张迟
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院环境与健康教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用
- 2006年
- 目的改进聚合酶链反应(PCR),并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌(E.coliDH5α),筛选阳性克隆,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSF lA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛未呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。
- 张莉君王先良张迟孙晞徐顺清
- 关键词：甲基化聚合酶链反应E-CADHERINRASSF1A
- 一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法被引量：3
- 2005年
- 以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶I降解未能结合的探针.接着将保护下来的探针与连接子杂交、连接和对连接产物进行定量PCR .分别建立连接产物标准品浓度与Ct 值的标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线,通过定量PCR对凝血酶进行定量.结果显示,基于适体的外切酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高,连接产物标准品浓度的对数值和Ct 值之间的方程为y =- 2 95x + 33 6 5 (R2 =0. 990 ,P <0 .0 1) ;凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程为y =0 94x - 0 . 2 9(R2 =0 . 998,P <0 . 0 1) ,还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.
- 王先良王小利苏艳华张迟张莉君李芳李柏生李晓波徐淑雷李媛媛徐顺清
- 金纳米颗粒修饰寡核苷酸适配子对蛋白质进行比色检测方法被引量：4
- 2006年
- 目的利用核酸适配体(aptamer)建立一种检测与疾病有关蛋白质的新方法。方法用金纳米颗粒(AuNP)修饰的寡核苷酸适配子与蛋白质结合,同时另一个生物素化的寡核苷酸适配子也结合于蛋白质,构成一个三明治形式的复合物,接着三明治复合物被卵白素结合于酶标板上,利用银离子强化技术对复合物上的蛋白质浓度信息进行放大,然后用酶标仪对吸光度进行检测。结果(1)本研究可以得到吸光度与PDGF-BB浓度的剂量-效应关系曲线,在一定的浓度范围内(1fM^1μM),吸光度与PDGF-BB浓度的对数值呈线形相关,决定系数R2=0.9801;(2)本方法可以检测出1fmol/L的靶蛋白质。结论本方法有较高灵敏度,不需要复杂的仪器,易于操作,是一种新颖而应用前景的蛋白质标志物分析方法。
- 张迟李柏生赵立凡张丽君徐顺清
- 关键词：蛋白质
- 应用Aptamer分子提高实时定量PCR的特异性
- 2006年
- 目的探讨Aptamer应用于普通Taq酶扩增的实时定量(Real-time)PCR反应体系能否提高反应的特异性,减少引物二聚体的产生。方法在使用SYBR Green I作荧光染料,普通Taq酶扩增的Real-time PCR反应体系中添加一定量的Aptamer,与未加Aptamer的PCR反应体系和采用了热启动酶的反应体系同时在Reche Light-Cycle 2.0中进行扩增。结果添加了Aptamer和采用热启动酶的反应体系,引物二聚体得到有效的控制,而未加Aptamer的反应体系,融解曲线中,在产物峰前面有明显的代表引物二聚体的“肩峰”出现。结论Aptamer分子可以有效的抑制引物二聚体的产生和非特异性产物的扩增。
- 李柏生李芳王先良张迟徐顺清
- 关键词：聚合酶链式反应二聚体特异性
