葛燕梅
- 作品数:3 被引量:2H指数:1
- 供职机构:安徽医科大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
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- SHIP2通过上调Bim表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性被引量:2
- 2014年
- 目的探讨SHIP2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析mRNA的变化水平。将pCMV6-SHIP2质粒在脂质体介导下转染人胃癌BGC-823细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照组。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞,建立稳定细胞株,再将pCMV6-SHIP2质粒分别转染空载体和稳定干扰Bim表达细胞株。结果与SGC-7901细胞相比,BGC-823细胞对紫杉醇诱导的凋亡相对不敏感,0.3μmol·L-1紫杉醇诱导BGC-823 48 h后细胞凋亡率仅为(25.6±1.6)%,在紫杉醇作用不同时间点Bim蛋白和mRNA表达均无明显变化;与对照组相比,转染SHIP2基因能明显增加Bim的表达,紫杉醇作用48 h后,细胞凋亡率上升到(50.8±0.9)%;GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的BGC-823细胞,Bim的表达明显被抑制,在GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的稳定BGC-823细胞中转入pCMV6-SHIP2,紫杉醇作用48 h后,凋亡率为(27.6±1.6)%。结论转染外源性SHIP2基因能有效提高BGC-823细胞内Bim的表达,诱导BGC-823细胞凋亡,明显增加BGC-823细胞对紫杉醇的敏感性。
- 葛燕梅叶艳张林杰
- 关键词:胃癌BIM紫杉醇AKT
- SHIP2对胃癌细胞生长和凋亡的影响以及增强胃癌细胞对紫杉醇敏感性的研究
- 研究背景及目的:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,在世界范围内的发病率仅次于肺癌,位居第二位;而在我国位居所有恶性肿瘤死亡率第一位。因此,深入了解有关胃癌发生和发展过程中肿瘤细胞的多种分子失衡机制,以寻求胃癌靶向治疗的特异性分...
- 葛燕梅
- 关键词:胃癌细胞生长紫杉醇
- 文献传递
- PIB5PA对人黑素瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
- 2014年
- 目的 :探讨磷脂酰肌醇4,5-二磷酸5磷酸酶A(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 5-phosphatase A,PIB5PA)对人黑素瘤Mel-FH细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 :构建携带4-羟基三苯氧胺(4-hydroxytamoxifen,4-OHT)可调控基因表达系统的重组真核表达载体pF-5xUAS-SV40-PIB5PA,并将其感染人黑素瘤Mel-FH细胞,经嘌呤霉素和潮霉素B的双重筛选,成功获得稳定感染的Mel-FH.PIB5PA亚克隆细胞。应用蛋白质印迹法检测4-OHT诱导Mel-FH.PIB5PA细胞表达PIB5PA蛋白的最佳浓度和最适时间,应用细胞划痕实验和Transwell小室法检测Mel-FH.PIB5PA细胞的迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测Mel-FH.PIB5PA细胞中磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-PKB,又称p-AKT)、磷酸化黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)和TIMP-2蛋白的表达。结果 :10 nmol/L 4-OHT处理黑素瘤MelFH.PIB5PA细胞16 h后可稳定诱导PIB5PA蛋白过表达。与未经4-OHT处理的Mel-FH.PIB5PA细胞比较,诱导PIB5PA过表达能显著抑制Mel-FH.PIB5PA细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),并下调p-AKT、p-FAK、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 :外源性过表达PIB5PA可明显抑制人黑素瘤Mel-FH细胞的体外迁移和侵袭能力,其机制可能与蛋白激酶AKT和FAK的活性下调,从而下调MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1的相对表达水平有关。
- 叶艳李群葛燕梅张旭东张林杰
- 关键词:黑素瘤肿瘤浸润蛋白激酶类基质金属蛋白酶类