毛峰 作品数:15 被引量:30 H指数:3 供职机构: 华中科技大学同济医学院附属同济医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家临床重点专科建设项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
LRIG1在星形细胞瘤肿瘤发生中的作用 被引量:2 2010年 目的 观察表皮生长因子受体(EGFR)内源性抑制因子LRIG1在转录水平于星形细胞瘤中的表达及其与EGFR mRNA和肿瘤恶性程度的相关性,探讨其在肿瘤发生中的作用.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LRIG1和EGFR mRNA在35例Ⅰ~Ⅳ级星形细胞瘤组织中的表达水平.统计学分析各组间表达的差异性.结果 在多数肿瘤组织中LRIG1 mRNA低表达(27/35),EGFR mRNA存在过度表达(21/35),在18例低级别(Ⅰ~Ⅱ级)与17例高级别(Ⅲ~Ⅳ级)肿瘤中前者表达差异无统计学意义(P〉0.05),后者表达差异有统计学意义(P〈0.05).两者表达趋势无明显相关(r=0.187,P〉0.05).结论 作为EGFR信号系统的负反馈调节因子,LRIG1在mRNA水平的表达下调提示了它和星形细胞瘤的发生有关,其与EGFR的表达趋势及肿瘤恶性度的非相关提示其可能作为胶质瘤发生的早期影响因素. 叶飞 郭东生 谢蕊繁 王宝峰 曾亮 毛峰 李龄 雷霆关键词:星型细胞瘤 表皮生长因子受体 转录 LRIG1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定 被引量:1 2011年 目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-XHT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot检测LRIG1 m RNA和蛋白表达。结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 m RNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功。结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达。 毛峰 席桂发 杨洪宽 王宝峰 郭东生 雷霆关键词:慢病毒 基因转染 肿瘤相关颅神经疾病治疗的初步体会 颅神经疾病主要包括面肌痉挛,三叉神经痛,舌咽神经痛。原发性颅神经疾病通常是由血管压迫颅神经导致相应颅神经症状。继发性颅神经疾病通常由CPA器质性病变所引起,如肿瘤、炎症、外伤等。目的:本文针对继发性颅神经疾病的病因、发病... 王宝峰 毛峰 李有维 何跃 王和平 郭东生文献传递 干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制 被引量:2 2012年 目的探讨干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)基因表达促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制。方法用携带U6启动子的LRIG1特异性短发夹RNA(shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG1-shRNA(siRNA)及含非特异shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negativeshRNA(neg)转染U251细胞株,通过G418筛选,鉴定得到稳定转染细胞株。采用侵袭实验验证干扰LRIG1对U251侵袭性的影响,通过明胶酶谱实验检测基质金属蛋白激酶(MMP)-2、MMP-9的活性,Westernblot法检测表皮生长因子(EGFR)及其下游丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(P13K/AKT)信号通路蛋白的表达差异。结果含U6启动子LRIG1shRNA序列的质粒转染干扰组LRIG1mRNA降低至对照组(35.3%~39.2%,P〈0.05)。干扰LRIG1表达组U251细胞侵袭数[(159±15)-(188±9)/视野],较空白对照组细胞侵袭数[(28±9)/视野]明显增多(P〈0.05);干扰LRIG1激活EGFR通路传导;干扰LRIG1后干扰组MMP-2较对照组活性增加(1.66±0.11~1.96±0.12,P〈0.01),MMP-9干扰组较对照组活性增加(4.82±0.27~4.47±0.29)。结论LRIG1表达下调后MMP-2、MMP-9活性增强,从而促进U251细胞的侵袭性,可能通过激活EGFR信号通路引起。 毛峰 杨洪宽 邢细红 谢蕊繁 王宝峰 郭东生 雷霆关键词:基质金属蛋白酶 侵袭性 LRIG基因家族在胶质瘤中的研究进展 被引量:3 2015年 胶质瘤是颅内最常见的,起源于神经上皮组织的原发性神经系统肿瘤。根据世界卫生组织(WHO)分级标准,胶质瘤分为四级,其中胶质瘤I级是良性肿瘤,预后较好。胶质瘤Ⅳ,通常称为胶质母细胞瘤,恶性程度最高,预后最差,手术切除后辅以放疗和化疗,中位存活时间也仅约12—15个月,是临床医师面临的一个重大难题。 郭东生 王宝峰 毛峰 肖群根关键词:胶质瘤 抑癌基因 癌基因 LRIG1过表达对神经胶质瘤细胞EGFR信号传导的抑制作用 被引量:2 2010年 目的通过检测LRIG1在胶质瘤细胞中的亚细胞定位及LRIG1对EGFR的作用,探讨LRIG1对EGFR信号通路的抑制效应。方法用Confocal法及Westernblot法检测LRIG1质粒转染前后H4细胞中EGFR和LRIG1表达,MTT法检测LRIG1对细胞增殖的影响。结果在H4细胞中LRIG1低表达,EGFR高表达,均主要为膜表达;转染LRIG1质粒后,LRIG1表达增强,EGFR表达下降;细胞的生长受抑制。结论LRIG1主要位于胶质瘤细胞膜上,通过促进EGF受体的降解抑制其信号传导。 叶飞 王宝峰 谢蕊繁 李俊 徐同江 曾亮 毛峰 雷霆 郭东生关键词:神经胶质瘤 LRIG1 EGFR LRIG3基因过表达对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原和Ki-67表达的影响 被引量:3 2011年 目的探讨过表达LRIG3基因对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法用携带LRIG3过表达特异性序列和只含空白载体的质粒用慢病毒法感染胶质瘤细胞株U251与U87,筛选稳定株,分别分成实验组和对照组,通过逆转录.聚合酶链反应(RT—PCR)和Westernblot法检测各组细胞LRIG3表达的变化,应用噻唑蓝(MTr)比色法检测病毒感染后对胶质瘤细胞株U251与U87增殖的影响,用免疫组织化学链霉亲和素生物素复合物(SABC)法分别检测各组细胞中PCNA和Ki-67的表达差异。结果LRIG3过表达组细胞中LRIG3mRNA水平与对照组比较分别升高67.6%(U251)和79.9%(U87),LRIG3蛋白表达水平分别升高62.3%(U87)和91.0%(U251)。MTF法结果显示两实验组细胞增殖率均低于相应对照组。U251细胞对照组PCNA阳性率为(47.81±4.67)%,实验组为(27.49±3.17)%,U87细胞对照组PCNA阳性率为(55.50±4.01)%,实验组为(33.60±4.82)%,差异均有统计学意义(P〈0.05)。U251细胞对照组中Ki-67的阳性率为(48.50±6.11)%,实验组为(24.30±3.76)%,U87细胞对照组Ki-67阳性率为(55.20±4.19)%,实验组为(23.50±4.60)%,差异均有统计学意义(P〈0.01)。结论LRIG3基因过表达可减少胶质瘤细胞的增殖。 杨洪宽 毛峰 王宝峰 万峰 郭东生 雷霆关键词:神经胶质瘤 增殖细胞核抗原 AG1478对U87细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响 被引量:2 2011年 目的 观察表皮生长因子受体抑制剂Tyrphostin AG1478对人脑胶质瘤U87细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后的细胞生存率,流式细胞仪检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞周期分布和细胞凋亡.结果 5、10、15、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞生存率分别为(7 8.93±11.95)%、(46.42±4.12)%、(42.13±7.54)%和(37.48±4.69)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞凋亡率分别为(10.19±3.15)%、(32.02±1.60)%和(54.35±2.80)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞主要分布在G0~G1期,分别为(51.20±1.21)%、(78.61±1.57)%和(82.73±0.77)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Tyrphostin AG1478抑制体外人脑胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期在G0~G1期,诱导细胞凋亡,均呈浓度依赖性. 邢细红 王雄伟 毛峰 郭东生 汪雷 吴胜梅关键词:胶质瘤 表皮生长因子受体 细胞周期 脱噬作用 脂肪干细胞向神经元诱导分化的研究 被引量:2 2009年 目的研究脂肪干细胞向神经元分化的可行性,为神经系统疾病的替代治疗寻求行之有效的可种植细胞。方法用β-2-巯基乙醇和丁酸酯羟基茴香醚诱导脂肪干细胞向神经元分化,对干预后细胞进行形态学观察和细胞免疫组化鉴定。结果人类腹部脂肪来源的基质细胞进行原代和传代培养后细胞形态类似于成纤维细胞,经过诱导分化后细胞形态表现为典型的神经元形态,神经元特异性烯醇化酶鉴定绝大部分有阳性染色,但在不到一周的时间内死亡。结论脂肪组织中存在能分化为神经元的干细胞,有巨大的研究价值和临床应用前景。 毛峰 叶飞 韩林 舒凯 郭东生 谢蕊繁 雷霆关键词:脂肪来源干细胞 分化 神经元 颈段横纹肌样脊膜瘤一例 被引量:1 2016年 患者 男,6岁。因右肩部疼痛2个月,右上肢疼痛1个月,颈部及头部疼痛20d,左上肢疼痛10d,于2015年3月入院。查体:神志清楚,四肢活动自如,肌力肌张力均正常,病理反射未引出。 毛峰 刘羽 谢涛 柯昌庶 叶飞关键词:横纹肌样 脊膜瘤 右肩部疼痛 左上肢疼痛 颈段 四肢活动