张晴晴
- 作品数：3 被引量：25H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 采用噬菌体展示技术筛选玉米赤霉醇的单链抗体被引量：2
- 2009年
- 目的从噬菌体单链抗体库中筛选玉米赤霉醇(ZER)的阳性克隆。方法人工抗原ZER-BSA作为包被原,采用负筛选,经过连续3轮固相"亲和-洗脱-富集"筛选,富集了噬菌体抗体库中阳性克隆的比例,同时采用Trypsin和ZER竞争洗脱2种洗脱方法。ELISA鉴定阳性克隆,运用SDS-PAGE方法对大肠杆菌分泌蛋白进行了时间条件的摸索。结果随着淘洗轮数的增加,特异性噬菌体抗体得到了高度富集,从6个96孔板的克隆中筛选到10株阳性克隆(阳性大于阴性3倍视为阳性克隆),将菌株转换成功的5株测序发现有4株不同的阳性克隆,对一株进行了原核系统的表达,SDS-PAGE确定了目的条带的存在,相对分子质量为Mr28000。结论为在天然噬菌体抗体库中制备玉米赤霉醇的抗体奠定了基础。
- 张晴晴张晓程罗根刘媛唐敏刘贤进
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体玉米赤霉醇
- 米尔比霉素肟化物ScFv噬菌体展示抗体库的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建具16元大环内酯共性结构小分子物质的特异性抗体库。方法免疫原MILO-BSA免疫小鼠后从脾细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增得到全套抗体重链可变区基因(VH)及轻链可变区基因(VL),SOE-PCR将VH、VL片段拼接扩增得到单链抗体可变区基因片段(ScFv)。将ScFv基因克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化感受态大肠杆菌,辅助噬菌体超感染得到上清液即为噬菌体抗体库。结果RT-PCR扩增出长360bp左右的抗体重链可变区基因(VH)及340bp左右的轻链可变区基因(VL),SOE-PCR扩增得到750bp左右的ScFv基因片段,成功构建了库容量为2.4×106,滴度为2.0×1012pfu/mL的噬菌体单链抗体库。结论构建的抗体库目的片段连接率较高,多样性较好,为下一步16元大环内酯类小分子物质高特异性抗体的筛选奠了基础。
- 张晓张晴晴温爽刘媛刘贤进
- 关键词：单链可变区抗体
- 动物饲料中玉米赤霉烯酮ELISA检测方法的建立被引量：20
- 2007年
- 为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量，建立酯联免疫检测法（ELISA）。结果显示：该方法检测回收率范围为67％～99％，其最低检出限为0．1μg／kg；以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析，并以HPLC法对同一批样品进行检测，两种方法回收率相关系数为0．9561。证明建立的ELISA检测方法适合动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测。
- 张晓张晴晴程罗根张心明刘媛刘贤进
- 关键词：玉米赤霉烯酮动物饲料
