王巧全
- 作品数：47 被引量：186H指数：8
- 供职机构：上海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目上海出入境检验检疫局科研基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 入境黄鳝颚口线虫检疫及虫种鉴定被引量：11
- 2011年
- 目的检查进口黄鳝（Monopterus albus）体内的颚口线虫Ⅲ期幼虫,并鉴定虫种。方法对2010年1月至2011年3月间从上海口岸入境的10批黄鳝进行颚口线虫寄生情况检疫。采样52尾,3-10尾/批,分别来自菲律宾（25尾）、印度尼西亚（24尾）和孟加拉国（3尾）,分尾解剖、切碎、蛋白酶消化后,悬液用10目铜筛过滤,取滤液沉淀。体视镜下挑出完整虫体,进行形态学鉴定,并计算感染率和感染度。提取颚口线虫基因组DNA,PCR扩增核糖体DNA第二内转录间隔区（internal transcribed spacer region 2,ITS2）和线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（cytochromec oxidase subunit 1,cox1）基因,对产物进行电泳和测序。测序结果与GenBank相应序列进行多重序列比对。结果从菲律宾和印度尼西亚进口的黄鳝中均检出有颚口线虫Ⅲ期幼虫寄生,阳性率分别为36.0%（9/25）和50.0%（12/24）,平均感染度分别为7.8（70/9）和2.8（34/12）。孟加拉国进口的黄鳝采样中未检出虫体。镜下显示,检获的虫体有头球,头球上有4环小钩,体表有横纹和小棘,体前部棘明显大而密,体后部棘渐小而疏。有1对颈乳突和4个颈囊。形态学特征与棘颚口线虫（Gnathostoma spinigerum）Ⅲ期幼虫相似。PCR结果显示,ITS-2和cox1扩增产物的长度分别为647 bp和441 bp,与预期大小一致。经测序后比对分析结果显示,2个扩增产物分别与棘颚口线虫ITS-2（GenBank登录号为AB181155和Z97175）和cox1（GenBank登录号为AY501388、AB180099和AB551552）基因片段序列一致性为99%~100%。结论从菲律宾和印度尼西亚进口黄鳝中检出的颚口线虫均为棘颚口线虫。
- 李树清李雯雯陈志飞李健陈韶红张永年黄维义王巧全
- 关键词：棘颚口线虫黄鳝虫种鉴定
- 基因芯片检测5种动物冠状病毒的初步研究被引量：1
- 2010年
- 采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。
- 李健谢爱织陈沁王巧全熊炜张建武王权胡永强
- 关键词：基因芯片检测GENECHIP特异诊断猪呼吸道冠状病毒犬冠状病毒杂交检测
- 液相芯片同步分型检测猪传染性胸膜肺炎抗体方法的建立和应用
- 目的：基于液相芯片技术建立一种对猪传染性胸膜肺炎抗体同步分型检测的新方法。 方法：制备抗体交联微球及生物素标记抗体，用双抗体夹心法测定临床血清样品，并对其特异性和敏感性进行检测。 结果：检测结果显示，该方法可以同时检...
- 王艳李树清杜军陈志飞王巧全
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎液相芯片双抗体夹心法
- 上海检验检疫局从泰国进境草虾中检出虾黄头病毒被引量：7
- 2006年
- [目的]准确检出进口虾体携带的虾黄头病毒,防止该病毒传入。[方法]OIE推荐的方法和SN/T1151．4-2003的方法。[结果]从泰国进境2批草虾中检出黄头病毒,并经基图片扩增和测序,其相应基图片的同源性为99%。[结论]从泰国进境的这两批草虾均感染有YHV。
- 熊炜邱璐李健蒋静王巧全胡永强
- 关键词：草虾RT-PCR虾病
- 荧光定量RT-PCR检测虾Taura综合征病毒方法建立及应用被引量：2
- 2007年
- 由Taura综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)引起的虾Taura综合征(Taura syndrome)是世界动物卫生组织(OIE)规定的必需上报的水生动物二类疫病。本研究采用Taqman探针技术建立了快速检测TSV的荧光定量RT-PCR方法,通过与常规RT-PCR方法对比,证实其检测灵敏度和阳性检出率明显提高。
- 熊炜邱璐李健蒋静王巧全李树清杨锡铨胡永强
- 关键词：TAURA综合征病毒草虾虾病
- 7种动物冠状病毒基因芯片同步检测的研究被引量：3
- 2007年
- 根据发布的7种动物冠状病毒相关基因的序列,给每种病毒设计了4～17对引物,同时依据RNA聚合酶基因序列合成了l对兼并引物,利用TCV原毒和纯化浓缩的CCV、FCV、FIPV、TGEV、PRCV、BCV细胞毒,构建了89个基因片段的克隆.采用煮沸裂解法制备质粒DNA,进行特异引物PCR扩增,回收纯化产物,点制冠状病毒基因芯片.抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,同时对BCV、CCV利用Cy3-dCTP随机渗入反转录标记,与芯片进行杂交检测.结果显示,BCV和TCV基因克隆间未见交叉,CCV、FCV、FIPV、TGEV、PRCV则存在广泛交叉.选择无交叉的特异克隆片段点制最终基因芯片,并与病毒多重PCR扩增产物杂交,芯片信号未见交叉,结果判断明确.表明,基因芯片检测法比传统PCR法敏感1000倍.
- 李健熊炜陈沁张建武王权王巧全胡永强李树清
- 关键词：冠状病毒基因芯片杂交
- TaqMan实时荧光RT-PCR检测猪脑心肌炎病毒方法的建立与应用被引量：1
- 2014年
- 针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)基因组保守区域,设计并合成了特异性引物和TaqMan探针,建立了EMCV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。通过常规RT-PCR方法扩增EMCV保守序列并将其连入pMD19-T载体,制备阳性标准质粒,优化反应条件,以10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,EMCV标准曲线的相关系数为0.999。结果显示,该方法检测灵敏度达到10拷贝/μL,对猪捷申病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒检测结果均为阴性。方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2%。检测采集自上海供港猪场、进境美国种猪、加拿大、法国种猪的血清样本145份,EMCV核酸的检出率国内猪场53.6%,美国猪检出率为27.6%,加拿大猪检出率为20%,法国猪检出率为26.7%。EMCV实时荧光RT-PCR方法的建立为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段。
- 张强王巧全熊炜李树清李健林颖峥黄忠荣
- 关键词：猪脑心肌炎病毒实时荧光PCRTAQMAN探针
- 上海等4省市动物冠状病毒的流行病学调查被引量：14
- 2007年
- 对上海、浙江、安徽和湖北4个地区感染鸡、鸭、猪、牛和犬的5种冠状病毒,即禽传染性支气管炎病毒(IBV)、猪传染性胃肠炎病毒(TEGV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、牛冠状病毒(BCV)和犬冠状病毒(CCV)进行病原学和血清学抽查,共完成测试样品2 368份,包括566份拭子样品和1 802份血清样品。检出IBV抗原阳性4份。在血清学调查中,发现IBV抗体的阳性率为86.4%(鸡)和0.7%(鸭);猪TGEV阳性率为6.8%,PRCV阳性率为18.7%;牛BCV阳性率为5.4%;犬冠状病毒的阳性率为50%。
- 蒋静李健胡永强邱璐熊炜王巧全
- 关键词：冠状病毒流行病学调查SARS动物
- 犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术被引量：6
- 2008年
- 蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。
- 李健熊炜陈沁王权王巧全张建武胡永强李树清
- 关键词：冠状病毒克隆基因芯片杂交
- 动物源性食品中弓形虫Nested PCR-RFLP分子检测技术的建立被引量：6
- 2007年
- 目的 为了建立一种快速、特异、灵敏检测动物源性食品中弓形虫的技术。方法根据原虫rDNA的部分序列，找出弓形虫和新孢子虫共同保守DNA片段，设计套式PCR两对引物，以Ultra Pure^TM基因组DNA快速提取试剂盒提取弓形虫和新孢子虫DNA为模板，初步建立了检测两种虫体的NestedPCR技术。将纯化的Nested PCR产物成功地克隆到pGEM-T-easy载体中，经鉴定、测序并进行同源性分析。结果 Nested—PCR的外、内引物对两种虫体rDNA基因均能进行扩增，长度分别在800～900bp、400～500bp之间。内引物扩增DNA序列与公布的同种虫体DNA序列同源性较高，弓形虫和新孢子虫分别达99.1％、97．2％，但它们两者之间差异较大，同源性仅为86．6％。用软件寻找能区别两者基因序列差异的酶切位点，挑选内切酶进行RFLP实验，结果表明新孢子虫NestedPCR扩增片段能被Vspl酶切。同时进行该分子检测技术的特异性和敏感性试验，实验证明该NestedPCR能对弓形虫和新孢子虫rDNA基因进行特异性的扩增，而对其它原虫基因未能扩增出任何片段；该Nested-PCR能检测出100个弓形虫速殖子／g猪肉。结论 本实验建立NestedPCR检测方法不仅可用于检测动物性食品中弓形虫，而且能明确区分弓形虫和新孢子虫。
- 王权王巧全潘淑娟陈志强陈永军常小斌李健
- 关键词：弓形虫新孢子虫套式PCR
