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产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达被引量：8: 2014年; 【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。; 唐自钟刘姗韩学易晋海军陈惠刘默洋单志吴琦; 关键词：毕赤酵母菌种鉴定

一种金龙胆草染色体制片的方法: 本发明提供一种金龙胆草染色体制片的方法,包括以下步骤：(1)于下午5点至7点之间采集金龙胆草幼苗根尖1cm，于3～5℃下用饱和对二氯苯浸泡幼苗根尖3～5h；(2)将浸泡好的根尖依次用90％乙醇、清水漂洗，再用卡诺氏液固定...; 陈惠郑天润孙文君詹俊义汪茂佳金露萍刘默洋马招堂金伟琼张彦君; 文献传递

定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因F-10酶活性被引量：4: 2014年; 利用高酶活F-10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变,对91位(K91E)和369位(K369R)氨基酸进行突变,构建突变质粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),转化大肠杆菌BL21,经筛选获得突变内切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R。经IPTG诱导后,分离纯化酶学性质分析。结果表明:蛋白质相对分子质量为53 000;突变前后最适pH值未发生变化,为pH 6.8;突变体K369R和K91E/K369R的最适温度为50℃,而突变体K91E最适温度发生了很大的变化,为40℃;酶的比活力分别为202、162.8、77.9 U/mg,分别是原始酶(66U/mg)的3.0倍,2.4倍和1.2倍;三个突变酶的热稳定性有较大提高,70℃处理1 h后,原始酶的活性急剧下降,剩余活力为12%,而K91E的剩余活力为36%,K369R剩余活力为30%,K91E/K369R剩余活力为41%。当经80℃处理1 h后,K91E残余活力仍有22%。本研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能及应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。; 唐自钟刘默洋李雨霏孙蓉刘姗陈惠韩学易; 关键词：内切葡聚糖酶定点突变酶学性质

易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性被引量：6: 2013年; 近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库。通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-10,活力比亲本酶提高4.2倍。序列分析表明：F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变：D212V和T307S。SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加。酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5~10.0范围内50℃保温30 min可保持80%的剩余酶活,在60~75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80%以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降。研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。; 唐自钟刘姗韩学易姚友旭刘默洋陈惠晋海军吴琦单志; 关键词：枯草芽胞杆菌内切葡聚糖酶易错PCR 酶学性质

一种金龙胆草组织培养方法: 本发明公开了一种金龙胆草组织培养方法，包括以下步骤：外植体的选择与灭菌，外植体的接种与培养，愈伤组织诱导出芽，增殖分化培养，根的诱导，炼苗与移栽。本发明优化了灭菌条件，降低了外植体的污染率和死亡率；调整了激素种类及配比并...; 陈惠王涛孙蓉郑天润刘默洋李成磊吴琦刘姗唐自钟何周凤; 文献传递

微波法和超声波法提取绿穗苋多糖响应面优化研究: 2019年; 绿穗苋是一种药食兼用作物,其中多糖成份具有很高的药食价值。本研究以绿穗苋地上部分为材料,以微波和超声波两种方法对绿穗苋多糖进行提取,并通过响应面分析法对提取进行优化,确定最佳工艺,通过水提醇沉的方法得到绿穗苋粗多糖。综合比较两种提取工艺,提取效果最佳工艺为微波提取法。其条件为:提取时间41.42 min,提取功率211.65 W,料液比1:33.338 (g/mL),实际得率为13.25%。该研究结果促进绿穗苋资源的有效利用,为绿穗苋多糖的提取工艺及产品的开发利用提供理论依据。; 金伟琼彭继燕王寅生唐宇佳唐自钟陈惠孙蓉郑天润刘默洋孙文君; 关键词：多糖响应面分析法超声波辅助法

一种金龙胆草离体细胞的培养方法: 本发明公开了一种金龙胆草离体细胞的培养方法，包括以下步骤：外植体的选择与灭菌；金龙胆草叶片单细胞分离；建立金龙胆草悬浮细胞系；稳定继代培养。本发明周期较组织培养更短，同时不需要栽培金龙胆草，不受地理因素限制。; 陈惠郑天润孙文君詹俊义刘燕汪茂佳刘默洋马招堂王涛唐自钟布同良吴琦李成磊; 文献传递

一种金龙胆草组织培养方法: 本发明公开了一种金龙胆草组织培养方法，包括以下步骤：外植体的选择与灭菌，外植体的接种与培养，愈伤组织诱导出芽，增殖分化培养，根的诱导，炼苗与移栽。本发明优化了灭菌条件，降低了外植体的污染率和死亡率；调整了激素种类及配比并...; 陈惠王涛孙蓉郑天润刘默洋李成磊吴琦刘姗唐自钟何周凤

共表达纤维素酶菌株发酵条件研究: 2015年; 目的:为了解决在发酵过程中酶活较低、成本高等问题,加快纤维素酶工业化生产。方法:采用PlackettBurman进行实验设计,对影响基因工程菌p ET30b-BGL产酶因素:接种量(A)、培养温度(B)、装液量(C),诱导时间(D)、初始p H(E)、IPTG诱导浓度(F)进行筛选,进行方差分析,结果表明,培养温度、初始p H和装液量对产酶有重要影响。进一步用Box-Behnken的响应面方法,对这3个因素进行优化,结果:当温度为35℃,初始p H7.5,装液量为25m L(容积为100m L),p ET30b-BGL产酶的酶活最高达到2080.5U/m L,较优化前的1196.8U/m L提高了将近一倍。结论:本研究为进一步研究纤维素酶提供了依据。; 刘默洋唐自钟晋海军孙蓉陈惠韩学易; 关键词：纤维素酶大肠杆菌发酵条件响应面分析法

火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化被引量：3: 2015年; 采用响应面法优化籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)根中镉元素的火焰原子吸收检测条件。在单因素试验的基础上,本研究利用Design Expert V 8.0.5b软件中的Box-Benhnken试验设计,研究灯电流、狭缝宽度、乙炔/空气流量比和燃烧器高度4个因素对籽粒苋根系中镉吸光度值的影响。用响应面分析法得出最优的测定条件为:灯电流5.67 m A;狭缝宽度0.62 nm;乙炔/空气流量比0.17(1/6);燃烧器高度5.14 mm,此时的理论预测吸光度值为0.209 4。通过验证实验证实:吸光度的理论预测值与真实测定值接近,样品检测中的相对标准偏差0.94%,加标回收率在96.3%~103.7%之间,说明该检测方法重现性好,数据准确可靠。本实验将为下一步准确检测籽粒苋不同部位(根,茎,叶和果实)镉含量和筛选优良的籽粒苋耐镉新品种提供技术资料。; 晋海军徐铭键陈惠张世熔布同良唐自钟孙蓉刘默洋; 关键词：籽粒苋响应面法火焰原子吸收

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刘默洋

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