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冷刺激小鼠脂肪组织差异表达长链非编码RNA的初步研究被引量：1: 2015年; 脂肪组织主要有白色脂肪组织(WAT)和褐色脂肪组织(BAT)两种类型;WAT储存能量,BAT通过特异性表达解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)消耗能量产热。与BAT不同,WAT具有很强的可塑性,在寒冷刺激下,呈现褐色脂肪表型、获得褐色脂肪的产热活性("褐色化")。根据对冷刺激组(6℃)和对照组(28℃)小鼠的肩胛区褐色脂肪组织(iBAT)和皮下白色脂肪组织(sWAT)的RNA转录组测序分析结果,初步筛选出1个差异明显的长链非编码RNA(lncRNA-6030408B16Rik)。通过qRT-PCR检测lncRNA-6030408B16Rik在野生型小鼠的脾脏、肌肉、肾脏、十二指肠、大脑、肝脏、sWAT和iBAT中的表达;24只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分成冷刺激组(6℃)和对照组(28℃),两组小鼠分别在6和28℃环境下处理10d,分别采集两组的iBAT和sWAT;并分离出生1d的野生型小鼠褐色前脂肪细胞,诱导分化后,收集0、1、3、5d的细胞,检测UCP1基因和lncRNA-6030408B16Rik在分化过程中的时空表达。qRT-PCR结果显示iBAT和sWAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量均明显高于其他组织;与对照组相比,冷刺激组iBAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量极显著上调(P<0.01),冷刺激组sWAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量显著上调(P<0.05);前脂肪细胞诱导分化的过程中,lncRNA-6030408B16Rik的表达量呈先上调后下调的趋势。lncRNA-6030408B16Rik在脂肪组织中特异性高表达。lncRNA-6030408B16Rik可能对白色脂肪组织"褐色化"及褐色前脂肪细胞的分化具有重要的调控作用。; 黄素娟陶聪甄二东王亚君魏刚白立景杨述林王彦芳李奎敖红; 关键词：小鼠白色脂肪组织褐色脂肪组织前脂肪细胞分化长链非编码RNA

一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段: 本发明公开了一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段。该DNA片段，是如下1)或2)：1)其核苷酸序列如序列表中序列3的自5’端6-1108位所示；2)其核苷酸序列如序列表中序列3所示。含有上述DNA片段的重组载体也属...; 鞠辉明白立景李奎崔文涛牟玉莲杨述林唐中林; 文献传递

体内精原干细胞介导转appA和MxA双基因小鼠的制备: 白立景; 关键词：转基因小鼠

大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究被引量：3: 2010年; 本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段,通过MluI酶切位点连接到pcDNA-MxA载体中,构建重组载体pcDNA-appA-MxA(下称AMP),分别将pcDNA3.1(+)、pcDNA-MxA、pcDNA-appA2及AMP质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,取细胞通过实时荧光定量PCR测定细胞内appA2及MxA的表达,同时部分细胞通过Westernblot测定细胞内MxA蛋白表达量,采用改进的钼酸铵显色法测定细胞内植酸酶活性;酶切及测序结果表明成功构建了AMP载体;QRT-PCR结果表明,转AMP细胞组MxA表达水平是转pcDNA-MxA组的1.118倍,转AMP细胞组appA2表达水平是转pcDNA-appA2组的1.134倍,上述各组间差异显著(P<0.05)。灰度分析结果表明,AMP细胞组细胞内MxA表达量是转染pcDNA-MxA细胞组的1.07倍;植酸酶活性测定试验结果表明,转AMP、pcDNA-appA2细胞组及对照组细胞内植酸酶酶活和对照组平均酶活分别为0.294、0.235及0.082FTU·μL-1,2个试验组间差异不显著,试验组和对照组间差异极显著(P<0.01);试验结果表明本研究构建双基因表达载体中外源基因的表达效率比相应单基因表达载体表达效率高,本研究为以后多基因共表达及制备多基因转基因动物奠定了基础。; 鞠辉明白立景牟玉莲杨述林刘宗平李奎; 关键词：植酸酶真核表达载体多顺反子

体内A型精原细胞介导转MxA基因小鼠的制备: 2010年; 本研究旨在探讨内源性A型精原干细胞介导法制备转抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)基因小鼠的可行性。将pcDNA-MxA质粒和新型转染试剂ExGen500混悬后分5点注射至7日龄的ICR公鼠两侧睾丸组织内,睾丸内基因注射(testis gene transfer,TGT)鼠在性成熟后的不同阶段(6、12及24周龄)与正常母鼠交配,检测后代外源基因整合及表达情况,选取表达MxA基因的小鼠进行H5N1亚型禽流感病毒攻毒试验,观察小鼠的健康状况并观察肺及气管的组织病变情况。结果表明,TGT鼠和正常母鼠交配后能稳定产生转基因后代小鼠,2只TGT鼠在6、12及24周龄交配后代整合率分别为11.11%(2/18)、11.76%(2/17)、11.54%(3/26)及13.64%(3/22)、13.33%(2/15)、11.76%(2/17)。2只TGT鼠后代外源基因平均整合率分别为11.47%及12.91%,之间差异不显著(P>0.05)。RT-PCR检测表明,MxA基因整合小鼠中有21.43%(3/22)测到MxA的表达;所制备的MxA表达鼠H5N1亚型禽流感病毒攻毒后全身症状、肺及气管病变程度明显比正常鼠轻。试验结果表明体内精原干细胞介导的转基因方法是一种可行的、具有很大应用前景的转基因方法,制备的转MxA基因小鼠对H5N1亚型禽流感病毒具有一定的抵抗力。; 鞠辉明白立景王怡彭大新张伟胡艳欣刘宗平李奎; 关键词：转基因 MXA

一种制备同时表达多个基因的转基因动物的方法: 本发明公开了一种制备同时表达多个基因的转基因动物的方法。本发明还公开了一种制备转基因胚胎的方法，上述制备转基因胚胎的方法，是将植酸酶基因和人粘病毒抗性基因A均导入目的胚胎中，得到转基因胚胎。将转基因胚胎移植到雌性的目的动...; 李奎鞠辉明樊俊华白立景牟玉莲杨述林唐中林崔文涛; 文献传递

一种表达双基因的真核表达载体: 本发明公开了一种表达双基因的真核表达载体。该载体，其序列其序列含有植酸酶基因表达盒和人粘病毒抗性基因1表达盒。本发明的表达载体在细胞水平上验证了含双基因的表达载体的表达效率几乎和两单基因组表达效率相当。本发明的含双基因的...; 李奎鞠辉明白立景; 文献传递

miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞C2C12周期的影响: 2015年; 观察miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞C2C12周期的影响。分别以0、200、300、400、500、600 nmol/L Nocodazole处理C2C12细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期,间接免疫染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器α-微管蛋白(α-tubulin)排列。转染miR-21 mimics/NC和inhibitors/NC,24 h后,添加400 nmol/L的Nocodazole处理24 h,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明:Nocodazole使C2C12细胞同步化的最佳浓度是400 nmol/L;过表达miR-21 mimics之后,与对照组相比,G0/G1,S期细胞百分比极显著增加,G2/M期细胞百分比极显著减少(P<0.01);添加抑制剂后,与对照组相比,添加抑制剂(inhibitors)的C2C12细胞中处于G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,而处于G2/M期的细胞比例显著低于对照组细胞(P<0.05);正反试验结果证明,miR-21促进C2C12细胞周期进入S期。为进一步研究miR-21对C2C12细胞的作用机制奠定基础。; 刘会杰敖红白立景王志军邢凯王楚端; 关键词：NOCODAZOLE MIR-21 C2C12 周期小鼠

一种鉴定转基因动物中目标基因拷贝数的方法: 本发明公开了一种鉴定转基因动物中目标基因拷贝数的方法。本发明提供的方法包括如下步骤：以转基因动物的基因组DNA为模板，分别用目标基因引物和内参基因引物进行荧光定量PCR，分别得到转基因动物的目标基因和内参基因的荧光定量P...; 李奎鞠辉明白立景崔文涛牟玉莲唐中林杨述林程文科王志伟; 文献传递

长白猪不同时期和不同组织中GSK3基因的表达研究: 2016年; 为了研究糖原合成酶激酶3(GSK3)在长白猪不同时期和器官/组织中的表达情况,试验采用RT-PCR方法对长白猪不同时期器官/组织中GSK3进行测定。结果表明:GSK3在e50和e80时期均有高表达,且随着时间的延长表达量越来越低,在不同器官/组织中的表达也不相同,在肾脏、脾脏、肝脏中高表达,而在肌肉中低表达。说明其表达存在器官/组织和时间特异性,从而构建了GSK3在长白猪中的时空表达谱。; 张建斌白立景秦顺义李千军; 关键词：糖原合成酶激酶3 RT-PCR法长白猪肌肉基因表达

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白立景

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