祁伟彦
- 作品数：10 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院农产品加工研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 防治棉花黄萎病的菌剂及其制备方法和它们的应用
- 本发明提供了一种防治棉花黄萎病菌剂，该菌剂包括培养基和菌体，其中，所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cere...
- 戴小枫马雪峰陈捷胤李蕾孔志强包郁明肖红利徐明桂月晶祁伟彦王新艳
- 文献传递
- 大丽轮枝菌分泌蛋白提取方法比较被引量：3
- 2014年
- 【目的】采用超滤法(UF)、三氯乙酸沉淀法(TCA)、离子交换富集法(IEX)分别从大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)高致病性菌株VdG1培养上清液中提取分泌蛋白,对提取样品进行质谱鉴定。寻找适合大丽轮枝菌分泌蛋白的提取方法,为大丽轮枝菌分泌蛋白组深入研究奠定基础。挖掘大丽轮枝菌分泌蛋白中潜在的致病相关蛋白,为其深入功能验证及致病机理研究提供平台。【方法】3种方法提取大丽轮枝菌VdG1分泌蛋白,shot-gun方法进行质谱鉴定。利用生物信息学软件WoLFPSORT、SignalP、TMHMM、PHOBIUS对其中经典分泌蛋白进行预测。通过CAZy和PHI数据库进行经典分泌蛋白中碳水化合物水解酶(CAZy)和病原菌寄主互作因子(PHI)注释,BLASTp软件进行RxLx、LysM、Cys Pattern等模体蛋白比对分析。提取的蛋白样品接种感病棉种(军棉1号)进行样品生物学活性及致病性检测。【结果】TCA法、IEX法和UF法制备大丽轮枝菌分泌蛋白,其提取效率分别为1.18、0.96和0.56 mg·L-1。SDS-PAGE电泳检测显示UF法提取的蛋白样品条带少而模糊。而TCA法和IEX法提取的蛋白样品条带较多,样品的纯度也较高;经生物信息学软件预测分析,提取的蛋白样品中含有经典分泌蛋白分别为124、112和75个;质谱鉴定的分泌蛋白中含有潜在致病因子分别为98、85和57个;另外,IEX法制备大丽轮枝菌分泌蛋白效果较好,具有小分子偏好性,且能够保持样品的生物学活性,该蛋白样品接种棉花叶片能够引起萎蔫、坏死的症状。【结论】3种方法提取大丽轮枝菌分泌蛋白,UF法提取效率最低,纯度最差,蛋白数量最少,蛋白样品中含有潜在的毒素蛋白数量也最少,而且对于大体积处理相当耗时。TCA法和IEX法都适合大丽轮枝菌分泌蛋白的制备,但是TCA法制备过程中不能保持样品的生物学活性,后续适合于2-D电泳检测等试验。IEX法首次应用于病原菌分泌蛋白�
- 肖红利桂月晶祁伟彦陈捷胤李蕾徐明戴小枫
- 关键词：大丽轮枝菌分泌蛋白LC-MS/MS
- 大丽轮枝菌培养基及其制备方法和培养大丽轮枝菌的方法
- 本发明公开了一种大丽轮枝菌培养基，该大丽轮枝菌培养基含有1-3g/L的NaNO<Sub>3</Sub>、0.3-0.7g/L的KCl、0.5-2g/L的K<Sub>2</Sub>HPO<Sub>4</Sub>、0.005...
- 戴小枫肖红利李蕾陈捷胤祁伟彦孔志强
- 文献传递
- 一种鉴定大丽轮枝菌弱致病型的核酸和引物对及试剂盒
- 本发明提供了一种核酸，该核酸具有SEQ ID NO：1所示的序列。本发明还提供了扩增如上所述的核酸的引物对。本发明还提供了一种鉴定真菌菌株致病型的方法，所述真菌菌株为大丽轮枝菌，该方法包括以下步骤：（1）制备含有大丽轮枝...
- 戴小枫李蕾陈捷胤马雪峰孔志强包郁明祁伟彦桂月晶肖红利
- 文献传递
- 抗虫/耐草甘膦双价融合基因表达载体的构建及烟草转化被引量：3
- 2011年
- 随着植物基因工程的发展,将多个基因转化植株已成为研究的热点之一,利用连接肽进行多个基因融合的策略已引起广泛关注。利用连接多肽2A和LP4/2A分别将抗虫基因Bt(Bacillus thuringiensis,Bt)cry1Ah和耐草甘膦基因mG2-epsps连接起来,构建了4个融合基因表达载体pHAG、pHLAG、pGAH、pGLAH和两个单基因载体pSAh、pSmG2,其中pHAG、pHLAG是Bt cry1Ah基因在前,mG2-epsps基因在后,pGAH、pGLAH是mG2-epsps基因在前,Bt cry1Ah基因在后,分别用2A和LP4/2A作为连接肽,由CaMV35S启动子驱动。利用农杆菌介导法将6个植物表达载体转入烟草,得到再生植株529株。经PCR检测,有261株再生苗为阳性植株,转化率达到49.3%。获得的转基因烟草可用于分析连接肽2A和LP4/2A的剪切效率以及不同基因与连接肽连接位置差异对基因表达的影响。
- 祁伟彦孙鹤周妮朱莉郎志宏黄大昉
- 关键词：转基因烟草
- 基于人工病圃筛选和分子标记辅助的棉花抗黄萎病育种方法研究与应用被引量：11
- 2012年
- 以抗病性较强的中植372为研究对象,和陆地棉感病品种军棉1号配制组合构建F2作图群体,筛选到和黄萎病抗性紧密连锁的SSR标记NAU1269。选育过程中,以中植372为父本或者母本,通过人工黄萎病病圃对种间杂交、回交、加代选育以及再杂交的材料进行了抗病性筛选,同时每代育种材料均对黄萎病抗性紧密连锁的SSR标记NAU1269进行跟踪检测,筛选出与黄萎病抗病性状紧密连锁的亲本及其后代材料,进而培育出抗黄萎病、产量高、品质优良的中植棉2号、新植5号、中植棉6号、中植棉8号等10余个国审及省审抗(耐)黄萎病棉花新品种。对育成的品种进行检测发现,中植2棉号、中植6棉号、中植8棉号和新植5号均能够检测到与黄萎病抗性紧密连锁的SSR标记NAU1269和已报道的抗黄萎病的分子标记NAU828和NAU1225,而且这3个标记在各个品种材料之间呈共显性分离。结果表明,基于人工病圃筛选和分子标记辅助育种相结合是选育棉花抗黄萎病材料可行、高效的育种方法。
- 祁伟彦张永军张天真陈捷胤戴小枫
- 防治棉花黄萎病的菌剂及其制备方法和它们的应用
- 本发明提供了一种防治棉花黄萎病菌剂，该菌剂包括培养基和菌体，其中，所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）、短小芽孢杆菌（Bacillus？pumilus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus？cere...
- 戴小枫马雪峰陈捷胤李蕾孔志强包郁明肖红利徐明桂月晶祁伟彦王新艳
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白基因标记棉花黄萎病菌被引量：7
- 2013年
- 以携带有潮霉素抗性筛选标记的pCTHyg载体为骨架,构建了含有增强型绿色荧光蛋白基因sGFP的载体pCH-sGFP,并通过农杆菌介导的遗传转化法导入引起棉花黄萎病的高致病力大丽轮枝菌Vd991,获得了sGFP整合到大丽轮枝菌基因组的转化株。通过转化子荧光信号、生长表型和致病力筛选鉴定,获得了1株与Vd991生长和致病力无显著差异且荧光信号强烈的转化株Vd-gfp77。侵染棉花根部试验表明,Vd-gfp77侵染棉花后快速扩展繁殖,子代仍然能发出强烈的荧光信号。本试验绿色荧光蛋白标记大丽轮枝菌的成功构建,为后续大丽轮枝菌侵染棉花过程的组织学和致病机理研究提供了良好的研究材料。
- 徐明桂月晶祁伟彦柳少燕陈捷胤戴小枫
- 关键词：大丽轮枝菌绿色荧光蛋白农杆菌介导法
- 一种鉴定大丽轮枝菌弱致病型的核酸和引物对及试剂盒
- 本发明提供了一种核酸，该核酸具有SEQ ID NO：1所示的序列。本发明还提供了扩增如上所述的核酸的引物对。本发明还提供了一种鉴定真菌菌株致病型的方法，所述真菌菌株为大丽轮枝菌，该方法包括以下步骤：（1）制备含有大丽轮枝...
- 戴小枫李蕾陈捷胤马雪峰孔志强包郁明祁伟彦桂月晶肖红利
- 文献传递
- 大丽轮枝菌培养基及其制备方法和培养大丽轮枝菌的方法
- 本发明公开了一种大丽轮枝菌培养基，该大丽轮枝菌培养基含有1-3g/L的NaNO<Sub>3</Sub>、0.3-0.7g/L的KCl、0.5-2g/L的K<Sub>2</Sub>HPO<Sub>4</Sub>、0.005...
- 戴小枫肖红利李蕾陈捷胤祁伟彦孔志强
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