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TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响被引量：2: 2011年; 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.方法:MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响:将BRL-3A细胞分为6组,分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10μg/L),检测各组细胞24、36、48h时的增殖活性;进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1处理组和对照组,分别给予和不予TGF-β1(8μg/L),进行如下检测:流式细胞仪检测两组细胞24、36、48h时的凋亡情况和细胞周期分布;实时定量RT-PCR检测两组细胞24、36、48h时CyclinE、Cdk-2、EGF、HGF、Bcl-2、c-Myc、MMP9、NF-κB基因的表达变化.结果:MTT结果显示,各浓度TGF-β1组在24、36、48h时的细胞增殖活性差异无统计学意义;流式细胞仪分析结果显示,TGF-β1处理组24、36、48h时的细胞凋亡率和细胞周期分布与对照组间的差异均无统计学意义;实时定量RT-PCR发现,TGF-β1处理组相对于对照组,CyclinEmRNA、Cdk2mRNA、EGFmRNA在24h时分别下调至0.194±0.103、0.181±0.064、0.634±0.116倍,36h时分别下调至0.379±0.173、0.457±0.123、0.619±0.112倍,48h时分别上调至1.956±0.215、2.17±0.471、7.66±0.437倍;HGFmRNA在24、36、48h时均明显下调,分别至0.152±0.068、0.146±0.053、0.158±0.061倍;Bcl-2mRNA在24、36h时无统计学差异,48h时上调至1.567±0.115倍;c-MycmRNA、MMP9mRNA、NF-κBmRNA在3个时刻均上调,24h时分别至1.742±0.389、3.484±0.411、1.625±0.369倍,36h时分别至2.292±0.361、1.563±0.323、1.486±0.494倍,48h时分别至2.499±0.475、2.233±0.493、3.612±0.364倍.以上基因表达差异均有统计学意义(P<0.05).结论:大鼠肝细胞系BRL-3A对TGF-β1促凋亡和细胞周期阻滞作用的敏感性低下,可能与非Smads途径的激活,NF-κB、Bcl-2、c-Myc、MMP9表达的上调有关.; 王世美郑素军邢欣悦邓志华刘梅俞豪李长勇段钟平; 关键词：转化生长因子Β1 细胞周期肝再生

TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响: 目的:观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响,并探讨其初步机制。方法:①首先筛选HSC-T6生长所能耐受的培养基中低血清浓度,MTT法检测TGF-β1对细胞增殖影响:将...; 邢欣悦郑素军王世美张莹陈煜余豪李长勇刘梅刘霜段钟平; 关键词：TGF-Β1 SMAD3 HSC-T6 增殖细胞周期肝纤维化; 文献传递

TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响被引量：15: 2012年; 目的观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量。结果与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5%vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2%vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2%vs26.4±10.1%;36h:35.2±3.7%vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COLⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加。结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌。; 郑素军邢欣悦韩源平武聚山王世美张莹刘梅陈煜刘霜段钟平; 关键词：HSC-T6 TGF-Β1 SMAD3 增殖细胞周期

Smad3 shRNA抑制TGFβ1对HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用被引量：9: 2012年; 目的观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响。方法Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real-time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用;将HSC-T6对照、HSC-T6+TGFβ1(10 ng/ml)、Smad3 shRNA以及Smad3 shRNA+TGFβ1(10 ng/ml)这4组细胞进行如下检测:(1)MTT检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测TGFβ1作用24、36 h细胞周期分布;(3)Real-time PCR检测24、36 h时细胞周期、增殖及肝纤维化相关基因mRNA的表达变化;(4)ELISA检测24、36 h培养液上清中胶原蛋白(COL)Ⅰ、COLⅢ及α-SMA的含量。结果Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6细胞至96 h,感染率为71.3%,对Smad3 mRNA的表达抑制率为50%。(1)MTT结果显示,TGFβ1促进HSC-T6增殖;与相应未感染Smad3 shRNA病毒组相比,Smad3 shRNA组以及Smad3 shRNA+TGFβ1组细胞增殖能力均下降。(2)细胞周期检测发现,24、36 h时,Smad3 shRNA+TGFβ1组与Smad3 shRNA组相比,细胞周期分布差异无统计学意义(P>0.05);(3)Real-time PCR显示,Smad3 shRNA+TGFβ1组较HSC-T6+TGFβ1组,Smad3、原癌基因(c-myc)、细胞周期依赖性激酶-2(CDK-2)、细胞周期素E(cyclin E)、表皮生长因子(EGF)、核因子-κB(NF-κB)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、COLⅠ及基质金属蛋白酶(MMP)14等基因的mRNA在24、36 h表达均下调,HGF mRNA及COLⅢmRNA在24 h时上调、36 h时下调,Bcl-2 mRNA、MMP1 mRNA及MMP9 mRNA在24 h和36 h两个时段均表达上调。(4)ELISA检测发现,同一时间点比较,分别在24、36 h,TGFβ1可促进HSC-T6细胞COLⅠ(P=0.00,P=0.02)、α-SMA(P=0.00,P=0.01)的分泌;与HSC-T6+TGFβ1组相比,Smad3 shRNA+TGFβ1组COLⅠ于36 h分泌减少(P=0.00)、而α-SMA在24、36 h两个时间点分泌减少(P=0.00)。结论 Smad3 shRNA抑制了TGFβ1对HSC-T6的活化,显示了抗肝纤维化作用。; 郑素军邢欣悦武聚山王世美张莹韩源平俞豪陈煜刘梅段钟平; 关键词：SMAD3

SMAD3蛋白在肝纤维化中的作用研究进展被引量：2: 2010年; 邢欣悦陈鹏郑素军段钟平; 关键词：肝纤维化 SMAD3蛋白病理改变慢性肝损伤慢性肝病病理特征

血清载脂蛋白水平在HBV慢性肝病肝损伤程度判断中的作用被引量：6: 2011年; 目的:研究HBV慢性肝病中的血清载脂蛋白水平的变化与肝损伤严重程度的关系.方法:113例HBV相关的慢性肝病患者,其中慢性乙型肝炎33例,肝硬化46例,重型肝炎肝衰竭34例,肝衰竭又分为良好预后组和不良预后组,检测其入院时空腹血清载脂蛋白ApoA1和ApoB水平,计算患者的MELD和Child-Pugh评分,并分析ApoA1、ApoB水平,以及ApoA1/ApoB比值与患者的MELD和Child-Pugh评分的相关性.结果:慢性乙型肝炎、肝硬化和重型肝炎肝衰竭3组患者血清ApoA1、ApoB均逐渐下降(F=41.592,P=0.000;F=9.178,P=0.000).ApoA1/B在3组患者分别为1.31±0.73,1.38±0.65、0.51±0.38,三组间差别明显(F=22.759,P=0.000).两两比较显示,ApoA1、ApoA1/B在慢性乙型肝炎组和肝硬化组间均无统计学差异(P=0.057,P=0.625),但重型肝炎肝衰竭组较慢性乙型肝炎组、肝硬化组明显下降(均P=0.000);ApoB在肝硬化组和肝衰竭组间无统计学差异(P=0.082),慢性乙型肝炎分别与肝硬化和肝衰竭比较,差异均明显(P=0.006,P=0.000).慢性乙型肝炎、肝硬化和肝衰竭3组中Child-Pugh和MELD评分逐渐增高(F=74.961,P=0.000;F=56.405,P=0.000).HBV慢性肝病患者ApoA1、ApoB及ApoA1/B分别与Child-Pugh和MELD评分具有负相关性(均P<0.05).在重型肝炎肝衰竭组,ApoA1、ApoB、ApoA1/B、Child-Pugh和MELD评分在良好预后和不良预后组间均无统计学差异(P>0.05).结论:血清ApoA1、ApoB水平,以及ApoA1/ApoB比值是反映HBV慢性肝病肝损伤程度的较好指标.; 邢欣悦刘梅郑素军张莹武聚山俞豪李长勇白丽刘霜段钟平; 关键词：血清载脂蛋白载脂蛋白A1 载脂蛋白B 慢性肝病肝损伤

Smad3shRNA抑制TGFβ1对HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用: [目的]:观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响。[方法]:Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real-timeP...; 郑素军邢欣悦武聚山王世美张莹韩源平俞豪陈煜刘梅段钟平; 文献传递

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邢欣悦

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