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甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒检测基因芯片的制备与初步应用被引量：10: 2010年; 建立DNA微列阵技术检测甲型H1N1和季节性H1N1流感病毒的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。通过生物医学数据库甲型H1N1流感病毒及季节性H1N1亚型流感HA与NA基因进行检索和筛选,应用分子生物学软件,进行序列分析、引物及探针设计,并进行验证。试验所设计的探针可以对甲型H1N1流感与季节性H1N1流感病毒进行区分,用该方法检测了长春市CDC送检的6份疑似甲型H1N1流感病毒临床病例,4份阳性,检测结果同实时荧光定量PCR方法一致。结果表明,利用本研究建立的DNA微列阵技术检测甲型H1N1流感病毒方法,特异性和敏感性强,可作为甲型H1N1流感病毒临床标本检测方法。; 孙珊珊沈国顺田明尧鲁会军李昌李霄颜雯谭磊李洋韩佳丽金宁一; 关键词：甲型H1N1流感病毒核酸探针

Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验被引量：1: 2008年; 目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法:通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDVP1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。; 牟伟锋金宁一鲁承霍晓伟胡博屈勇刚常巧呈于长勇颜雯丛艳昭曹世诺; 关键词：FMDV

用于检测A型流感病毒的基因芯片、其制备方法及应用: 本发明涉及一种A型流感病毒分型的基因芯片、其制备方法，检测方法和检测试剂盒，其中基因芯片包括固相载体和固定在该载体上的寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针含有从一种或多种A型流感病毒的HA、NA和/或M基因选取的DNA片段。本发...; 金宁一田明尧鲁会军李昌李霄金扩世南文龙谭磊张金双赵翠青孙珊珊颜雯

双向转录/表达载体的构建及重配H9N1亚型流感病毒的拯救: 禽流感(Avian Influenza, AI)即禽流行性感冒,是一种烈性传染病,被OIE归为A类传染病。近年来,AI已成为为人类面临的最严重的健康威胁之一。本研究以pcDNA3质粒为骨架自行构建双向转录/表达载体pH...; 颜雯; 关键词：病毒拯救共转染禽流感病毒; 文献传递

重配H9N1亚型流感病毒感染性克隆的构建及鉴定: 2012年; 为了研究禽流感病毒的反向遗传,试验采用霍夫曼发明的8质粒拯救系统,将分离得到的AIV Isolate3(H9N2)基因组,通过RT-PCR得到HA基因,并克隆到以pcDNA3质粒为骨架自行构建的双向转录/表达载体pHW2008上,得到HA转录/表达质粒,再将HA表达质粒与构建好的包含A/Puerto Rico/8/34(H1N1)7个内部基因双向转录/表达质粒共转染人肾上皮细胞(293T)与犬肾细胞(MDCK)混养细胞。结果表明:试验成功构建了重配H9N1亚型流感病毒减毒株。; 龙川赵权田明尧杨晓琳李洋任静强吕亚楠王成颜雯金宁一; 关键词：禽流感病毒病毒拯救

用于检测A型流感病毒的基因芯片、其制备方法及应用: 本发明涉及一种A型流感病毒分型的基因芯片、其制备方法，检测方法和检测试剂盒，其中基因芯片包括固相载体和固定在该载体上的寡核苷酸探针，该寡核苷酸探针含有从一种或多种A型流感病毒的HA、NA和/或M基因选取的DNA片段。本发...; 金宁一田明尧鲁会军李昌李霄金扩世南文龙谭磊张金双赵翠青孙珊珊颜雯; 文献传递

国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立: 2009年; 目的建立口蹄疫病毒(FMDV)Asia1型江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法。方法在比较大量国内外FMDV流行毒株序列的基础上,设计检测不同基因型Asia1型FMDV江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联PCR引物,优化单项和二联RT-PCR反应条件,并进行特异性及相关病毒检测。结果优化的单项和二联RT-PCR特异性均良好,检测9份FMDV,病料的结果与其基因序列测定结果完全一致。结论已建立了FMDVAsia1型江苏/05谱系和新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法,为FMDV的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。; 于长勇金宁一王春凤鲁会军胡博刘昊张丹牟伟锋丛艳昭谷长维常巧呈刘存霞颜雯叶明; 关键词：口蹄疫病毒 RT-PCR

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颜雯