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喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌的AFLP基因分型研究被引量：2: 2014年; 目的通过对喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌(AB)的扩增片段长度多态性分析(AFLP),了解鲍曼不动杆菌的同源性,并探讨其耐药基因分型与AFLP分型之间的联系。方法 Primer Premier 5软件设计11对喹诺酮耐药基因,利用PCR技术对52株喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌进行分析,同时使用扩增片段长度多态性分析(AFLP)技术研究基因型,Cross Checker和ntsys软件分析耐药基因和UPGMA方法分析AFLP基因的树型聚类情况。结果 52株鲍曼不动杆菌均对喹诺酮类药物耐药。由聚类分析的结果显示,该52株AB可分2个基因群,其中A群包括A1、A2和A3三个亲缘关系相近的基因型,B群则包括B1和B2两个亲缘关系相近的基因型,A1型为优势菌群。同型的A27、28、30、32、37、47、56均分离自ICU,ICU可能存在过耐药AB的暴发流行。通过与前期研究比较,耐药基因的多基因聚类分析与AFLP树型聚类分析具有一致性也存在不同之处。结论 ICU或许已成为耐药AB菌传播的一个重要枢纽。两种细菌分类方法各有优势,AFLP法是针对全细菌基因组的限制性酶切,在调查细菌流行病学和监控医院整体感染情况方面更权威。; 张伟铮刘纹蓝锴屈平华鄂顺梅林冬玲陈茶; 关键词：鲍曼不动杆菌

临床分离苍白杆菌和假苍白杆菌的质谱研究: 2019年; 目的对临床分离的57株苍白杆菌和假苍白杆菌进行质谱(MALDI-TOF-MS)研究,为临床快速诊治提供参考。方法以16S rRNA为鉴定的"金标准",对57株菌进行MALDI-TOF-MS IVD和RUO两个系统检测,应用SARAMSPremium软件对菌株的质谱图进行比较,并聚类分析。结果除人苍白杆菌外的苍白杆菌属和假苍白杆菌属都不在IVD鉴定的数据库范围内。17株人苍白杆菌中,RUO把5株人苍白杆菌鉴定为苍白杆菌属,12株鉴定为人苍白杆菌,两者质谱峰图差异无统计学意义;10株中间苍白杆菌均鉴定为苍白杆菌属,和同样鉴定为苍白杆菌属的人苍白杆菌比较,两者质谱峰图于峰值5756.27处差异有统计学意义。RUO能精确鉴定出假格里尼翁苍白杆菌。26株解糖精假苍白杆菌中有22株鉴定为假苍白杆菌属,4株鉴定为解油脂/解糖精假苍白杆菌,两者质谱峰图差异无统计学意义。17株人苍白杆菌和26株解糖精假苍白杆菌聚类分析结果相似性均>70%,提示其分别属于相同菌种,且菌种间质谱的重复性好。结论 VITEK MS RUO能把苍白杆菌属和假苍白杆菌属区分开来,且菌种间质谱的重复性好,为临床诊治提供快速的依据。; 林冬玲龙一飞屈平华张伟铮陈茶; 关键词：苍白杆菌质谱聚类分析

接合转移质粒pUCP24T的构建与性能研究被引量：1: 2013年; 目的构建能在大肠埃希菌(E.coli)和铜绿假单胞菌(PA)间高效接合转移的质粒。方法通过NCBI blastn程序分析质粒pCVD442接合反应起始序列oriT,PCR扩增oriT后插入pMD18-T,再将pMD18-oriT转化E.coli DH5α,经酶切、测序验证后用SmaⅠ和HindIIII双酶切亚克隆至质粒pUCP24,获得质粒pUCP24T,将pUCP24T转化E.coli后研究pUCP24T从E.coli到PA的接合效率和质粒稳定性等。结果成功构建pUCP24T重组质粒,在E.coli和PA的接合实验中,E.coli(pUCP24T)-PA共培养2 h的接合效率平均为3.588×10-2,按12 h一代连续9代继代培养108 h,抗生素压力下质粒保存率为98.29%,无抗生素的培养基中质粒保存率为21.76%。结论成功构建高接合效率的接合转移质粒pUCP24T。; 陈树林陈茶黄彬张妮鄂顺梅蔡壬辛袁慧曲平华林冬玲; 关键词：铜绿假单胞菌基因水平转移

连续监测血培养系统中肺炎链球菌自溶特点分析被引量：6: 2013年; 目的：研究临床分离的肺炎链球菌菌株的血清型和重要毒力因子碱基序列的保守情况，为临床肺炎链球菌疫苗的使用和蛋白质疫苗的研发提供参考依据。方法：收集2010~2013年重庆医科大学附属儿童医院11岁以下儿童中分离的46株肺炎链球菌，用多重PCR进行血清型分型。同时PCR扩增肺炎链球菌的11个毒力基因ply、lytA、nanA、phtD、clpP、cps2A、bacteriocin、psaA、piaA、pcsB和stkP，测序后分析碱基序列的突变情况。结果：46株肺炎链球菌共检出13种血清型，其中19A（19.57%）为最常见的血清型，其次为23F和19F（各占15.22%）。临床菌株毒力基因ply、lytA、nanA、phtD、clpP、cps2A、bacteriocin、psaA、piaA、pcsB和stkP的碱基序列保守性分别为97.82 %、96.31 %、82.96 %、87.50 %、98.48 %、83.68 %、66.27 %、99.46 %、98.63 %、88.72 %和96.67 %。结论：在重庆地区儿童感染的肺炎链球菌中，血清型19A分布比例最高，本地区儿童接种肺炎链球菌疫苗时应首选含有19A血清型荚膜多糖抗原的PCV13疫苗。毒力因子ply、stkP、piaA、lytA、clpP和psaA基因在临床菌株中保守性较高，具有作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白质的潜力。; 蔡婷婷屈平华穆小萍张磊林冬玲陈茶吴尚为; 关键词：血培养系统肺炎链球菌细菌鉴定

2008-2011年肠杆菌科细菌耐药性变迁及对碳青霉烯类抗生素的耐药机制被引量：7: 2013年; 目的研究临床分离的肠杆菌科细菌的耐药性变迁和对碳青霉烯类药物不敏感的肠杆菌科细菌(CNSE)的耐药机制,为抗感染治疗提供依据。方法应用VITEK-2型全自动微生物检测系统对细菌进行鉴定及药敏试验,用PCR法检测A、B、D类碳青霉烯酶基因和esbls基因,并用核酸测序法进行验证。结果 2008-2011年共分离肠杆菌科细菌4154株,四年间对碳青霉烯类药物的耐药率并未显著升高(P>0.05)。对于CNSE而言,氨基糖苷类抗生素特别是阿米卡星的敏感率最高,在90%以上。从338株CNSE中随机挑选出182株进行耐药基因的检测,esbls基因tem、ctx-M、shv和碳青霉烯酶基因kpc、imp的阳性率分别为36.8%、31.9%、19.8%、2.2%和3.3%。kpc和imp主要在肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和大肠埃希菌中检出,未检出其他碳青霉烯酶耐药基因,包括ndm-1基因。结论肠杆菌科细菌对碳青霉烯类、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦仍保持高度敏感。CNSE对碳青霉烯类药物敏感性降低是多种耐药机制共同作用的结果,ndm-1不是导致肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物敏感性降低的原因。; 蔡壬辛黄彬陈树林陈茶林冬玲何秋莹袁慧张妮房承才; 关键词：肠杆菌科细菌耐药性 NDM-1

铜绿假单胞菌耐药性及质粒介导的耐环丙沙星分子机制研究被引量：3: 2012年; 目的研究临床分离铜绿假单胞菌的耐药性和质粒介导铜绿假单胞菌对环丙沙星耐药的分子机制。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法测定铜绿假单胞菌对24种常用抗菌药物的药敏率,用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因,包括qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr。结果 423株铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为23.2%,对第一、三代头孢菌素类药物的耐药率>49.2%(除头孢他啶为22.7%),对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星的耐药率分别为17.5%、17.5%和13.0%,对青霉素类药物的耐药率>40.4%(除哌拉西林为26.2%),对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率差异较大,哌拉西林/他唑巴坦为17.0%,而氨苄西林/舒巴坦为98.6%;对碳青霉烯类药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为24.6%和26.0%;127株耐环丙沙星铜绿假单胞菌的耐药性明显升高,对左氧氟沙星的耐药率为86.6%,对第三代头孢菌素的耐药率上升至>61.4%,对第四代头孢菌素头孢吡肟的耐药率由20.3%上升至62.2%,对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率从17.0%上升至>49.6%,对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素的耐药率上升至>64.6%,对阿米卡星的耐药率由13.0%上升至48.8%;耐环丙沙星铜绿假单胞菌中未检出qnrS基因和qnrC基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac(6′)-Ib-cr的阳性率分别为31.2%、87.5%、15.6%、10.9%、39.1%。结论临床分离的耐环丙沙星铜绿假单胞菌携带qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrS、qnrC基因;qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因是质粒介导的铜绿假单胞菌耐环丙沙星的主要机制。; 陈茶黄彬陈利达吴强贵陈树林李有强林冬玲张妮; 关键词：铜绿假单胞菌环丙沙星耐药

应用16SrRNA基因序列分析与细菌生化反应鉴定膝关节脓液分离的念珠状链杆菌被引量：6: 2014年; 目的:对我院一名患者左膝关节脓液中分离到的1株少见病原菌进行16S rRNA基因测序鉴定,探讨该方法在临床病原菌鉴定方面的意义。方法:采用16S rRNA基因序列的测定、细菌形态学以及商品化的Vitek 2全自动细菌鉴定药敏系统、API 20NE、API 20E与API 50CH系统的生化实验进行细菌的表型鉴定。结果:该菌在血平板和巧克力平板生长缓慢,麦康凯平板不生长;血平板上菌落形态呈1~2 mm"油煎蛋"圆形凸起,边缘光滑、半透明、湿润;镜下革兰染色阴性,呈链状排列,菌体1~3μm,呈圆形、卵圆形或梭形等;Vitek 2 GN-13、API 20NE、API 20E均为不能鉴定的细菌;16S rRNA基因序列分析的结果显示该菌与念珠状链杆菌的相似度为100%。结论:该膝关节脓液分离出的病原菌为念珠状链杆菌,16S rRNA基因序列分析能提供有力的遗传学证据,结合细菌的生化反应可准确地鉴定该菌。; 张伟铮邓光远屈平华陈文科林冬玲陈茶; 关键词：生化反应 RRNA

多重耐药铜绿假单胞菌分子流行病学的研究被引量：3: 2011年; 目的探讨广东省中医院72株多重耐药铜绿假单胞菌分子流行病学情况。方法采用纸片扩散法检测72株多重耐药铜绿假单胞菌对12种抗菌药物的敏感性,并用脉冲场凝胶电泳进行分子分型和同源性分析。结果 72株多重耐药铜绿假单胞菌均对3类或3类以上抗菌药物同时耐药,脉冲场凝胶电泳图谱可分成17基因型(A～Q),其中A型40株。结论本地区虽未发生暴发流行,但仍存在流行优势克隆株,应积极配合医院感染管理部门进行耐药性监测,防止医院感染和暴发流行。; 陈茶林冬玲李有强张妮袁慧曾建明张伟铮黄彬

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药表型、基因型和分子流行病学的研究: 背景和目的:铜绿假单胞菌(PA)是临床常见的条件致病菌，广泛分布于自然界及健康人的皮肤、肠道和呼吸道，常感染免疫力低下患者，由它引起的院内感染高达30％以上。由于该菌耐药性强，耐药谱广，对多种抗菌药物表现出天然或获得性耐...; 林冬玲; 关键词：铜绿假单胞菌亚胺培南分子流行病学耐药表型耐药基因

中药对多重耐药铜绿假单胞菌外排泵的作用研究被引量：13: 2017年; 目的研究中药与常用抗生素的相互作用和对多重耐药铜绿假单胞菌(multi drug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDR-PA)外排泵的作用。方法采用外排泵抑制剂联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)筛选外排泵阳性MDR-PA,并用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,q PCR)确认外排泵基因高表达菌株。检测10种常用中药对抗生素的作用和对外排泵阳性MDR-PA外排泵基因表达的影响。结果从34株MDR-PA中筛选到5株外排泵阳性菌,q PCR法检测到这5株菌外排泵基因的表达水平是野生型铜绿假单胞菌PAOl的2倍或2倍以上(P<0.05)。黄芩、金银花和夏枯草对环丙沙星有较强的拮抗作用,穿心莲和五倍子对庆大霉素的拮抗作用最强,穿心莲和夏枯草对美罗培南的协同作用最强。穿心莲、金银花、夏枯草和五倍子具有促进外排泵基因表达的作用。结论中药穿心莲、金银花、夏枯草和五倍子可通过促进外排泵基因的表达拮抗抗生素的抗菌作用,临床抗感染治疗时需谨慎使用。; 王淋荆曾建明鲁洋蓝锴罗强林冬玲张伟铮陈茶; 关键词：铜绿假单胞菌多重耐药外排泵穿心莲五倍子

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林冬玲

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