 本发明公开一种DBAT突变酶R363H及其应用。所述的突变酶是氨基酸序列为SEQ ID NO：2的DBAT酶的第363位氨基酸由Arg改变为His；其氨基酸序列为SEQ ID NO：14。本发明成功构建出突变酶R363H...
- 林俊芳郭丽琼尤琳烽叶志伟黄佳俊
- 文献传递
- 白藜芦醇在酿酒酵母中的组合表达被引量：2
- 2013年
- 将克隆自拟南芥的4cl基因和巨峰葡萄的rs基因,利用降落重叠延伸PCR的方法,成功构建了含有G418抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42K-4CL以及含有潮霉素抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42H-RS。采用LiAc/SS carrier DNA/PEG法将含有目的基因的2个载体共同转化至酿酒酵母工业菌株EC1118中,通过PCR及酶切鉴定等方法验证重组工程菌。以对香豆酸为底物,将获得的酿酒酵母工程菌于YPD液体培养基中发酵(25℃,150 r/min,96 h),发酵液用乙酸乙酯抽提后采用高效液相色谱(HPLC)法进行检测,其结果显示发酵产物中白藜芦醇的含量为0.78 mg/L。这表明,拟南芥的4cl基因与巨峰葡萄的rs基因在酿酒酵母工程菌中成功得到了表达,并且表达产物利用对香豆酸为前体物质合成了目标产物白藜芦醇。该研究为进一步实现白藜芦醇在酵母中的工业化生产奠定了基础。
- 孙萍郭丽琼梁景龙林俊芳黄晓燕黄佳俊
- 关键词：白藜芦醇酿酒酵母白藜芦醇合酶
- 重组枯草芽孢杆菌素subtilosin A基因的合成及其在毕赤酵母中的表达
- 2016年
- 人工改造并合成subtilosin A的结构基因(rsbo A),并在毕赤酵母中诱导表达重组蛋白。结果表明:经阳性大肠杆菌转化子菌落PCR和测序鉴定,表明重组质粒p PIC9K-sbo构建正确;经阳性酵母转化子的菌落PCR产物电泳检测,可见清晰目的基因条带,证明重组酵母GS115-p PIC9K-sbo构建正确;经枯草芽孢杆菌素蛋白电泳检测,可见明显蛋白条带,表明重组rsbo A基因在毕赤酵母GS115中获得了分泌表达。在抑菌效果检测中,重组酵母工程菌的发酵液对铜绿假单胞菌具有一定的抑菌活性。本研究开创了有望替代抗生素的小分子肽细菌素异源表达新思路,为枯草芽孢杆菌素subtilosin A的工业化生产奠定了基础。
- 陈柏雄黄佳俊林俊芳郭丽琼陈俊飞刘英丽
- 关键词：基因重组毕赤酵母抗菌活性
- 乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用
- 本发明公开一种乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用，属于生物分子催化领域。本发明利用乙酸酐作为酰基供体可替代昂贵的天然底物乙酰CoA参与DBAT酶促反应，以乙酸酐作为酰基供体参与酶促反应下的DBAT酶活力比乙...
- 林俊芳欧阳萍兰魏韬郭丽琼黄佳俊
- 文献传递
- DBAT酶的同源建模及与多样性底物对接被引量：3
- 2018年
- 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰基转移酶(DBAT)是紫杉醇生物合成途径中催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ生成巴卡亭Ⅲ的一个关键酶,由于其催化效率低,使得天然巴卡亭Ⅲ和紫杉醇含量都很低,紫杉醇细胞工厂的构建也受到严重制约。本研究利用MODELLER同源建模软件,构建了未报道晶体结构的DBAT三维结构模型,结合分子动力学模拟DBAT在稳定状态前后氨基酸的位置变化,分析关键氨基酸改变对酶催化活性的影响,获得位点His162和Arg365。利用虚拟定点突变和分子对接技术,推断His162为关键活性氨基酸残基,Arg365的空间位阻效应可影响催化反应过程。本研究为后续DBAT催化机理的解析提供潜在靶点,并为DBAT分子设计奠定基础。
- 黄佳俊林淑玲欧阳萍兰魏韬郑倩望叶志伟叶志伟林俊芳
- 关键词：紫杉醇同源建模分子对接
- 一种DBAT突变酶D166H及其应用
- 本发明公开一种DBAT突变酶D166H及其应用。所述的突变酶D166H是氨基酸序列为SEQ？ID？NO：2的DBAT酶的第166位氨基酸由Asp改变为His；其氨基酸序列为SEQ？ID？NO：6。该突变酶在利用乙酰辅酶A...
- 郭丽琼林俊芳尤琳烽黄佳俊叶志伟
- 文献传递
- DBAT非天然底物制备巴卡亭Ⅲ的微生物细胞工厂创制研究
- 紫杉醇是一种来源于红豆杉植物的天然抗癌活性物质，其作用机制通过促进微管蛋白聚合、防止微管的解聚达到抗癌效果，已广泛用于乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌等多种癌症的临床治疗。紫杉醇每年的市场总价值超10亿美元，其需求量不断增加...
- 黄佳俊
- 关键词：乙酰基转移酶微生物细胞工厂化生产
- 乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用
- 本发明公开一种乙酸酐作为酰基供体在参与DBAT酶促反应中的应用，属于生物分子催化领域。本发明利用乙酸酐作为酰基供体可替代昂贵的天然底物乙酰CoA参与DBAT酶促反应，以乙酸酐作为酰基供体参与酶促反应下的DBAT酶活力比乙...
- 林俊芳欧阳萍兰魏韬郭丽琼黄佳俊
- 文献传递
- 酿酒酵母工程菌生物合成白藜芦醇被引量：5
- 2016年
- 目的:构建能以酪氨酸为底物产白藜芦醇的重组酿酒酵母。方法:利用降落-重叠延伸PCR法和一步等温法,将拟南芥的4-香豆酰辅酶A连接酶基因(4cl)、巨峰葡萄的白藜芦醇合酶基因(rs)以及粘红酵母的酪氨酸解氨酶基因(tal)分别构建含有不同抗性筛选标记的附加型酵母表达载体,采用Li Ac/SS carrier DNA/PEG法转化酿酒酵母工业型菌株EC1118,通过高效液相色谱法检测重组酵母发酵产物。结果:成功获得酵母工程菌EC1118-H-TTC-K-T4C-TRC,以3 mmol/L酪氨酸为底物,28℃,150 r/min摇床避光发酵5 d,发酵液中白藜芦醇的产量为6.1979 mg/L。结论:成功构建一株能以酪氨酸为底物产白藜芦醇的工业型重组酿酒酵母,为白藜芦醇的工业化生产进一步奠定了基础。
- 孙萍郭丽琼黄佳俊黄晓燕梁景龙林俊芳
- 关键词：白藜芦醇酿酒酵母酪氨酸生物合成基因表达
- 多基因整合型载体转化酿酒酵母生物合成白藜芦醇被引量：2
- 2018年
- 目的:以整合型载体p RS303K为框架,以来源于拟南芥的4-香豆酰辅酶A连接酶基因(4cl)和巨峰葡萄的白藜芦醇合酶基因(rs)为目标基因,采用一步等温法构建了表达白藜芦醇的整合型酵母表达载体p RS303KT4C-TRC。方法:采用Li Ac/SS carrier DNA/PEG转化法把表达载体成功转化酿酒酵母工业型菌株EC1118,经筛选和PCR鉴定获得酵母工程菌株EC1118-303K-T4C-TRC。酵母工程菌株采用添加和不添加抗生素的发酵培养。结果:在培养基添加抗生素和不加抗生素的发酵液中白藜芦醇的含量分别为3.4110 mg/L和3.4710 mg/L,两者差异不显著。结论:两个关键酶基因成功整合到酵母的染色体基因组中并得到表达,工程菌株在传代中不受选择压力影响,稳定组合表达白藜芦醇。
- 黄佳俊林俊芳孙萍梁景龙叶志伟郭丽琼
- 关键词：白藜芦醇酿酒酵母生物合成基因表达
