纪璇
- 作品数：15 被引量：37H指数：3
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- 枯草芽孢杆菌芽孢佐剂免疫途径及效果的动物实验观察被引量：1
- 2013年
- 目的探讨以表面展示免疫球蛋白结合蛋白功能域(FDIBP)的枯草芽孢杆菌芽孢制备的黏膜佐剂不同途径免疫的应用效果。方法分别将表面展示FDIBP的重组枯草芽孢杆菌芽孢及大肠杆菌不耐热毒素(LT)与人IgG(hIgG)作为佐剂共孵育制备疫苗,通过灌胃、滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,5周后收集外周血、肺泡、小肠及阴道冲洗液。采用ELISA方法检测血清中IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、抗hIgG特异性IgG抗体,同时检测血清及肺泡、小肠、阴道冲洗液中抗hIgG特异性IgA抗体水平。结果与无佐剂免疫者比较,枯草芽孢杆菌芽孢佐剂滴鼻能有效提高小鼠体液免疫产生的抗原特异性抗体IgA及IgG水平(P<0.01),但未能有效刺激细胞免疫上调血清IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ水平;通过灌胃途径免疫者上述特异性抗体及细胞因子水平均无显著变化(P均>0.05)。结论展示FDIBP的枯草芽孢杆菌芽孢可用作滴鼻途径黏膜疫苗佐剂,能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应。
- 李志会李鹏岳盈盈宋楠楠纪璇曹银光孟红
- 关键词：黏膜佐剂
- 肠道病毒71型感染对BALB/c乳鼠T淋巴细胞亚群的影响
- 2013年
- 目的观察BALB/c乳鼠感染肠道病毒71型(EV71)后机体的免疫功能状态,为临床治疗提供依据。方法将30只1日龄BALB/c乳鼠随机分为对照组、实验组1组和实验2组,分别颅内注射20μL灭活EV71200804株、EV71200804株和EV71200803株;感染后7 d后引颈处死小鼠,取胸腺和脾脏,分离淋巴细胞进行T细胞亚群检测。结果与对照组比较,实验1组胸腺淋巴细胞中CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+细胞百分比均明显升高(P均<0.05),实验2组各T淋巴细胞百分比略有升高(P均﹥0.05);实验1组脾脏淋巴细胞中CD+3CD+4、CD+3CD+8和CD+3细胞百分比均显著降低(P均<0.01),实验2组CD3+CD4+细胞百分比明显降低(P<0.05)、CD3+CD8+和CD3+细胞百分比无显著变化(P均﹥0.05);实验1组和实验2组胸腺CD4+ T细胞/CD8+T细胞均略低(P均﹥0.05),实验1组脾脏CD4+ T细胞/CD8+ T细胞略高、实验2组略低(P均﹥0.05)。结论 EV71感染可引起BALB/c乳鼠T淋巴细胞亚群功能紊乱,且其程度与病毒株有关。
- 宋楠楠岳盈盈李志会李鹏纪璇孟红
- 关键词：肠道病毒71型BALBT细胞亚群
- 一种封闭式微量多孔培养板
- 本实用新型公开了一种封闭式微量多孔培养板，包括盒体、盒盖，盒体内设有若干培养孔，在盒体上设置有回形凸起；在盒盖上设置有与回形凸起相匹配的回形凹槽，该回形凹槽由盒盖的内侧向盒盖的外侧凸出；回形凹槽的表面覆盖有一层橡胶。盒体...
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- 文献传递
- 重症手足口病患者气管插管吸出液中肠道病毒71型的分离与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的分离鉴定重症手足口病患者气管插管吸出液标本的EV71病毒株。方法将采集的标本过滤除菌接种于MA104细胞,出现细胞病变效应(CPE)后提取培养上清液中的RNA,用国家标准检测引物进行RT-PCR鉴定;用特异性引物进行PCR获得VP1全序列,测序后以MEGA4软件与各血清型代表株VP1序列进行分析并构建分子进化树。结果接种标本3 d后细胞出现CPE,经RT-PCR鉴定为EV71,对其VP1全序列进行测定分析后,确定其为C4亚型,并绘制了分子进化树。结论手足口病患者下呼吸道分泌物EV71的分离鉴定,为手足口病肺损伤发病机制的研究提供了依据。
- 岳盈盈张颖李鹏李志会宋楠楠纪璇盖中涛孟红
- 关键词：肠道病毒A型手足口病病毒培养
- 肠道病毒71型VP1的原核表达及生物活性初步研究被引量：1
- 2012年
- 目的原核表达系统表达肠道病毒71型（Enterovirus71，Ev71）VP1蛋白，并探讨该基因工程蛋白阻断病毒感染及其制备抗体的中和活性。方法构建pET30a（＋）-VP1表达载体、IPTG诱导表达，Westernblot鉴定。His亲和纯化后，阻断试验分析该重组蛋白阻断病毒感染活性，免疫小鼠制备多抗分析多抗中和活性。结果构建的重组菌可有效表达VP1，用其免疫小鼠制备多抗ELISA效价达到1：3200，而中和活性只有1：16，并且该工程蛋白没有表现出阻断活性。结论本研究原核表达的VPl蛋白能刺激小鼠产生抗体，且抗体具有一定的中和活性，但是该蛋白没有阻断活性，表明该蛋白在原核表达系统中未能形成天然构象从而导致与受体结合的能力较差。
- 李志会宋楠楠岳盈盈李鹏纪璇曹银光孟红
- 关键词：肠道病毒71型VP1原核表达生物活性
- 重组枯草芽孢杆菌EV71-VP1表达载体及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌EV71-VP1表达载体：载体为大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体，其上装载有EV71病毒的衣壳蛋白VP1的编码基因。构建方法如下：(1)扩增枯草芽胞杆菌的CotB基因调控序列及编码序列，...
- 李志会宋楠楠岳盈盈李鹏孟红纪璇
- 文献传递
- 低渗条件下竹叶状灰岩中微生物的初步培养
- 2013年
- 目的对低渗条件下竹叶状灰岩内部特有的微生物进行培养,了解竹叶状灰岩内部独特的微生态环境。方法本研究采用低渗稀释培养法、透射电镜、16S rDNA序列分析方法以及培养基改造,对竹叶状灰岩中的微生物进行了初步研究。结果在竹叶状灰岩的培养物中发现了两段未培养细菌16S rDNA的存在;在电镜中观察到两种特殊形态的微生物;采用稀释培养法成功的培养了未培养细菌,且能传代,但经过多种培养基的分离培养,未获得未培养细菌的纯培养。结论竹叶状灰岩内部有特殊形态的未培养细菌存在,本文为进一步研究未培养细菌特有的生存机制和代谢途径奠定了基础。
- 李鹏岳盈盈李志会宋楠楠纪璇孟红
- 关键词：低渗
- 风疹病毒包膜糖蛋白E1的原核表达及条件优化被引量：9
- 2010年
- 目的 为风疹病毒（RV）感染提供特异性及敏感性高的检测手段。方法采用PCR扩增RV包膜糖蛋白E1基因202—353aa片段，并将其插入表达载体pET30a（＋），构建pET30a（＋）-E1，转化BL21（plysS）菌株，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western Blot初步分析蛋白表达及抗原性；并探讨温度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度和诱导时间对目的蛋白表达产量的影响。结果获得相对分子质量约为16．6kD的融合蛋白，Western Blot证明其具有良好的抗原性，并确定该蛋白在30℃、0．6mmol／L IPTG的条件下诱导表达4h可获得最佳表达量。结论本研究为RV包膜糖蛋白E1抗原纯化及应用奠定了基础，亦为研制生产高特异性和敏感性的RV检测试剂盒提供了实验依据。
- 岳盈盈李鹏李志会宋楠楠赵元昊纪璇孟红
- 关键词：风疹病毒大肠杆菌
- 人巨细胞病毒截短被膜磷蛋白pp65的原核表达及抗原性分析被引量：3
- 2012年
- 目的利用大肠杆菌表达系统表达截短人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白,并对其抗原性进行初步鉴定。方法采用PCR扩增HCMV pp65基因961～1 686 bp(321aa-562aa)片段,并将其插入表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)菌株,十二烷基硫酸钠—聚丙稀酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析蛋白表达,常规镍柱法纯化目的蛋白,以ELISA法初步检测其抗原性。结果获得相对分子质量约为30 kD的融合蛋白,pp65抗原和全病毒抗原的P/N值分别为2.737、2.535。结论本研究成功表达截短HCMV pp65抗原,并证实其蛋白抗原性优于全病毒抗原;此为HCMV检测试剂盒的研制和疫苗的研究提供了依据。
- 岳盈盈宋楠楠李志会李鹏纪璇于锡巧孟红
- 关键词：人巨细胞病毒PP65蛋白原核表达抗原性
- 不同毒力EV71济南分离株全基因组序列比较分析被引量：2
- 2013年
- 目的研究EV71济南分离株的基因特点,寻找潜在的EV71毒力决定位点。方法将6株EV71济南分离株(JN200803、JN200804、Jinan1002、Jinan1004、Jinan1005和Jinan1006株)分别接种1d龄BALB/c小鼠,确定其对小鼠的致病性程度。对6株EV71全基因组核苷酸、氨基酸序列进行比较,对非编码区进行RNA二级结构的预测和分析,对VP1区进行遗传进化分析。结果通过动物实验可将6株EV71济南分离株分为强、中、弱毒力株。小鼠感染强毒株(JN200804、Jinan1002、Jinan1004、Jinan1005株)的主要症状为后肢麻痹并死亡,感染弱毒株(Jinan1006株)的主要症状为后肢麻痹但能自愈,感染无毒株(JN200803株)未引起明显症状。不同毒力EV71分离株全基因组序列比对发现,共有40个核苷酸位点的差异,导致编码区8个氨基酸突变,其中第937位氨基酸(位于2A片段)在强毒株、弱毒株和无毒株间发生了连续突变(937aa:S→C→G)。非编码区RNA二级结构预测表明,5′UTR第115位核苷酸突变对内部核糖体进入位点(IRES)的结构有较大影响。遗传进化分析显示,与国内2003年以后的流行毒株相同,6株EV71济南分离株均属C4亚型的C4a进化分支。结论全基因组序列比较分析发现不同毒力EV71济南分离株之间存在差异位点,为采用反向遗传学方法鉴定EV71毒力决定位点奠定了基础。
- 李鹏李志会岳盈盈宋楠楠纪璇张颖盖中涛孟红
- 关键词：EV71毒力全基因组
