衣作安
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 革兰氏阳性细菌表面显示技术及其应用
- 2004年
- 本文概述了革兰氏阳性菌表面显示技术的基本原理、开发研究的热点载体和菌株及其应用前景 ,并与其它表面显示系统进行比较 。
- 衣作安张成海李武平
- 关键词：革兰氏阳性细菌菌株
- rhIFN-β1a cDNA在CHO细胞上的表达
- 2004年
- 目的 在CHO细胞上表达rhIFN βcDNA。 方法 利用脂质体技术 ,将含hIFN β基因的pRC CMV IFNβ DNA载体和pSV2dhfr DNA质粒按 3∶1的比例转染CHO k1dhfr 细胞 ,后者是选择性标记。筛选在缺乏胸腺嘧啶的选择培养基生长的单个细胞克隆 ,通过MTX加压扩增与dhfr基因共转染IFNβ基因。筛选的细胞株通过大规模培养 ,收集培养液经一系列的步骤纯化。结果 能够耐受 0 .6 μmol LMTX的细胞可产生IFN 10 5unitperday 10 6cells ,CHO细胞中表达的hIFN β纯化后的抗病毒比活性可达 2 .2× 10 8IU mg。结论 建立了适合表达人干扰素
- 李武平衣作安张成海王刚郑丽舒段招军吕宏亮侯云德
- 关键词：干扰素卵巢细胞
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因(ureI)的克隆及其表达和纯化被引量：1
- 2004年
- 目的 对幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因ureI进行克隆、测序 ,并在昆虫细胞中表达及进行产物纯化。方法 克隆ureI基因 ,经测序正确后 ,酶切、连接到pFASTBACHb质粒上 ,与穿梭载体DH10BAC转座 ,获得Bacmid ureI质粒 ,转染Sf9细胞 ,采用Ni2 +螯合琼脂糖亲和层析纯化 ,经SDS PAGE和Westernblot鉴定。结果 克隆了ureI基因 ,并在昆虫细胞Sf9中表达纯化 ,蛋白纯度达 85 %以上 ,并与 6 His单抗特异结合。
- 衣作安李武平张成海高建梅王刚段招军侯云德
- 关键词：幽门螺杆菌基因克隆昆虫细胞纯化
- 幽门螺杆菌疫苗研究进展被引量：1
- 2002年
- 幽门螺杆菌由于在人群中具有较高的感染率及被WHO确认为I类致癌因子而受到重视 ,近年来对它的疫苗研究进展迅速。本文对幽门螺杆菌的全菌体疫苗、亚单位疫苗、重组减毒疫苗。
- 衣作安
- 关键词：亚单位疫苗微球疫苗幽门螺杆菌疫苗
- 跨膜区缺失的流感病毒M2蛋白表达纯化及其抗原性检测被引量：1
- 2006年
- 目的 表达并纯化缺失跨膜区的流感病毒M2蛋白，并检测其抗原性。方法 利用RT．PCR方法从流感病毒A／PR／8／34（H1N1）的cDNA中扩增全长M2基因，利用两套引物扩增出缺失跨膜区26—43位氨基酸的sM2基因，并克隆到pET30a载体中表达融合蛋白，用镍柱纯化后的融合蛋白免疫小鼠获得抗血清，免疫荧光检测其抗原性。结果 sM2融合蛋白在大肠埃希菌中可高效表达，纯化后可获得高纯度的重组蛋白。免疫小鼠获得的血清进行免疫荧光检测，显示表达的融合蛋白有免疫原性。结论 跨膜区缺失的流感病毒M2融合蛋白与完整M2蛋白有相同的抗原性。
- 郑丽舒段招军彭夫望谢志萍高寒春李武平衣作安侯云德
- 关键词：流感病毒A型M2抗原性
- 新型重组人IFN-λ2的高效表达、纯化与抗病毒活性研究被引量：6
- 2005年
- 目的在大肠埃希菌中高效表达重组人干扰素λ2(rhIFNλ2),并对其抗病毒活性进行初步研究。方法根据大肠埃希菌的偏爱密码子人工设计合成人干扰素λ2(hIFNλ2)的高表达基因,将其克隆到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌中进行表达,表达产物经变性、复性、阳离子交换层析及分子筛层析纯化,测定其抗病毒活性、种属特异性及抗HBV活性。结果在大肠埃希菌表达的目的蛋白占细胞总蛋白量的15%左右,纯化后的纯度达到90%以上,在WISH细胞上抗VSV活性约为1.5×106IU/mg。与rhIFNα2b比较,表达产物在非灵长类细胞上的抗病毒活性较在灵长类细胞上弱,目的蛋白在HepG2.2.15细胞上表现有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性。结论hIFNλ2可以在大肠埃希菌内实现高效表达,表达产物具有抗病毒活性,有与rhIFNα2b相似的抗HBV活性,本型IFN有较严格的种属特异性。
- 王刚李武平张成海衣作安郑丽舒张辉段招军侯云德
- 关键词：干扰素类层析纯化HEPG2.2.15细胞IFN抗HBV活性
- 人干扰素ω(huIFN-ω)的高效表达、纯化及生物学活性被引量：4
- 2004年
- 为了获得人干扰素 ω(huIFN ω)在大肠杆菌中的高效表达,根据大肠杆菌的偏爱密码子,人工设计并合成了huIFN ω高表达基因,并克隆到原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中实现了高效表达,目的蛋白占细胞总蛋白的15%左右,以包涵体形式存在。表达产物经变性、复性及阳离子和分子筛层析纯化,纯度达90%以上,产物的抗病毒活性约为1.0×108IU/mg,并具有体外促NK杀伤活性。此结果为进一步研究和开发重组huIFN ω奠定了基础。
- 张成海李武平衣作安王刚吕宏亮段招军侯云德
- 关键词：纯化大肠杆菌包涵体
- 人角质化细胞生长因子2基因克隆、表达及其产物的纯化和鉴定(英文)被引量：2
- 2006年
- 背景:人角质化细胞生长因子2具有广泛的生理功能,在胚胎发育、组织的修复、神经的再生、血管的生成和肿瘤发展中具有重要作用。目的:克隆人角质化细胞生长因子2基因,于大肠杆菌中表达,并检测其生物学活性,为进一步开发提供实验依据。设计:开放性实验。单位:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。材料:实验于2000-09/2002-05在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室完成。pBV220温控表达载体为病毒基因工程国家重点实验室构建,EcoRⅠ、BamHⅠ、T4DNA连接酶(Promega公司);人角质化细胞生长因子2特异性聚合酶链反应引物(上海博亚生物技术有限公司合成);肝素-SepharoseCL-6B(Pharmacia公司);快速聚合酶链反应产物纯化试剂盒、总RNA提取Trizol试剂盒、反转录-聚合酶链反应试剂盒(GIBCO公司);质粒DNA快速提取试剂盒(博大公司);BL-21-codonpluscompentcells(Stratagene公司)。方法:用高表达菌株BL-21-codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子2蛋白并初步纯化和检测其活性。通过反转录-聚合酶链反应从自然流产胎儿肺组织中钓取人角质化细胞生长因子2cDNA,将其克隆入pBV220载体质粒。在大肠杆菌BL-21-codonpluscompentcells中表达人角质化细胞生长因子2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化,以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。主要观察指标:人角质化细胞生长因子2cDNA的片段长度和序列,人角质化细胞生长因子2基因在大肠杆菌中的表达,纯化人角质化细胞生长因子2的活性。结果:人角质化细胞生长因子2cDNA片段大小约500bp,人角质化细胞生长因子2蛋白在BL-21中得到高效表达,于上清中可溶性表达,SDS-PAGE显示相对分子质量约20000;人角质化细胞生长因子2蛋白对NIH3T3细胞具有显著的促有丝分裂活性,1,5,10μg/L人角质化细胞生长因子2A值(
- 吴斌文段招军李武平陈勇吕宏亮衣作安张成海林菊生王家侯云德
- 关键词：角蛋白细胞基因表达
- 干扰素-β1b的高效表达、纯化及抗病毒活性研究被引量：13
- 2002年
- IFN - β1b是大肠杆菌产生的 17位Cys被Ser替换的人IFN - β的类似物 ,为了获得高表达 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工合成了IFN - β - 1b基因 ,插入质粒 pBV2 2 0中 ,转化大肠杆菌DH5α。IFN - β1b的制备过程 ,包括发酵和一系列的纯化步骤。经修饰 ,IFN - β1b基因在启动子PRPL 控制下发酵表达 ,合成的蛋白质以包涵体的形式存在。培养的细菌经收集、裂解后 ,将包涵体释放出来 ,包涵体经含SDS的溶液溶解 ,DTT还原。纯化过程包括有机溶剂抽提、分子筛层析、脱盐、氧化复性和反相层析 ,并用旋转蒸发除去有机溶剂。IFN - β -
- 李武平吕宏亮段招军张丽萍刘永清吴斌文陈勇张成海衣作安魏开坤侯云德
- 关键词：纯化抗病毒活性HPLC
- 人角质化细胞生长因子-2基因的克隆、表达及产物的纯化、鉴定被引量：5
- 2004年
- 用高表达菌株BL 2 1codonpluscompententcells表达重组人角质化细胞生长因子 (hKGF 2 )蛋白并初步纯化和检测其活性。通过RT PCR从流产胎儿肺组织中钓取hKGF 2cDNA ,将其克隆入pBV2 2 0载体质粒。在大肠杆菌BL 2 1codonpluscompentcells中表达hKGF 2蛋白。采用亲和层析和离子交换层析分离纯化 ,以细胞增殖实验测定表达蛋白的生物活性。结果显示 ,hKGF 2蛋白在BL2 1中得到高效表达 ;hKGF 2蛋白能刺激NIH3T3细胞的增殖 ,具有显著的促有丝分裂活性。
- 吴斌文段招军李武平陈勇吕宏亮衣作安张成海林菊生王家駹侯云德
- 关键词：纯化
