钟丽婵
- 作品数：15 被引量：53H指数：6
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生电子电信更多>>
- niaD基因与uidA基因共转化糖化酶高产菌株Aspergillus niger T21被引量：2
- 1999年
- 从AspergillusnigerT21分离到自发性的氯酸盐抗性株，再经氮源生长试验获得硝酸盐还原酶缺陷的niaD突变体N44。用含有niaD的质粒pSTA10转化N44，转化频率为5个／μg（转化子／DNA）。转化子的Southern印迹分析表明niaD基因同源整合到N44的染色体DNA中。pSTA10与含葡糖苷酸酶基因（uidA）的质粒pNOM102共转化N44，共转化频率为40％。共转化子的GUS（葡糖苷酸酶）活力测定结果表明uidA基因已在N44中表达。由此可知，以niaD为选择标记，uidA为报告基因，以N44为受体的转化系统可用于丝状真菌启动子功能检测和已知调控序列的功能分析。
- 钟丽婵范晓春唐国敏
- 关键词：报告基因
- 黑曲霉糖化酶基因表达调控的研究 Ⅰ.高产及低产菌株糖化酶表达的总体分析和比较被引量：14
- 1997年
- 对黑曲霉(Aspergillus niger)高产菌株T21和原始菌株3.795糖化酶的基因表达从菌体生长、酶形成动力学、glaA基因拷贝数、糖化酶mRNA含量及其稳定性等多个方面进行了分析和比较。T21和3.795糖化酶的大量产生均自菌体生长的静止期开始。培养72h后,两者的菌体浓度相同,但T2l产生的糖化酶量为3.795的10～17倍,说明糖化酶产量的差异不是因生物量或酶起始合成期不同引起的,而是由于细胞内酶表达量不同引起的。Northern杂交显示T21总RNA中糖化酶mRNA含量为3.795的4.3～4.4倍.两菌株glaA基因拷贝数及糖化酶mRNA的稳定性分析结果排除了这两个因素的影响,因此T21糖化酶mRNA含量的增加主要是glaA基因转录水平提高的结果。T21与3.795之间糖化酶水平差异(10～17倍)与糖化酶mRNA水平差异(4.3～4.4倍)的不一致性,提示T21和3.795之间除转录水平外可能还存在着翻译水平上的差异(2～4倍)。此外,T21和3.795均存在着对糖化酶基因表达的碳源调控机制,根据两者在淀粉、麦芽糖和葡萄糖培养条件下所产生的mRNA比均为4:3:2,可以认为,这种调控作用发生在转录水平上,并且具有相同的调控方式。
- 乔殿华唐国敏钟丽婵郗乔然杨开宇
- 关键词：黑曲霉糖化酶基因表达
- 黑曲霉糖化酶基因表达调控的研究──Ⅱ.A.niger T21和3.795glaA基因5'调控区功能的体内分析被引量：8
- 1998年
- 对糖化酶高产菌株A.nigerT21和原始菌株Aniger3．795的glaA5＇上游区的序列分析证明，两者在1．5kb的区域内有9个部位的碱基不同。为考察这些碱基差异是否是引起T21glaA基因转录水平提高的原因，构建了以T21和3．795glaA基因转录调控区及A．nidulans trpC基因终止子为表达元件的E．colihph基因表达载体（pXH2和pGH1），用pXH2和pGH1分别转化A.nigerT21，对两种转化子的HmB抗性水平测定和Southern杂交分析显示，在转化子XH2C和GH1C中，pXH2和pGH1以相同拷贝数（2拷贝串联）整合到染色体DNA的相同位置上，XH2C的HmB抗性水平（3000μg／ml）为GH1C（1500μg／ml）的2倍。这一结果表明，诱变引起的调控区序列改变使T21glaA基因转录调控区的功能水平比3．795提高1倍。
- 乔殿华钟丽婵唐国敏杨开宇
- 关键词：黑曲霉糖化酶基因表达
- 黑曲霉3.795glaA基因及其5'调控区的克隆和序列分析被引量：5
- 1998年
- 黑曲霉Ｔ２１是由黑曲霉３．７９５经诱变育种获得的糖化酶高产菌株，为阐明其高产的分子机制，由黑曲霉３．７９５克隆了糖化酶结构基因及其５′旁侧序列，并与黑曲霉Ｔ２１的相应序列进行了比较．由黑曲霉３．７９５菌丝体分离染色体ＤＮＡ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明，糖化酶结构基因位于～２．５ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＥｃｏＲⅤ染色体ＤＮＡ片段上，在此ＥｃｏＲⅠ位点上游约１．０ｋｂ处有一ＳａｌⅠ位点．为构建糖化酶结构基因及其５′旁侧序列的基因组文库，该染色体ＤＮＡ分别用ＥｃｏＲⅠ＋ＥｃｏＲⅤ和ＥｃｏＲ＋ＳａｌⅠ消化，琼脂糖凝胶电泳分离并回收长度在１．０ｋｂ左右和２．５ｋｂ左右的ＤＮＡ片段，分别与ｐＵＣ１９载体连接后转化入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５．用原位杂交方法筛选到了携带糖化酶基因编码区及其１５０５ｂｐ５′旁侧序列的阳性克隆．对克隆片段的ＤＮＡ序列进行了测定并与黑曲霉Ｔ２１的相应序列进行了比较，结果表明，在糖化酶基因编码区及其１５０ｂｐ３′非编码区内，未发现碱基差异，但在－３４０～－１５０５的５′上游区内发生了９个位置的碱基变化，包括缺失、插入和替换．这些结果表明，黑曲霉Ｔ２１与３．７９５的糖化酶产量的差异与其结构基因无关，但可能与其?
- 乔殿华钟丽婵唐国敏杨开宇
- 关键词：黑曲霉糖化酶克隆
- H^+-ISFET型青霉素酶传感器被引量：2
- 1990年
- 将SOS型H^+-ISFET与戊二醛交联的牛血清蛋白-青霉素酶膜组合成单管输出式青霉素酶-H^+-ISFET传感器的探头(以下简称青霉素-酶FET),并用于测定溶液中的青霉素含量。青霉素-酶FET在0.005mol/L、0.01mol/L,0.02mol/L磷酸缓冲液中的响应灵敏度分别为11—12mV/m mol/L、7.5—8.0mV/m mol/L以及3.7—4.0mV/m mol/L;响应时间为30s;在0.02mol/L磷酸缓冲液中的标定曲线线性范围为0.5—25mmol/L;相关系数为0.9976。该青霉素-酶FET在青霉素浓度为10mmol/L的0.01mol/L磷酸缓冲液中重复测定8次的标准偏差SD为1.67mV,变异系数CV为2.1%;贮存寿命大于4个月,使用寿命在1个月以上(每天测试一次)。
- 钟丽婵黎高翔汪正孝刘鲁娜
- 关键词：青霉素酶固定化酶生物传感器
- 青霉素敏感的酶场效应晶体管的研究和应用被引量：1
- 1990年
- 酶场效应晶体管(ENFET)是近年来发展起来的一类半导体技术和生物技术相结合的新型器件。双管差分输出式ENFET对环境温度变化及总体pH变化等外界因素有自动补偿作用,其输出电压随时间的漂移较之单管输出有很大的改善。此外,还可采用金电极作参比电极以实现探头的小型化。青霉素ENFET在0.01mol/L和0.02mol/L的磷酸缓冲液中的响应灵敏度分别为6.5—7.0mV/mmol/L和3.2—3.6mV/mmol/L,线性范围为0.5—14mmol/L和0.5—25mmol/L。当浸于0.01mol/L磷酸缓冲液、置于4℃下保存时,探头的贮存寿命大于6个月。探头的累计使用次数可超过1000次。本文还论述了青霉素ENFET在青霉素发酵液浓度测定中的应用。
- 汪正孝李淑英钟丽婵黎高翔
- 关键词：晶体管青霉素生物工程
- 黑曲霉糖化酶基因启动子区的克隆及其功能测定被引量：4
- 1996年
- 利用PCR技术,以黑曲霉糖化酶高产株T21的基因组DNA为模板合成了糖化酶基因5＇端上游850bp的非编码区,并作了序列测定。将该合成片段与细菌潮霉素磷酸转移酶结构基因融合建成表达质粒,转化黑曲霉,获得了高潮霉素抗性转化子,证实该合成片段具有丝状真菌启动子功能。抗性转化子的Southern分析表明,潮霉素磷酸转移酶基因已整合到受体黑曲霉的基因组DNA中。
- 唐国敏汤文剑钟丽婵杨开宇
- 关键词：黑曲霉糖化酶启动子克隆
- 水解淀粉的酿酒酵母菌的构建被引量：8
- 1996年
- 把黑曲霉糖化酶cDNA,酵母磷酸甘油激酶基因启动子区和终止区以及酵母Ty因子的δ序列构建成整合型的糖化酶表达分泌质粒pKG 1。该质粒转化酿酒酵母Y33得到整合型转化子。转化子分泌糖化酶活力在3.0μ/ml以上,在以5％可溶性淀粉为碳源的培养基中静止培养7d,淀粉利用率达86％,生成酒精的浓度与以5％葡萄糖为碳源时相等。
- 唐国敏郗乔然钟丽婵杨开宇
- 关键词：水解淀粉酿酒酵母酒精发酵
- 氢离子敏场效应管型尿素传感器及其应用
- 1992年
- 在H^+-IS FET(离子敏场效应晶体管)的二个栅极表面分别复盖一层戊二醛交联的牛血清清蛋白-脲酶膜及牛血清清蛋白膜即制成差分式尿素-酶FET传感器。该传感器的响应时间小于1min。尿素浓度为1.0—8.0mg/dL时,响应值与尿素浓度对数值呈线性关系,线性相关系数为0.997,响应灵敏度为50mV/dec.(mg/dL)。尿素浓度为0.1—1.0mg/dL时,响应值与尿素浓度呈线性关系,线性相关系数为0.998,响应灵敏度为12—15mV/mg/dL。该传感器对100mg/dL尿素溶液的20次响应的标准偏差及变异系数分别为1.39mV和1.44%。用该尿素-酶FET测定血清样品中的BUN(血中尿素氮)值时,与酶法相比较,两者之间的相关系数为0.9912。该传感器在1个半月内累计使用250次后,响应灵敏度下降约10%。
- 钟丽婵韩泾鸿黎高翔崔大付范杰杨修亮
- 关键词：离子敏场效应
- 青霉素生产菌株的基因工程育种
- 由产黄青霉Penicillin chrysogenum生产的青霉素是重要的,产销量最大的抗菌药物,经世界范围半个世纪的努力,运用诱变育种已使青霉素发酵效价增长了数百倍。但自Lilly公司获得产黄青霉突变株E-15.1后,...
- 陈玉庆钟丽婵唐国敏
- 文献传递
