梁久红
- 作品数：14 被引量：55H指数：5
- 供职机构：东南大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅医学科技发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 基于混合抗原p166Mix检测戊型肝炎病毒IgG抗体的间接法ELISA的建立和评价
- 目的:建立检测戊型肝炎病毒(HEV)IgG抗体的间接法ELISA,并进行评价。方法:以原核表达的不同基因型HEV ORF2 C端编码452-617aa的重组蛋白的等量混合抗原 p166Mix,建立检测HEV IgG抗体的...
- 梁久红孟继鸿
- 文献传递
- 兔戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白的抗原表位分析
- 2013年
- 目的:研究新发现的兔戊型肝炎病毒(HEV)与所有已知基因型HEV抗原表位的异同,为阐明动物HEV的人畜共患特征及戊型肝炎的诊断提供依据。方法:制备兔HEV ORF2重组蛋白R166(aa452-617),并免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(McAb);采用间接ELISA法及免疫印迹法,检测McAbs与已知基因型HEV ORF2重组蛋白p166Bur(1型)、p166Mex(2型)、p166US(3型)和p166Chn(4型)的交叉反应性。用获得的杂交瘤细胞制备腹水,利用基于PCR的HEV体外中和试验,检测它们对基因1、4型人HEV和兔HEV的中和活性。结果:获得3株稳定分泌抗-R166的McAbs的杂交瘤细胞株,即1C1、6F9和10D2。其中1C1和6F9分泌的McAbs与已知1、2、3、4基因型p166均结合;10D2分泌的McAb只与R166特异结合,而不与1、2、3、4基因型p166结合。3株McAbs腹水均不能中和基因1、4型人HEV和兔HEV,提示3株McAbs针对非中和性抗原表位。结论:兔HEV与已知1、2、3、4基因型HEV既含有共同的抗原表位,也含有不同的抗原表位,具有不同的抗原特征。
- 王松戴星董晨董敏梁久红孟继鸿
- 关键词：抗原表位单克隆抗体
- 戊型肝炎病毒第Ⅳ基因型特异性抗原表位的鉴定与定位被引量：2
- 2006年
- 目的研究戊型肝炎病毒(HEV)第Ⅳ基因型巾国株开放阅读框架(ORF)2编码蛋白p166Chn的抗原表位特征。方法制备HEV ORF2重组衣壳蛋白p166Chn的特异性单克隆抗体(McAb)．进行中和活性鉴定,并利用7种HEV不同基因型p166重组蛋白以及22种N端或C端逐步截短的p166Chn进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,确定McAb所识别抗原表位的性质和位置。结果获得1株稳定分泌HEV McAb的杂交瘤细胞株,命名为B_4。该McAb不与其他基因型p166重组蛋白反应,不能中和HEV对培养细胞的感染性,也不能竞争抑制已知中和性McAb与抗原p166Chn的结合,表明McAb B_4所针对的抗原表位是HEV第Ⅳ基因型特异的非中和性抗原表位。此外,McAb B_4能与截短蛋白pN452、pN460、pN462、pN463、pN464、pN465、pN466、pN468、pN470和pN472发生阳性反应,而与pN482、pN492、pC587、pC597、pC599、pC600、pC601、pC603、pC605、pC607、pN465- C601和pN460-C605均不反应。表明其可识别的抗原表位位于472～617位氨基酸,而且N端第472～482位氨基酸以及C端第607～617位氨基酸的1个或多个氨基酸对构成该抗原表位起着重要作用。结论所发现的HEV第Ⅳ基因型特异性抗原表位是1个非中和性的构象依赖性表位,可定位于pORF2的第472～617位氨基酸。
- 汪源梁久红董晨田华戴星赵宇孟继鸿
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原表位单克降抗体基因型
- 戊型肝炎病毒中和抗体的竞争酶联免疫检测方法
- 本发明公开了一种戊型肝炎病毒中和抗体的竞争酶联免疫检测方法，其特征在于血清(浆)或其他生物学样本中的抗戊型肝炎病毒中和抗体与酶标记戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体竞争结合包被抗原上的中和抗原表位，根据酶作用底物显色反应减弱的...
- 孟继鸿戴星梁久红田华赵宇董晨汪源邓蕾张红梅
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒ORF2基因编码蛋白的抗原表位分析及其意义
- 戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)是无包膜的单股正链RNA病毒,主要经消化道传播,引起急性病毒性肝炎(戊型肝炎,Hepatitis E,HE),严重危害人类健康。已在多种动物体内分离到HEV毒株,...
- 梁久红
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原表位基因分型血清学分型
- 文献传递
- 基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定
- 2004年
- 目的 :获得戊型肝炎病毒 (HEV )中和表位 p166的编码基因 ,构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法 :应用RT PCR方法从粪便标本中扩增获得HEVORF2中G64 61～G70 3 5片段 ,通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型 ,PCR方法扩增该片段中HEV中和表位 p166的编码基因 ,经酶切后克隆于真核表达载体 pTR42 1质粒 ,并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果 :成功克隆了 p166的编码基因 ,其基因型别为Ⅳ型 ;经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR42 1质粒 ,且核酸序列、读码框架正确。结论 :成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒 ,为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。
- 翟理杰王立新房雪峰梁久红林陵赵宇孟继鸿
- 关键词：戊型肝炎病毒中和表位基因免疫真核表达载体
- 唾液抗戊型肝炎病毒IgM用于戊型肝炎诊断的探讨被引量：2
- 2005年
- 目的应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测唾液中抗戊型肝炎病毒(HEV)-IgM,评价其用于戊型肝炎早期诊断的可行性。方法应用东南大学基因工程疫苗研究所建立的HEV-IgM抗体ELISA检测方法,检测77例急性戊型肝炎患者、63例非戊型肝炎患者及64例正常人的唾液和血清样本中抗HEV-IgM,将唾液和血清两者的检测结果加以比较,并观察标本采集时间对检测结果的影响。结果77份急性戊型肝炎患者血清与唾液抗HEV-IgM阳性符合率为87%;在64份正常对照组及63份其他患者对照组中,血清与唾液抗HEV-IgM均阴性,阴性符合率为100%。标本采集时间对唾液和血清检测结果的相关性无显著影响。结论唾液标本用于抗HEV-IgM检测,特异性好,敏感性较高,具有无创伤、容易采集、操作简便等优点,在特殊情况下可代替血清用于戊型肝炎的诊断,尤其适用于戊型肝炎流行时HEV近期感染的血清流行病学调查。
- 耿全林梁久红李丹平丁福张兰芳周镇先孟继鸿
- 关键词：唾液免疫球蛋白M酶联免疫吸附测定
- 戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同被引量：11
- 2004年
- 目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 p16 6MexMcAbs的杂交瘤细胞株 ,然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEVORF2编码蛋白p16 6的免疫反应性。结果 :获得 4株杂交瘤细胞株 ,即分泌抗 p16 6BurMcAbs的 2C2 、2B1 以及分泌抗 p16 6MexMcAbs的D8G1 0 和E5E1 2 ,其中 2B1 分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合 ,而其余 3株分泌的McAbs既能与I、II基因型HEV的p16 6重组蛋白发生反应 ,也能与III、IV基因型的p16 6蛋白反应。结论 :HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。
- 赵宇梁久红孟继鸿张兰芳张红梅丁福季晓辉
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原表位单克隆抗体重组蛋白基因型
- 南京地区戊型肝炎病毒基因型鉴定和变异分析被引量：17
- 2005年
- 为了解南京地区戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)基因型的分布以及变异状况,本研究采用逆转录套式聚合酶反应(RT-nPCR)的方法检测南京地区40份急性散发性戊型肝炎患者的粪便标本,对PCR产物进行测序,利用生物信息学软件比较核苷酸的同源性、遗传距离,进行基因分型和变异分析。40份粪便标本中检测到14份阳性HEV、RNA,检出率为35%,基因分型均为HEV IV型,且分属2个不同的亚型;利用生物信息学软件对国内I型和IV型毒株加以比较,发现HEV IV型毒株比I型变异程度高,不同年份的HEV IV型毒株变异更大,有新的亚型出现,且变异有随时间推移而增大的趋势。
- 程险峰戴星孟继鸿张红梅周镇先丁福梁久红耿全林
- 关键词：戊型肝炎病毒基因型
- 丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法 分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论 HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。
- 乔伟振孟继鸿李丽梁久红耿全林周镇先
- 关键词：丙型肝炎病毒重组抗原抗体检测酶联免疫吸附试验
