周国理
- 作品数：18 被引量：54H指数：4
- 供职机构：中山医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家教育部“211”工程更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 白纹伊蚊乙酰胆碱酯酶基因片段克隆及鉴定被引量：4
- 2001年
- 目的 从白纹伊蚊中分离、克隆及鉴定乙酰胆碱酯酶 (ACh E)基因片段。 方法 根据已知的果蝇和斯氏按蚊 ACh E氨基酸序列保守区域设计简并引物 ,对白纹伊蚊 ACh E基因片段进行扩增 ,将凝胶回收的 PCR产物经与 T-载体质粒连接进行 T/ A克隆 ,用α互补筛选法筛选重组质粒克隆 ,用碱裂解法提取重组质粒 DNA并对重组质粒进行酶切鉴定和 PCR鉴定。 结果与结论 获得与设计相符的白纹伊蚊 ACh E基因片段
- 吴明玮张玲敏黄炯烈周国理吴瑜赵双星
- 关键词：白纹伊蚊乙酰胆碱酯酶抗药性克隆
- 昆虫细胞色素P450异源表达被引量：1
- 1999年
- 细胞色素P450酶在昆虫生长、发育及代谢外源化合物上起重要作甩，异源表达是研究昆虫P450酶的结构、功能及其表达调控的重要途径。昆虫细胞色素P450异源表达主要有三大体系：细菌、酵母、杆状病毒表达系统，本文就上述三太表达体系在昆虫细胞色素P450研究中的应用作一综述。
- 吴瑜周国理黄炯烈
- 关键词：昆虫细胞色素P450酶异源表达
- 蚊虫细胞色素P450基因系列研究被引量：1
- 2001年
- 报告中山医科大学寄生虫学教研室医学昆虫学室近 5年来有关蚊虫细胞色素P45 0基因 (CYP45 0 )系列研究结果 ,包括 :①通过简并引物PCR分别从致倦库蚊、白纹伊蚊及中华按蚊中获得 3个、2个、2个CYP4家族成员基因片段 ;通过简并引物PCR及RT PCR从白纹伊蚊中获得 16个CYP6家族成员基因片段 ;②利用cDNA末端快速扩增 (RACE)法获得了白纹伊蚊CYP6家族 3个新的全长cDNA序列及 7个超过其全长一半以上的cDNA序列。GenBankaccessionnumber分别为AF2 83836 AF2 83838(全长cDNA序列 )和AF2 84782 AF2 84783(非全长cDNA序列 ) ,被国际P45 0命名委员会正式命名为CYP 6N3v1 v3(全长cDNA序列 )和CYP 6N3v4、CYP 6N4v1 v6 ,并证实这些新基因同时存在于白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株及敏感株中 ;③运用基因步移方法从白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株中扩增出CYP 6N3上游 3 0 76bp调控序列 ;④对白纹伊蚊CYP 6N3、CYP 6N4非翻译区序列功能分析显示 :昆虫CYP45 0与其它真核mRNA翻译起始及终止机制相似 ,但具有多态性的特点 ;⑤对白纹伊蚊CYP 6N3上游启动子区序列特征与功能分析显示 :蚊虫中CYP45 0转录起始存在着复杂性 ;⑥证实蚊虫中 CYP6存在多样性 ,并分析讨论了此种多样性形成的可能机制 ;⑦分析讨论了蚊虫细胞色素P45 0
- 黄炯烈周国理吴瑜葛春喜王玲
- 关键词：按蚊属伊蚊属库蚊属蚊虫基因扩增
- 基因步移在分离蚊虫细胞色素P450启动子中的应用及意义被引量：2
- 2001年
- 【目的】快速扩增出白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP 6N3基因 (CYP 6N3)上游启动子区序列。【方法】根据本室已获得的白纹伊蚊CYP 6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的 5′ 末端核苷酸序列 ,设计 2个反向特异引物 (GSP1和GSP2 ) ,利用 4种限制性内切酶 DraⅠ、EcoRⅤ、Pvu Ⅱ和 StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA ,消化产物与适配子连接产生 4种消化的DNA库 (DL1、DL2、DL3及DL4) ,并分别以此为模板 ,进行基因步移。用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第 1步PCR扩增 ,然后再以第 1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第 2次PCR扩增。【结果】第 1步PCR结果显示 :在上述 4种消化文库中分别扩增出约 80 6、2 190、2 2 0 6和 3 0 76bp的特异条带 ;第 2步PCR结果与第 1次PCR相类似 ,但各泳道主带扩增效率明显升高。【结论】本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6N3上游启动子区核苷酸序列及其 4种限制性内切酶图谱。此外还对基因步移法在昆虫细胞色素P45 0多样性及其参与杀虫剂抗性分子机理研究中的意义进行了讨论。
- 周国理黄炯烈吴瑜王玲
- 关键词：伊蚊属细胞色素P450CYP蚊虫
- 白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N亚家族新成员5’-及3’-非翻译区序列功能分析被引量：2
- 2001年
- 目的 获得白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族新成员 5’ -及 3’ -非翻译区 (untranslatedregion ,UTR)核苷酸序列 ,并进行功能分析。方法 以本文作者已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P45 0CYP6基因cDNA片段 ,设计 1对特异性引物 ,以反向引物 ,进行 5’ -cDNA末端快速扩增 (rapidamplificationofcDNAends ,RACE) ,以正向引物进行 3’ -RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定 ,以获得 5’ -UTR和 3’ -UTR ,并运用PC/GENE软件分析其功能。结果 获得CYP6N亚家族中两个新成员 5’ -UTR及 3’ -UTR ;其结构特征包括 :两个新成员前导序列均为 46个核苷酸 ;起始密码子ATG两侧核苷酸 - 3位是A、+ 4位是T ;5’ -UTR区域无稳定性的发卡结构 ;终止密码子在CYP6N3为TAA、在CYP6N4为TAG ,紧挨其 3’端核苷酸分别为A和G ,翻译产物羧基端均为亮氨酸。结论 成功地获得了白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族两个新成员 5’ -及 3’ -非翻译区序列 ,进一步分析表明该两个新成员均能进行有效翻译 ,昆虫细胞色素P45 0基因翻译起始调控与翻译终止调控有部分类似于脊椎动物mRNA的翻译调控 ,但具有多态性的特点。
- 周国理黄炯烈吴瑜王玲
- 关键词：白纹伊蚊细胞色素P450非翻译区
- 昆虫CYP6家族多样性与进化被引量：16
- 2002年
- 了解昆虫CYP6家族的多样性与进化 ,对认识昆虫细胞色素P45 0参与抗药性发生、发展的分子生物学机制具有重要的意义。作者就昆虫CYP6家族多样性的各种表现形式及其形成原因、自然进化史。
- 周国理黄炯烈
- 关键词：昆虫多样性进化
- 白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因全长cDNA的快速扩增被引量：4
- 1999年
- 根据本室已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6家族成员cDNA序列片段，设计一对特异性引物．以上述蚊株总RNA为模板，分别进行5’-cDNA末端快速扩增(5’-RACE)和3’-cDNA末端快速扩增(3’-RACE)，所获得的产物经1．2％琼脂糖凝肢电薄，显示：5’-RACE产物达I.5kb，3’-RACE产物达500bp，扣陈两者重叠部分的已知cDNA片段(250bp)，则该CYP6家族成员生长cDNA长度达1．75kb，与其它昆虫中已知的CYP6家旅全长cDNA长度相似；然后再分别切胶回收，并以此(RACE产物)为模板，用上述双引物进行PCR鉴定，结果显示2个RACE产物均包含有已知的250bp cDNA片段，提示所得的RACE产物为该CYP6家族成员生长cDNA。
- 周国理黄炯烈詹希美姚其方王玲
- 关键词：白纹伊蚊CDNA杀虫剂
- 白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定被引量：10
- 2000年
- 目的】获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。【方法】根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该片断与pUC19质粒重组,并克隆至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。【结果】获得了1条长240bp的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在36.3%～46.8%之间,但CYP6D1除外,其同源性为29.1%;而与CYP4家族同源性较低,与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为333%、329%和299%;与哺乳动物CYP3A亚家族同源性亦较高;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。
- 周国理黄炯烈姚其方詹希美葛春喜王玲
- 关键词：伊蚊属杀虫剂抗药性基因扩增
- 鱼藤酮对致倦库蚊幼虫生物活性的实验研究被引量：3
- 1997年
- 钟作良周国理
- 关键词：幼虫鱼藤酮
- 白纹伊蚊基因组中CYP6家族新成员基因片段的克隆与分析被引量：3
- 2001年
- 目的 :获得白纹伊蚊 CYP6基因家族中新成员的基因片段。方法 :根据家蝇 CYP6 A1、 CYP6 D1以及致倦库蚊 CYP6 E1同源区氨基酸序列 ,设计 1对简并引物 ,分别以白纹伊蚊敏感品系和抗性品系基因组 DNA为模板进行 PCR,产物经 T- A克隆转化至 JM10 9大肠杆菌中 ,经筛选后测序 ,获得与设计的细胞色素 P4 50基因片段大小相符合的 5个基因片段 ,并将推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果 :在白纹伊蚊敏感品系中获得了 2个基因片段 ( A EDG- S1,AEDG- S2 ) ,核苷酸序列长度分别为 2 4 0 bp和 2 36 bp;在白纹伊蚊溴氰菊酯抗性品系中获得了 3个基因片段 ( A EDG- R2 ,A EDG- R3,AEDG- R4 ) ,核苷酸序列长度分别为 2 36 bp、 2 36 bp和 2 39bp。所得序列与昆虫 CYP6家族的同源性在 2 3.1%～ 53.8%之间 ,与 CYP3家族的同源性在 2 5.6 %～4 3.9%之间 ,而与 CYP4家族同源性较低 ,为 13.9%～ 2 4 .4 %。结论 :所得 5个序列为 CYP6家族中 5个新成员的基因片段。
- 吴瑜黄炯烈周国理柳晓欣钟作良
- 关键词：白纹伊蚊基因组同源性分析杀虫剂抗性
