杜晓明
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：郑州大学生物工程系更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 对虾白斑综合征病毒LAMP检测方法的建立被引量：6
- 2011年
- 根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28的基因序列设计合成4条特异性引物,以pMDT-VP28重组质粒为标准模板,通过优化反应体系和反应条件,建立了WSSV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对WSSV-DNA的最低检测限,并与巢式PCR进行了比较。结果显示,该LAMP方法的最佳反应温度为65℃,反应时间为60min;LAMP对WSSV的最低检测限为10copies/μL,而巢式PCR为100copies/μL,表明该LAMP方法的敏感性显著高于巢式PCR检测方法。因此,WSSV的LAMP检测方法比PCR更为简便、快速、灵敏,且无需昂贵的变温仪器,更适应水产养殖的现地检测,本研究为WSSV早期感染的快速检测提供了新方法。
- 冯华张改平郭军庆王爱萍赵丽娜杜晓明王林林
- 关键词：对虾白斑综合征病毒环介导等温扩增巢式聚合酶链反应
- 新霉素免疫膜层析检测方法研究被引量：2
- 2011年
- 【目的】研制新霉素(neomycin,NEO)免疫膜层析快速检测试纸。【方法】建立分泌抗新霉素单克隆抗体(NEO mAb)杂交瘤细胞株,用胶体金免疫膜层析试验(GICA)制备NEO残留快速检测试纸(NEO-Strip),并对其性能进行鉴定。【结果】抗新霉素单克隆抗体的亲和力常数为3.75×1010 mol.L-1;制备的NEO-Strip目测限为50 ng.mL-1;试纸可特异性检测NEO,与庆大霉素、链霉素、妥布霉素、紫苏霉素、莱克多巴胺、沙丁胺醇、泰乐菌素和氯霉素等其它药物均无交叉反应性;就定性检测而言,其结果与高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS-MS)完全一致;不同的基质液对试纸的敏感度影响甚微。【结论】建立了特异的NEO免疫层析检测方法。
- 王爱萍李发弟胡骁飞史兆国周景明杜晓明王林林禹乐乐刘明阳
- 关键词：新霉素单克隆抗体胶体金试纸条
- 重组人早孕因子的表达与纯化被引量：6
- 2011年
- 早孕因子(EPF)是具有免疫抑制和生长调节活性的妊娠相关蛋白,为目前最早确认妊娠的生化指标之一。为获得人早孕因子重组蛋白,通过PCR技术扩增人早孕因子基因,克隆入原核表达载体pGEX-6p-1,与GST基因相融合,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌表达菌株BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达,通过GST树脂纯化表达蛋白。结果成功构建重组表达质粒pGEX6P-EPF,在大肠杆菌中诱导表达了GST-EPF融合蛋白,表达蛋白分子量为37.3kDa,并能被抗GST单克隆抗体特异识别,GST亲和层析纯化,制备了EPF重组蛋白。
- 杜晓明张改平王丽郭军庆王林林冯华权凯王爱萍
- 关键词：早孕因子原核表达重组蛋白
- 猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立
- 2011年
- 为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。
- 邬成业史平玲乔松林王爱萍郝慧芳杜晓明王林林张改平
- 关键词：共转染
- 人早孕因子表达与促细胞生长模型的初步建立
- 早孕因子(early pregnancy factor, EPF)是哺乳动物妊娠早期母体血清中最早出现的一种免疫抑制因子。具有免疫抑制和生长调节两种功能，为目前最早确认妊娠的生化指标之一。小鼠受精后6h，猪、牛、山羊24...
- 杜晓明
- 关键词：早孕因子原核表达重组蛋白哺乳动物
- 缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性
- 2011年
- 目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。
- 王林林张改平郭军庆王丽杜晓明冯华权凯王爱萍
- 关键词：早孕因子原核表达PCR
- 人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达被引量：3
- 2011年
- 提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NS0细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hsp10)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM-002157)、鼠肌肉Hspe1 mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPE1-1和Hspe1-1,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%。将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达。检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致。Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白。为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础。
- 王丽杜晓明王林林史西保藤蔓李功权权凯郭军庆张改平
- 关键词：热休克蛋白基因克隆原核表达
