李素彦
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CENP－I表达下调对HEK293细胞生长及染色体分离的影响被引量：1
- 2009年
- 目的构建CENP-I特异性RNA干扰真核表达载体,体外观察抑制CENP-I基因表达对HEK293细胞生长、细胞周期和染色体数目异常率的影响。方法构建CENP-IsiRNA真核表达载体,脂质体法将pGenesil-1空载体和pGene-sil-1/CENP-I-siRNA-1、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-2、pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3真核表达载体分别导入人胚肾HEK293细胞。转染后24、48、72h收集细胞用Western blot和FQ-PCR检测HEK293细胞内CENP-I蛋白及mRNA水平的表达情况,以确定干扰效果及最佳干扰时间。MTT法检测各实验组细胞生长情况,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布,Giemsa染色法计数细胞分裂指数,常规法制备染色体标本。结果成功构建CENP-I siRNA真核表达载体,筛选出具有干扰效果的质粒载体即pGenesil-1/CENP-I-siRNA-3,转染人胚肾HEK293细胞72h后可使CENP-I蛋白及mRNA表达显著下凋。CENP-I表达降低的HEK293细胞生长速度明显减慢(P<0.05),G2/M期细胞增加,分裂期细胞比例增大。结论RNA干扰有效地特异性抑制着丝粒特异性蛋白质CENP-I的表达。CENP-I的抑制可使人胚肾HEK293细胞生长减慢,增殖能力减弱,使细胞分裂期延长。
- 袁泰先蔡燕彭乙华翁亚光施琼刘子杰刘斌李素彦
- 纺锤体检查点蛋白BubR1在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达
- 2008年
- 目的观察纺锤体检查点蛋白BubR1在人类肝癌组织、正常肝组织以及肝癌细胞系(HepG2)、正常肝细胞系(LO2)有丝分裂期表达水平的差异,以探讨BubR1蛋白在肝癌发生中的作用。方法用荧光定量PCR和Western blot检测BubR1基因在肝癌组织、正常肝组织,以及在2种细胞中用Nocodazole处理前后的mRNA和蛋白的表达水平。结果BubR1基因在正常组织中的表达高于肝癌组织,在Nocodazole处理前2种细胞中表达无显著差异,在处理后2种细胞中表达均增高,但在LO2细胞中上调水平大于HepG2细胞。结论BubR1基因低表达可能在肝癌的发生过程中起重要作用。
- 刘斌王箭翁亚光蔡燕刘子杰李素彦
- 关键词：肝癌
- CENP-E基因表达下调可增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨CENP-E(centromere protein E)基因在紫杉醇治疗肿瘤中的作用。方法:构建针对CENP-E基因的特异性短发夹RNA(short hair RNA,shRNA)载体,电转法导入人宫颈癌HeLa细胞,转染48h后,运用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)、Western印迹法及间接免疫荧光方法评价RNA干扰效果;CENP-E表达下调的HeLa细胞及对照组细胞用不同浓度(1、3、10、30、100、300、1000和3000nmol/L)的紫杉醇处理,MTT法检测细胞增殖情况,FCM法检测细胞凋亡情况。结果:shRNA-CENP-E可有效抑制CENP-E的mRNA、蛋白水平以及内源性表达。MTT结果显示,CENP-E表达下调的细胞在不同浓度紫杉醇作用下的增殖抑制率与对照组相比明显增加(P<0.05),并呈现剂量依赖性;FCM结果显示,下调CENP-E表达后细胞的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:下调CENP-E的表达能增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性。
- 李素彦翁亚光蔡燕
- 关键词：宫颈肿瘤小分子干扰紫杉醇
- CENP-E蛋白动力结构域对细胞周期及染色体分离的影响
- 2009年
- 目的:克隆含CENP-E蛋白动力结构域的真核表达载体,并观察其对染色体分离的影响.方法:采用RT-PCR、分子克隆技术获得含CENP-E动力结构域的真核表达载体pEG-FP-CENPE1(1～336位氨基酸),pEGFP-CENPET1(包括1～336和2078～2492位氨基酸),通过流式细胞术、染色体核型分析观察CENP-E蛋白动力结构域对染色体分离的影响.结果:成功构建出pEGFP-CENPE1,pEGFP-CENPET1融合质粒并在HEK293细胞中正确表达;流式细胞术和染色体核型分析结果表明:转染含CENP-E蛋白动力结构域的载体的细胞在用破坏纺锤体微管药物处理后不能保持于细胞分裂中期,细胞提前进入分裂后期;非整倍体细胞数目增多.结论:过度表达含CENP-E动力结构域不能使受诺考达唑处理的细胞保持于分裂中期,染色体分离出现错误,非整倍体数目细胞增多.
- 刘子杰翁亚光李素彦施琼蔡燕刘斌张燕闫琛
- 关键词：CENP-E结构域细胞周期
- 用FRET方法研究与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域被引量：5
- 2009年
- 目的:探索与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域。方法:将重组质粒pEGFP-CENPE2(674～1085位氨基酸)、pEGFP-CENPE3(1200～2134位氨基酸)转染人胚肾293(HEK293)细胞,采用受体漂白荧光共振能量转移方法(FRET方法),检测EGFP-CENPE2、EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率(Ef),进一步用免疫共沉淀方法验证FRET的实验结果。结果:重组质粒转染HEK293细胞后经激光共聚焦显微镜观察重组质粒表达的融合蛋白与Mps1都存在着共定位;FRET检测结果显示EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率为[(12.63±0.48)%,n=30],pEGFP-CENPE2和Mps1间的能量转移率为[(3.07±0.21)%,n=30],与对照组[(2.96±0.27)%,n=30]比较pEGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率差异存在显著性(p<0.05),免疫共沉淀实验结果显示EGFP-CENPE3与Mps1蛋白间存在相互作用。结论:FRET技术和免疫共沉淀实验证明了EGFP-CENPE3与Mps1间存在着相互作用。
- 刘子杰翁亚光李素彦施琼蔡燕刘斌张燕阎琛
- 关键词：CENP-E蛋白质相互作用荧光共振能量转移
- CENP-E基因表达下调增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性
- 紫杉醇是一种作用较强的化疗制剂，可与细胞内纺锤体微管结合，抑制微管的组装，破坏纺锤体微管聚合解聚的动态平衡，从而导致有丝分裂阻滞及细胞死亡。目前常用于乳腺癌和卵巢癌等实体瘤的治疗，但是其作用常因药物耐受的形成而受到限制。...
- 李素彦
- 关键词：腺病毒载体CENP-E宫颈癌细胞敏感性紫杉醇
- 文献传递
