周向阳
- 作品数：10 被引量：100H指数：6
- 供职机构：郴州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅科研基金湖南省科技厅重点项目湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胶质瘤中肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定被引量：22
- 2005年
- 目的在胶质瘤中分离,培养及鉴定脑肿瘤干细胞,观察脑肿瘤干细胞的生长特性,建立脑肿瘤干细胞分离、培养及鉴定的方法,为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法术中取胶质瘤细胞,接种于含生长因子的无血清培养基中培养,使其中的脑肿瘤干细胞增殖,并进行有限稀释实验确定肿瘤比例及增值能力;利用细胞免疫荧光及组织免疫组化法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养或组织切片中CD133和Nestin的表达。结果在胶质瘤中,只有大约1%的细胞能在无血清培养基中存活并悬浮生长,并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球,传代后脑肿瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力;体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物Nestin和CD133,在肿瘤组织切片中表达CD133阳性细胞。结论胶质瘤组织中存在极少数的脑肿瘤干细胞(大约为1%),并能在体外将其分离,培养;神经干细胞可能是脑肿瘤干细胞的起源细胞。
- 邓永文方加胜李茗初陈风华刘劲芳伍军周向阳方芳卢明陈成周仁辉曾飞跃
- 关键词：肿瘤干细胞CD133NESTIN胶质瘤
- 神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的分离培养与鉴定被引量：16
- 2007年
- 目的建立人神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的体外分离、培养体系，观察其分化现象，鉴定其特异性标志物，为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法将26例脑肿瘤手术中取出的脑肿瘤细胞，以2×10^5／ml的密度接种于含生长因子的无血清培养基培养，使其中的脑肿瘤干细胞增殖，并进行单克隆形成实验及溴脱氧尿苷掺入实验；然后将增殖形成的脑肿瘤干细胞球接种于无生长因子的含血清培养基诱导分化；利用免疫荧光和免疫组化法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养和组织切片中CD133和巢蛋白的表达。结果各类肿瘤标本中仅有少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮生长，并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球，传代后脑肿瘤干细胞保持很强的自我更新和增殖能力；在含血清培养基中脑肿瘤干细胞贴壁分化；体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物CD133和巢蛋白，在肿瘤组织切片中存在CD133阳性细胞，其阳性表达率为（21．0±6．2）％～（38．0±7．0）％。结论人神经上皮来源脑肿瘤组织中存在少量具有自我更新和增殖能力、表达CD133和巢蛋白的脑肿瘤干细胞，并能在体外将其分离、培养和诱导分化；脑肿瘤干细胞有可能成为脑肿瘤基础研究的新平台和临床治疗的重要靶细胞。
- 方加胜邓永文李茗初陈风华王延金卢明方芳伍军杨转移周向阳王飞陈诚
- 关键词：肿瘤干细胞
- 自体脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠脑内的作用被引量：12
- 2008年
- 目的：脂肪干细胞来源于成脂细胞,取材容易,已经成为干细胞研究一个新的方向。观察脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠的脑组织局部组织学变化以及神经行为学变化。方法：实验于2006-01/2007-08在中南大学湘雅医院神经病学实验室完成。①实验材料：SD大鼠,雌雄不限,体质量300g左右,由中南大学湘雅医学院动物学部提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：体外培养并传代SD大鼠脂肪干细胞,并用BrdU标记。制作大鼠的脑冷冻伤模型,实验组在冷冻伤动物脑内移植脂肪干细胞,对照组在冷冻伤动物脑内移植培养基,假手术组仅行颅骨开窗,每组15只。③实验评估：分别在移植细胞后1,3,5,7,14,30d对实验动物进行NSS神经行为学评分,并制作脑组织切片,行免疫荧光染色检测BrdU阳性细胞。采用Tunel染色检测凋亡细胞,脑组织RT-PCR检测血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子mRNA表达。结果：①与对照组相比,实验组大鼠在3-14dNSS神经行为学评分降低（P〈0.05）。②免疫荧光检测显示,Brdu标记的脂肪干细胞在大鼠脑组织内存活并且迁移。③Tunel法检测显示,3d后实验组凋亡细胞数目明显少于其他组。④RT-PCR检测显示,与其他两组比较,移植脂肪干细胞的大鼠脑组织中血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子表达更高。结论：脂肪干细胞可以在中枢神经系统中存活,并分化为神经元样细胞,它可以引起血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子的高表达从而减少细胞凋亡,加速神经功能修复过程并达到保护脑组织的目的。
- 周向阳邓永文方芳王飞陈若琨宋涛方加胜
- 关键词：脂肪干细胞脑冷冻伤神经行为学
- 神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的分离培养与鉴定
- 目的:建立人神经上皮来源脑肿瘤中肿瘤干细胞的体外分离、培养体系,观察其分化现象,鉴定其特异性标志物,为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。
方法:术中取脑肿瘤细胞,接种于含生长因子的无血清培养基培养,使其中的脑肿...
- 方加胜周向阳吴雷曾飞跃邓永文李茗初卢明方芳陈风华王延金伍军杨转移
- 关键词：神经上皮脑肿瘤肿瘤干细胞细胞增殖细胞培养
- 文献传递
- 脑肿瘤干细胞与神经上皮肿瘤病理级别的相关性被引量：18
- 2006年
- 目的:探讨脑肿瘤干细胞(brain tumor stem cells,BTSCs)的分离、培养及鉴定的方法,研究BTSCs比例与人脑神经上皮肿瘤病理级别之间的相关性。方法:将人神经上皮肿瘤细胞接种于含生长因子的无血清培养基中,使其中的脑肿瘤干细胞增殖和传代,利用细胞免疫荧光及免疫组化法检测干细胞的特异性标记物Nestin和CD133的表达;采用免疫组化(SABC法)研究46例脑肿瘤及5例正常脑组织CD133的表达,并与肿瘤病理分级进行相关性分析。结果:可以从人神经上皮肿瘤病例中分离培养出BTSCs;BTSCs可以在体外增殖并传代,并且表达干细胞的特异性标记物Nestin和CD133;CD133在正常的脑组织中未见表达,在各级神经上皮肿瘤中均有表达,各级别肿瘤中的阳性细胞比例差异有显著性(P<0.01),CD133阳性细胞比例与肿瘤的恶性程度呈正相关(P<0.01)。结论:各种病理类型神经上皮肿瘤组织中均存在干细胞特征的细胞,CD133的表达与肿瘤级别呈正相关。
- 邓永文方加胜李茗初陈风华周向阳伍军周仁辉方芳陈成卢明曾飞跃
- 关键词：神经上皮肿瘤脑肿瘤干细胞CD133NESTIN病理级别
- 星形胶质细胞诱导神经干细胞定向分化试验研究(英文)被引量：4
- 2005年
- 目的研究新生SD大鼠星形胶质细胞培养上清液对神经干细胞(neuralstemcells,NSCS)体外定向分化的影响,探讨神经干细胞分化条件。方法收集新生和成年SD大鼠星形胶质细胞培养的上清液,以1∶3比例同DMEM/F12培基混合,分别对胎鼠来源的神经干细胞进行诱导分化,倒置相差显微境下观察细胞的生长情况,并采用免疫荧光检测方法对分化细胞鉴定和计数。结果新生鼠星形胶质细胞培养上清液与DMEM/F12的混合培基诱导神经干细胞分化为神经元的比例明显提高。结论新生鼠星形神经胶质细胞能促使神经干细胞向神经元方向分化。
- 周向阳邓永文方芳伍军李茗初高峻玮柳浩然方加胜
- 关键词：神经干细胞NSCS诱导分化
- 悬浮法培养C6胶质瘤细胞系和该细胞系中脑肿瘤干细胞的分离被引量：31
- 2004年
- 目的研究应用无血清培养基悬浮法培养C6胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,观察其生长方式和分化特征。方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养大鼠C6胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化;应用有限稀释和单克隆形成实验确定该细胞系中肿瘤干细胞的比例。结果C6胶质瘤细胞系中有约1.18%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球;这种细胞球具有人脑肿瘤干细胞球的特征,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的C6胶质瘤细胞系无明显差别。结论C6大鼠胶质瘤细胞系中含有比例较低的、具有增殖和分化能力脑肿瘤干细胞(约1.18%),该细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。
- 李茗初陈风华邓永文伍军周仁辉卢明陈成周向阳方芳方加胜
- 关键词：脑肿瘤干细胞无血清培养基
- 大鼠脂肪干细胞的培养及向神经细胞的定向分化被引量：6
- 2010年
- 目的从大鼠脂肪组织中分离出脂肪干细胞(ADSC),并通过体外培养观察其在形态、生长方式以及贴壁率、生长曲线等方面的生物学特征,以及其向神经细胞方向分化的能力。方法取SD大鼠的腹股沟和腹膜后脂肪,分离体外培养ADSC,观察形态并进行传代。取第3代细胞测定其贴壁率、MTT比色法描绘生长曲线,免疫荧光法鉴定干细胞标志物CD44。通过两步诱导法诱导ADSC向神经细胞方向分化,免疫荧光法检测分化后细胞NSE、GFAP的表达情况。在分化过程中,用免疫组化检测Nestin的动态变化,验证ADSC分化与神经干细胞的关系。结果从大鼠的脂肪组织中可成功提取ADSC,在含血清培养中能够连续传代并稳定增殖,而且ADSCs强烈表达CD44。经诱导剂诱导后,大部分ADSC分化表达NSE,而未见GFAP的表达。分化过程中,Nestin表达水平经统计学分析后呈逐渐下降趋势。结论ADSC具有强大的扩增能力和定向分化为神经元的生物学特性,分化后在形态、表型同时体现出了显著变化,可以成为治疗神经系统损伤、退行性疾病的较为理想的成体干细胞。
- 周向阳邓永文方芳王飞宋涛方加胜
- 关键词：基质干细胞成体干细胞神经元分化
- 胚胎大鼠神经干细胞的体外培养与鉴定被引量：9
- 2005年
- 目的利用无血清培养和细胞克隆培养技术从孕鼠(14 d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养和诱导分化。 方法 采用免疫细胞荧光化学染色方法观察不同代数细胞克隆球中nestin、neuN、GFAP阳性细胞比例,鉴定培养的原代和传代的细 胞类型结果随着传代次数增加,克隆球中nestin阳性细胞的比例无明显变化(P>0．05),不同代数的神经干细胞克隆球诱导分化 后均有一定比例的neuN与GFAP阳性细胞。结论 证实从胚胎大鼠大脑皮层分离培养的细胞是神经干细胞,提示体外培养体系中 培养的神经干细胞可以长期传代并保持于细胞的特性。
- 高俊玮伍军柳浩然陈长青方芳周向阳方加胜
- 关键词：神经干细胞胚胎细胞培养细胞鉴定
