吴娟娟
- 作品数：17 被引量：98H指数：7
- 供职机构：上海第二医科大学附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人软骨蛋白聚糖Northern杂交探针的构建及其应用被引量：1
- 2003年
- 目的 构建人软骨蛋白聚糖 (aggrecan)探针 ,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecanmRNA表达水平的检测。 方法 取人软骨细胞 ,逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR )扩增ag grecan球间区域 (IGD)片段。将纯化的RT PCR产物构建入 pUCm T载体 ,酶切及测序鉴定。32 P标记aggrecan探针 ,Northern杂交法检测人软骨组织和培养软骨细胞 (各 3组 )以及人正常和瘢痕疙瘩成纤维细胞 (各 6组 )中aggrecanmRNA的表达。 结果 构建产物经鉴定 ,显示其包含了人ag grecanIGD的基因序列 ,与GeneBank已收录序列 (M 5 5 172 ) 10 0 %相同。Northern结果显示 ,该探针可用于aggrecanmRNA表达水平的定性和定量检测。对正常人软骨组织和体外培养人软骨细胞的aggrecan β actin的吸光度比值进行比较 ,发现其间 ( 0 .5 75 6± 0 .0 15 2 1.36 90± 0 .0 2 0 6 )差异具有显著性 (P <0 .0 1)。结论 Northern杂交法可以对整复外科研究中常见的软骨和瘢痕疙瘩成纤维细胞中aggrecanmRNA的表达水平进行检测 ,且具有较好的灵敏度和特异性。
- 陆峻泓李卿刘伟吴娟娟刘德莉曹谊林
- 关键词：基因表达整复外科
- 骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。
- 祝联刘伟陈兵刘德莉刘方军吴娟娟陆俊弘曹谊林
- 关键词：重组逆转录病毒载体骨髓基质干细胞
- 组织细胞中胶原蛋白的提取及ECL-Western blot分析被引量：7
- 2001年
- 目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得率高于传统方法的2.5倍,纯度达到了PAGE纯化的水平。结论该法具有简便、快速、灵敏和无放射性污染等优点,为组织工程胶原的深入研究提供了有价值的测试手段。
- 刘德莉徐蓉吴娟娟夏万尧商庆新
- 关键词：BLOT
- 组织工程技术修复软骨、肌腱缺损的实验研究
- 曹谊林商庆新刘伟崔磊刘彦春刘永涛刘德莉夏万尧吴娟娟
- 该项研究结合以往在免疫功能缺陷的裸鼠体内构建组织工程化软骨、肌腱的研究基础，应用组织工程技术，在具有完全免疫功能的自体哺乳动物体内构建组织工程化软骨与肌腱组织；应用组织工程化软骨与肌腱，在自体动物体内，模拟甚至超出临床组...
- 关键词：
- 关键词：修复术动物实验
- FasL基因转染Hela细胞体外诱导淋巴细胞凋亡的作用
- 2004年
- 目的 应用FasL基因转染具有上皮细胞特性的Hela细胞,探讨FasL基因的表达对诱导同种异体淋巴细胞凋亡的作用,为解决同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥问题提供一条研究途径。方法 PLNCX2-FasL质粒转化大肠杆菌,抽提纯化的PLNCX2-FasL质粒用限制性内切酶Xho Ⅰ,Not Ⅰ酶切,琼脂糖凝胶电泳得到755 bp大小的目的条带。紫外灯下切割回收目的条带并抽提纯化得到FasL基因,用Xho Ⅰ,Not Ⅰ酶切PCDNA3.1质粒载体并在相同位点插入FasL基因,T4酶连接,构建PCDNA3.1-FasL重组质粒。脂质体转染法将PCDNA3.1-FasL基因转染Hela细胞,G418筛选;经过免疫细胞化学法,RT-PCR鉴定后,进行单项淋巴细胞混合试验,检测FasL基因对诱导淋巴细胞凋亡的作用。结果 表达FasL基因的Hela细胞的淋巴细胞刺激指数较对照组转染空白质粒的Hela细胞下调,仅达到对照组刺激指数的17.01％。结论 FasL基因转染上皮细胞可诱导淋巴细胞凋亡,为研究避免同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥提供了一种可行的方法和设想。
- 陈炜刘伟刘德莉吴娟娟殷德民路丽明曹谊林
- 关键词：FASL基因基因转染HELA细胞体外诱导淋巴细胞
- 重组BMP7腺病毒的构建及转染骨髓基质干细胞后的表达被引量：5
- 2005年
- 根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得BMP7基因片段 ,PCR扩增得到特异的扩增片段 ,表明重组的Adeno-BMP7载体构建成功 ,其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。Adeno- Lac- Z的体外转染骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,染色表明转染率可达90 %以上 ;RT- PCR、免疫组化证明Adeno -BMP7转染BMSCs后BMP7在基因和蛋白水平上均有表达 ;转染Adeno- BMP7后的BMSCs细胞悬液裸鼠肌肉内注射后 ,x光片和组织学观察都表明BMP7转染可明显促进新骨的形成 ,与没转染Adeno -BMP7的BMSCs有显著差异。
- 祝联刘伟刘德莉吴娟娟王丹茹崔磊曹谊林
- 关键词：重组腺病毒骨髓基质干细胞骨形成蛋白7
- 软骨细胞老化过程中胞外基质表达水平的改变被引量：16
- 2003年
- 目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRNA表达水平上的改变。结果体外培养软骨细胞随着老化的进程,逐渐显现衰老和凋亡的特征。凋亡抑制基因bcl-2和控制细胞分裂的端粒酶的表达显著下降(P<0.01)。软骨细胞的特征性基质分子Ⅱ型胶原在第3代时表达水平有显著下降(P<0.01),降至原代细胞的5.47%±1.04%,在第4代几乎不再表达。而Ⅰ型胶原在第5代时,有显著上升(P<0.01);在第9代时又显著下降(P<0.01)。结论猪软骨细胞经体外培养,由第4代起逐渐发生去分化,丧失软骨细胞的表型。同时,细胞的增殖分裂能力亦逐步减退,细胞凋亡现象明显增加。
- 陆峻泓李卿刘伟陈瑾君刘德莉吴娟娟崔磊曹谊林
- 关键词：软骨细胞细胞老化胞外基质基因表达细胞分裂
- 自体组织工程化软骨组织在体内最佳形成时间的研究被引量：12
- 2001年
- 目的研究探讨自体组织工程化软骨在动物自体内最佳形成时间 ,为临床应用提供理论研究和参数。 方法取猪耳廓软骨细胞 ,与可注射性生物材料PluronicF12 7混合形成浓度为 5 0× 10 6 /ml细胞—生物材料复合物 ,接种于猪自体腹外侧壁真皮下 ,分别在接种后第 1、3、6、9、15周取材 ,从组织学、生化组成对再生软骨组织进行评价。 结果第六周形成的软骨组织完全成熟 ,与正常软骨组织有相似的组织学特性。而第 1、3周大部分为未成熟的软骨细胞。各不同时间再生软骨组织中氨基糖氨多糖 (GAG)占组织干重的平均百分含量在 7.0～ 9.0之间。第 6周形成软骨组织中Ⅱ型胶原含量比第 1、3周形成软骨组织中Ⅱ型胶原含量高 ,和正常耳软骨含量接近。 结论利用组织工程技术可在具有免疫功能自体动物内形成软骨组织 ,确定软骨组织形成的最佳时间为接种后第 6周。
- 夏万尧曹谊林商庆新刘德莉徐蓉吴娟娟
- 关键词：PLURONIC软骨细胞软骨组织
- 地塞米松与TGF β_1对骨髓基质细胞增殖、分化及代谢的影响被引量：7
- 2004年
- 目的 明确地塞米松与转化生长因子 β1对骨髓基质细胞增殖代谢及向软骨细胞分化的影响 ,为应用骨髓基质细胞构建组织工程化软骨提供技术参数。方法 抽取猪股骨骨髓 ,分离有核细胞 ,体外培养扩增并分别加入地塞米松 (40ng/ml)或地塞米松 (40ng/ml)与转化生长因子β1(10ng/ml)联合诱导。通过细胞计数及MTT法检测不同诱导因子对骨髓基质细胞增殖的影响 ,透射电镜观察不同诱导组细胞代谢功能的变化 ,免疫组化、原位杂交、RT -PCR及Northernblott等检测Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达量的差异。结果 加入地塞米松后细胞增殖能力受到轻度抑制 ,而同时加入地塞米松与转化生长因子 β1后 ,细胞生长明显受抑制。电镜下可见随诱导因子的增加 ,细胞变得肥大 ,细胞器丰富 ,功能活跃。Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达在联合诱导组明显增强 ,且随诱导时间的延长 ,Ⅱ型胶原mRNA表达量也显著增加 (P <0 .0 1)。结论 地塞米松与转化生长因子β1能有效地诱导骨髓基质细胞表达软骨细胞特征性蛋白 ,但对细胞的增殖及代谢也产生明显的影响 ,在骨髓基质细胞构建组织工程化软骨时 。
- 周广东王晓云刘德莉吴娟娟崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：地塞米松TGFΒ1细胞增殖软骨组织工程
- 病毒介导的基因转染在组织工程中的应用
- 2004年
- 目的 构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法 应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。结果 成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体,其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月。结论 通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础。
- 刘德莉刘方军吴娟娟胡晓洁祝联刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：基因转染逆转录病毒载体腺病毒载体种子细胞基因工程技术
