阚方明
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗IL-1βscfv抗体与TNF—α可溶性受体融合蛋白的构建及其生物学活性分析被引量：2
- 2012年
- 目的设计原核表达抗人白细胞介素．1B单链抗体（IL-1βscfv）与TNF．仪可溶性受体的融合蛋白，并分析其生物学活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。方法利用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增了人肿瘤坏死因子I型受体胞外区基因片段，与抗人IL-1βscfv通过抗体铰链区融合，克隆至pET27b（＋）表达载体中，构建成pET-IL-1scfv：TNFR1质粒；转化大肠杆菌Rosetta进行表达。从包涵体中纯化得到IL-1scfv：TNFR1蛋白，进行IL-1scfv：TNFR1的鉴定及活性检测。结果ELISA结果证明，IL-1scfv：TNFRl可以分别结合hIL-1β和hTNF-α，并呈现剂量依赖性，表明IL-1scfv：TNFR1的单链抗体部分和可溶性受体部分可以各自形成正确的空间构象；免疫斑点分析证明，IL-1scfv：TNFRl与hTNF—α结合后仍可以结合hIL-1β，具有同时结合hlL-1β和hTNF-α的两种靶分子的能力，表明IL-1scfv：TNFR1的两个部分不会相互影响与靶分子的结合。活性测定结果表明，IL-1scfv：TNFRl可以有效封闭肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒效应，具有显著抑制hlL-1β促进L929细胞增殖的活性，IL-1scfv：TNFR1对两种靶分子的拮抗作用均呈现明显的剂量依赖性。结论成功构建了能够同时结合hIL-1β和hTNF-α两种靶因子的双特异性IL-1scfv：TNFR1融合蛋白，并能有效抑制hTNF-α和IL-1β的生物活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。
- 阚方明任桂萍郭茉韩阳齐剑英张宇张雅坤李德山
- 关键词：白细胞介素1Β肿瘤坏死因子Α类风湿关节炎
- FGF21-L-Fc融合蛋白表达及其降糖作用初步评价被引量：4
- 2011年
- 成纤维细胞生长因子-21(FGF21)是FGF家族成员之一,最近发现具有独立调节血糖的作用。为了提高FGF21稳定性来达到更好的药效,通过柔性接头连接,制备重组融合蛋白FGF21-L-Fc,并对其生物学活性和体内药效学进行初步研究。纯化后的FGF21-L-Fc融合蛋白经鉴定,其分子量和特异性均与理论值相符。经微量化的GOD-POD法检测表明,FGF21-L-Fc融合蛋白能刺激体外培养的已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖吸收,其葡萄糖消耗率与野生型相比有很大提高;在STZ造模糖尿病小鼠体内,其药效比野生型持续时间长。结果表明,改造的蛋白比野生型药效更持久,为以后FGF21的临床应用奠定了基础。
- 姚文兵任桂萍韩阳曹宏伟高红梅阚方明王琪李德山
- 关键词：葡萄糖吸收稳定性
- 具有中和活性的抗人IL-1β单链抗体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建抗人IL-1β单链抗体(anti-hIL-1βscFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行生物学活性检测。方法使用PCR的方法从含有抗人IL-1β抗体基因的质粒中获得抗人IL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b中,构建重组表达载体pET-27b-hIL-1βscFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后诱导表达,经凝胶过滤色谱柱上复性得到可溶的抗人IL-1β的scFv蛋白。使用ELISA方法鉴定scFv抗体的特异性结合活性,使用Real time-PCR的方法检测scFv抗体的中和活性。结果成功地对抗人IL-1β单链抗体进行诱导、表达和复性,蛋白相对分子质量约为28 000。ELISA结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。Real time-PCR实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断人IL-1β刺激人T细胞表达细胞因子IL-18及IL-1β的作用。结论通过原核表达系统得到的抗人IL-1β单链抗体经复性后,与人IL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和活性,为进一步研究人IL-1β相关疾病及其治疗性抗体奠定了基础。
- 李宁徐黎明李天鹤任桂萍陈睿张宇阚方明叶贤龙谷学佳丁良君李德山
- 关键词：IL-1Β单链抗体包涵体复性中和活性
- scBsAb1/17双特异性抗体对小鼠类风湿性关节炎模型的治疗效果被引量：5
- 2013年
- 目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,小鼠成模后开始治疗,每2 d给药1次,治疗29 d。治疗结束后对小鼠关节炎指数进行临床评分,检测各组小鼠血清中CII抗体、CII特异性刺激的脾细胞增殖指数和脾脏中IL-2、IL-1β、IFN-γ、IL-6和TNF-α等细胞因子的表达水平。结果与CIA模型对照组相比,所有治疗组都能明显减轻CIA小鼠的临床症状,并明显降低血清中CII抗体水平、脾细胞增殖指数及脾脏中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量。相同剂量下scBsAb1/17治疗组的脾细胞增殖指数明显低于anti-IL-1βscFv治疗组(P<0.05);并且scBsAb1/17治疗组小鼠脾脏中IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量明显低于anti-IL-1βscFv和anti-IL-17AscFv单独治疗组(P<0.01或P<0.05)。结论 scBsAb1/17及单价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果;不同剂量scBsAb1/17对CIA模型鼠的治疗效果呈剂量依赖性;相同剂量条件下,scBsAb1/17的治疗效果要优于单价抗体。
- 齐剑英郭茉叶贤龙阚方明张宇郝智超徐黎明任桂萍王文飞李德山
- 关键词：双特异抗体IL-1Β
