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一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法: 本发明公开了一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法，包括以下实施步骤：1)细胞培养；2)细胞预处理；3)Giemsa染色；Giemsa染色的最适条件为小圆玻片用前处理烘干后，甲醇固定3min，过滤的中性染液(pH7.0～...; 吴淑燕储元元黄瑞

氯喹对鼠伤寒沙门菌诱导巨噬细胞自噬的影响被引量：2: 2013年; 目的:研究氯喹对鼠伤寒沙门菌诱导巨噬细胞(macrophage,MΦ)自噬的影响。方法:确定氯喹干预感染模型的工作浓度,应用该浓度下的氯喹分别干预携带毒力质粒的野生株χ3306和消除了毒力质粒的突变株χ3337与小鼠腹腔MΦJ774A.1的感染模型,探讨氯喹影响细菌与MΦJ774A.1自噬的机制。结果:20μmol/L氯喹单独作用6 h对细胞和细菌无显著影响;但干预感染模型后,却能阻断自噬。结论:鼠伤寒沙门菌毒力质粒参与了自噬早期过程。; 刘秋晨张驰郑亚杰韩玲储元元吴淑燕黄瑞; 关键词：鼠伤寒沙门菌巨噬细胞氯喹自噬

λRed重组系统用于沙门菌质粒毒力基因spvC敲除株的构建被引量：1: 2016年; [目的]利用λRed重组系统敲除沙门菌质粒毒力基因spvC。[方法]首先以质粒p KD4为模板,扩增得到两侧含spvC同源臂、中间为卡那霉素抗性基因的线性DNA片段。再将此线性片段电转入具重组功能的感受态沙门菌菌株,发生重组后,卡那霉素平板筛选阳性转化子。最后利用表达FLP重组酶的质粒p CP20,将FRT位点之间的卡那霉素抗性基因消除,用PCR鉴定。Western Blot检测野生沙门菌和spvC敲除株感染的He La细胞ERK磷酸化水平。[结果]沙门菌质粒毒力基因spvC敲除株构建成功,spvC敲除株感染的He La细胞内ERK磷酸化水平升高。[结论]成功构建沙门菌质粒毒力基因spvC敲除株,验证了spvC基因的功能。; 高嵩燕婧储元元李嫄渊吴淑燕; 关键词：沙门菌 SPVC 基因敲除质粒

一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法: 本发明公开了一种小鼠巨噬细胞的Giemsa染色方法，包括以下实施步骤：1)细胞培养；2)细胞预处理；3)Giemsa染色；Giemsa染色的最适条件为小圆玻片用前处理烘干后，甲醇固定3min，过滤的中性染液(pH7.0～...; 吴淑燕储元元黄瑞; 文献传递

自噬对鼠伤寒沙门菌所致的巨噬细胞凋亡的影响被引量：8: 2010年; 为探讨鼠伤寒沙门菌与巨噬细胞共作用时细胞自噬对凋亡的影响,用加入自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和未加RAPA的RPMI1640过夜培养小鼠腹腔巨噬细胞J774A.1,以携带一分子量为100kb毒力质粒的鼠伤寒沙门菌标准毒株SR-11为受试菌。首先测定RAPA对菌量及细胞活性的影响,然后建立细胞感染模型,在细菌与细胞共作用后动态观察24h,不同时间点检测细胞超微结构变化、自噬泡的形成、Beclin-1和Bcl-2的表达、细胞存活率和胞内活菌计数以及细胞凋亡情况。结果显示,RAPA单独作用于细菌或细胞时菌量及细胞活性均无变化;而对细胞感染模型而言,RAPA作用与否细胞内的细菌数及细胞存活率均有显著改变,RAPA可明显降低细胞内活菌数及其所致的巨噬细胞凋亡率(P<0.05);RAPA干预组在细菌与细胞共作用早期,部分细菌可被双层膜包裹形成自噬泡,细胞超微结构正常;Beclin-1的表达量增加,而Bcl-2的表达量降低;后期细胞破坏程度明显轻于未用RAPA组。以上结果提示,通过调控细胞自噬水平以减轻宿主细胞凋亡,可作为防治某些感染性疾病的新途径。; 吴淑燕李琼储元元李嫄渊黄瑞秦正红; 关键词：鼠伤寒沙门菌巨噬细胞自噬凋亡

鼠伤寒沙门菌X3306lux及其在活体成像中的应用: 鼠伤寒沙门菌X3306lux及其在活体成像中的应用，该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2012年3月13日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo.5895...; 黄瑞李嫄渊储元元叶颖; 文献传递

沙门菌质粒毒力基因spvB对巨噬细胞自噬的影响: <正>目的沙门菌(Salmonella)主要经水和食物传播,可引起胃肠炎、败血症、伤寒和食物中毒等多种疾病。致病沙门菌毒力质粒上均携带一段约8 Kb的高度保守序列,称为沙门菌质粒毒力基因(Salmonella plasm...; 储元元黄瑞燕婧李嫄渊吴淑燕; 文献传递

雷帕霉素对伤寒沙门菌质粒pR_(ST98)与巨噬细胞相互作用的影响被引量：3: 2010年; 研究自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)对伤寒沙门菌质粒pRST98与巨噬细胞相互作用的影响。用加入RAPA和未加药的RPMI1640培养巨噬细胞J774A.1后,分别与携带pRST98的伤寒沙门菌ST8,无质粒的伤寒沙门菌ST10和鼠伤寒沙门菌标准毒株SR-11共作用,观察细胞自噬和凋亡情况。结果显示,MDC染色后2h和4h细胞自噬泡的数量SR-11组ST8组>ST10组,RAPA干预后ST8组凋亡率下降,ST10组凋亡率升高(P<0.05);电镜下2～4h可见部分细菌被双层膜包裹,8h起可见凋亡改变。RAPA作用后,ST8组细胞破坏减轻,ST10组加重。提示伤寒沙门菌质粒pRST98与细胞自噬有关,在早期可抑制自噬,其诱导的巨噬细胞凋亡可被RAPA减轻,而RAPA能使ST10诱导的巨噬细胞凋亡增强。; 李琼吴淑燕储元元廖莉李嫄渊黄瑞; 关键词：雷帕霉素伤寒沙门菌巨噬细胞自噬

鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株的构建被引量：1: 2012年; 高度保守的spvB基因,其编码产物具有ADP核糖基转移酶活性,是导致受染后细胞发生凋亡的重要毒力因子。为进一步研究该基因致病机制,构建了鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株。根据GenBank鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,用PrimerPremier 5.0设计PCR特异性引物,获得spvB基因缺陷性核苷酸片段后连接至自杀质粒PGMB151。将构建的自杀载体导入含有spvB基因的鼠伤寒沙门菌标准株SR-11中进行同源重组,PCR筛选缺陷突变株。经PCR和DNA序列测定,成功获得了spvB基因缺陷的鼠伤寒沙门菌突变株。; 邱桥成叶颖储元元廖莉吴淑燕黄瑞; 关键词：鼠伤寒沙门菌同源重组基因敲除

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