马文峰 作品数:8 被引量:16 H指数:2 供职机构: 华东理工大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家科技重大专项 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 化学工程 轻工技术与工程 医药卫生 生物学 更多>>
重组大肠杆菌的发酵方法 本发明公开了一种重组大肠杆菌的发酵方法,其一在发酵过程中用全合成培养基替代现有技术中的复合培养基;其二采用了独特的外源基因诱导表达方法,使重组大肠杆菌的发酵既可实现高密度、又可实现高表达。因此,本发明具有工艺新颖、菌体收... 庄英萍 马文峰 丁满生 郭美锦 储炬 张嗣良文献传递 重组大肠杆菌两次诱导高密度、高表达代谢通量分析 <正> 微生物细胞代谢过程是分子尺度、细胞尺度及反应器介尺度等多尺度的,为了实现代谢过程的最优化,我们必须对代谢过程进行跨尺度的测量与控制;代谢过程的另一显著特点,即生命过程所特有的信息流、物质流、能量流是在不断的变化的... 庄英萍 马文峰 丁满生 储炬 张嗣良利用大肠杆菌高效表达人载脂蛋白AI及其性质分析 被引量:1 2005年 载脂蛋白AI(apolipoproteinAI,apoAI)是高密度脂蛋白HDL的主要组成成分 ,流行病学研究表明apoAI的含量决定血浆中HDL的高低 ,而HDL具有胆固醇逆向转运的功能 ,起到降低冠心病发生概率的作用。通过大肠杆菌表达系统来生产apoAI的蛋白原proapoAI,蛋白的表达形式为包涵体 ,通过疏水柱进行柱上复性。同时在proapoAI和apoAI之间设计一个酸水解位点 ,通过将蛋白原proapoAI进行酸水解来得到成熟蛋白apoAI。最终得到的成熟蛋白apoAI在结构分析和脂结合特性上都与天然的apoAI相似 ,从而为该蛋白的工业生产上提供了一个良好的基础。 丁满生 马文峰 张梅芳 刘大涛 郭美锦 庄英萍 储炬 张嗣良 龚邦强关键词:载脂蛋白AI 包涵体 复性 重组人载脂蛋白ApoA-I表达条件的优化 被引量:2 2004年 对大肠杆菌DH5α发酵培养表达人载脂蛋白ApoA I的发酵条件进行了优化研究。结果表明 :将重组质粒pBV2 2 0 ApoA I转化不同的大肠杆菌宿主菌 ,筛选得高表达水平的E coliDH5α pBV2 2 0 ApoA I表达系统 ,摇瓶发酵表达率为 2 2 2 % ,BL2 1 (DE3)的表达水平与其相当 ,而TG1的表达率只有 1 1 %。在FMG 5L发酵罐进行发酵条件优化 ,认为细胞生长培养的最适pH为 7 0 ,重组ApoA I表达时的最适pH为 7 4。分批发酵的初始糖浓度为 3 0g·L 1,且碳氮源的最佳比例为 2∶1 ,使重组ApoA I表达率达总蛋白的 40 % ,浓度达 2 86g·L 1。 马文峰 丁满生 郭美锦 庄英萍 储炬 张嗣良关键词:大肠杆菌 两次诱导实现重组大肠杆菌高密度、高表达研究 被引量:5 2005年 通过不同温度诱导模式对大肠杆菌高密度,高表达的研究,确定两次升温诱导模式实现大肠杆菌高密度、高表达重组人载脂蛋白的目的。实验证实两次诱导成功的避免了乙酸对高密度、高表达的影响,最终发酵的细胞密度OD600达150,蛋白表达量4.8g·L-1,证明两次升温诱导的发酵方法在高密度、高表达外源蛋白上是成功的,从而为基因工程菌规模化生产奠定了基础。 马文峰 庄英萍 郭美锦 丁满生 储炬 张嗣良关键词:重组大肠杆菌 重组人载脂蛋白APOA-I<,MILANO>的高密度、高表达工艺研究 该论文在宿主菌的筛选,培养基、培养条件优化等方面进行了较系统的研究.特别是利用重组大肠杆菌DH5 α/PBV220,采用全合成培养基,在FMG-5L罐上通过创新性的两次升温诱导发酵方法,实现了高密度、高表达人载脂蛋白AP... 马文峰关键词:重组大肠杆菌 发酵动力学 代谢流 文献传递 网络资源链接 温度诱导模式对重组大肠杆菌质粒拷贝数的影响 被引量:9 2006年 对于大肠杆菌温度表达系统,温度的选择和变化对外源基因的表达至关重要,最直接的因素表现在对质粒拷贝数的影响上。本文通过重组大肠杆菌DH 5α表达载脂蛋白A I-M ilano来分析不同温度诱导模式对质粒拷贝数的影响,确立了二次升温诱导(30°C→42°C→37°C→42°C)有利于菌体质粒拷贝数的增加,从而提高目的蛋白的表达量,结果表明:二次升温诱导比一次升温诱导蛋白表达量增加80%。 丁满生 马文峰 郭美锦 储炬 张嗣良 龚邦强关键词:温度 质粒 拷贝数 大肠杆菌 重组人载脂蛋白AI_(米兰变体)在大肠杆菌中的高效表达 2005年 通过大肠杆菌表达系统来生产重组人载脂蛋白AIM(proapolipoprote in AIM,proapoAIM)。整个proapo AIM基因被分成两个片断,通过RT-PCR的方法合成。在对该基因的上游部分进行改造后,插入到表达载体pBV220中进行表达。蛋白的表达量达到45%左右,蛋白的表达形式为包涵体。包涵体通过疏水柱进行柱上复性,复性后的蛋白具有良好的生物活性。 丁满生 马文峰 张梅芳 刘大涛 郭美锦 庄英萍 储炬 龚邦强关键词:载脂蛋白AI MILANO 包涵体 复性