何风霞
- 作品数：11 被引量：8H指数：2
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- Sublytic C5b-9诱导p300乙酰化修饰ATF3调控Thy-1肾炎大鼠GMC凋亡的机制研究
- 第一部分 Thy-1N肾组织和sublytic C5b-9刺激GMC上调的p300、Egr-1、ATF3和Gadd45基因表达时相及其与GMC凋亡的相关性目的:检查Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-...
- 何风霞
- 关键词：GMCEGR-1ATF3
- 文献传递
- 转录因子ATF3对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响及其可能的结合部位
- 周梦雅何风霞张婧刘玉虞天一卢燕来王璐璐赵聃邱文王迎伟
- 转录因子KLF6对大鼠趋化因子CCL5基因启动活性的影响及其可能的结合部位
- 刘玉虞天一张婧何风霞卢燕来周梦雅王璐璐赵聃邱文王迎伟
- 转录因子MZF1对大鼠RGC32基因启动活性的影响及可能的结合部位
- 2015年
- 目的 :构建大鼠补体应答基因32(response gene to complement,RGC32)启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察人胚肾细胞(HEK293)过表达髓锌指基因1(myeloid zinc finger gene1,MZF1)对大鼠RGC32基因启动活性的影响。同时,筛选其可能的MZF1结合位点。方法:将RGC32基因启动子全长(-686^-1 nt)插入到荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得RGC32基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-RGC32-FL)后,再将p GL3-RGC32-FL与本课题组前期构建的大鼠野生型MZF1表达质粒(p IRES2-EGFP-MZF1)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,以确定MZF1对RGC32基因的启动作用。另用生物信息学软件预测RGC32基因启动子上转录因子MZF1潜在的结合位点,并据此构建3个RGC32基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即p GL3-RGC32-1、p GL3-RGC32-2和p GL3-RGC32-3)。将上述RGC32基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒与MZF1过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,以筛选MZF1的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠RGC32基因启动子(全长和各截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功。将p GL3-RGC32-FL和p IRES2-EGFPMZF1共转染HEK293细胞发现,RGC32基因启动子活性显著增加。而将p GL3-RGC32-FL、p GL3-RGC32-1、p GL3-RGC32-2和p GL3-RGC32-3分别与p IRES2-EGFP-MZF1共转染HEK293细胞后显示,p GL3-RGC32-3的启动活性显著低于p GL3-RGC32-FL、p GL3-RGC32-1和p GL3-RGC32-2。提示MZF1可能结合在RGC32基因启动子的-286^-86 nt区域。结论 :成功构建了大鼠RGC32基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,证实过表达MZF1可促进RGC32基因的启动,并初步筛查出转录因子MZF1在RGC32基因启动子上可能的结合区域。
- 王璐璐何风霞赵聃虞天一张婧卢燕来邱文王迎伟
- 关键词：启动子活性
- Sublytic C5b-9刺激上调KLF4促进肾小球系膜细胞生成IL-23的作用被引量：2
- 2018年
- 目的:研究转录因子KLF4调控sublytic C5b-9刺激肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)诱导促炎因子白介素-23(IL-23)生成的作用。方法:构建KLF4的短发夹状小干扰RNA(shKLF4)及过表达质粒(pIRES2-KLF4)。将pIRES2-KLF4或shKLF4转染GMC后再行sublytic C5b-9刺激,用qPCR、Western blot和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL-23的影响。此外,构建IL-23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL-23启动子活性的影响。结果:(1)Sublytic C5b-9刺激GMC后能明显促进IL-23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b-9诱导GMC产生的IL-23明显减少,但过表达KLF4后IL-23的水平则显著增加。(2)Sublytic C5b-9刺激GMC能显著上调IL-23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b-9诱导的IL-23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL-23的启动子活性。结论:Sublytic C5b-9刺激诱导IL-23的生成可通过其刺激上调转录因子KLF4的表达而实现。
- 虞天一赵晨卉何风霞刘玉刘玉赵聃赵聃邱文张婧
- 关键词：C5B-9KLF4IL-23
- 造血干细胞移植并发肝静脉闭塞病的研究进展被引量：1
- 2010年
- 肝静脉闭塞症(HVOD)是造血干细胞移植(HSCT)后常见并发症,诊断主要靠临床症状和体征。发生受诸多危险因素的影响,如移植前患者铁负荷水平、预处理方案、围移植期某些药物应用可能是HVOD发生的高危因素。目前尚无特效药物,预防重于治疗。主要预防药物有小剂量肝素、前列腺素El、熊去氧胆酸、复方丹参注射液、还原型谷胱甘肽,最新研究的药物还有去纤苷、N一乙酰半胱氨酸、新鲜冰冻血浆等。另外要采取强有力的对症和支持治疗。
- 张珣磊何风霞杨凤莲宋雨晨
- 关键词：造血干细胞移植并发症肝静脉闭塞病
- RNA干扰沉默p300基因对亚溶解型C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡和ATF3乙酰化的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)凋亡和激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)乙酰化水平的影响。方法:用DNA重组技术针对p300基因不同位点设计3个shRNA序列,然后分别克隆到真核表达载体pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中,经电转染入GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。Western blot筛选干涉效果最佳的p300 shRNA,流式细胞术检测GMC凋亡率,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western blot联合检查ATF3乙酰化水平。结果:核酸测序表明p300 shRNA重组质粒构建成功。Western blot显示p300 shRNA-2具有最佳沉默效率。p300 shRNA处理GMC后,由sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡率显著下降,同时ATF3乙酰化水平也明显降低。结论:成功构建了大鼠p300 shRNA真核表达质粒,并初步证实了p300能够促进sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡,其机制可能与p300乙酰化修饰ATF3有关。
- 张婧何风霞邱文赵聃卢燕来王迎伟
- 关键词：RNA干扰P300乙酰化
- 亚溶解型C5b-9刺激GMC诱导KLF4与PCAF结合及结合部位的鉴定
- 2018年
- 目的:鉴定亚溶解型C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)诱导Kruppel样因子4(KLF4)与P300/CBP相关因子(PCAF)相互结合以及结合部位。方法:以亚溶解型C5b-9刺激GMC,应用免疫沉淀(IP)和免疫印迹(IB)法检测KLF4与PCAF相互结合情况。另构建KLF4、PCAF过表达和KLF4、PCAF不同结构域的质粒,将质粒转染GMC,应用IP和IB鉴定KLF4与PCAF的结合部位。结果与结论:亚溶解型C5b-9刺激GMC后能够诱导KLF4与PCAF相互结合,KLF4结合于PCAF转录结合结构域,而PCAF则结合在KLF4的转录激活结构域。
- 虞天一何风霞赵晨卉余明皓赵聃刘玉宫雅娟夏露邱文张婧王迎伟
- 关键词：大鼠肾小球系膜细胞
- 转录因子KLF6对大鼠趋化因子CCL5基因启动子活性的影响及其可能的结合部位
- 2015年
- 目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响。同时,筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列(-1744nt^-14nt)插入荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得CCL5基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-CCL5-FL)。然后,将p GL3-CCL5-FL与大鼠野生型KLF6表达质粒(p IRES2/KLF6)共转染GMC,测定其荧光素酶活性。另用生物信息学软件预测CCL5基因启动子上KLF6潜在的结合位点,并据此构建出4个CCL5基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即p GL3-CCL5-1~4)。将上述CCL5基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒分别与KLF6过表达质粒共转染GMC,再行荧光素酶活性的测定,初筛KLF6可能的结合部位。结果:菌液PCR以及核酸测序结果证实,上述所有启动子荧光素酶报告质粒均构建成功。p GL3-CCL5-FL和p IRES2/KLF6共转染GMC结果显示,CCL5基因启动子的活性显著增强。p GL3-CCL5-FL、p GL3-CCL5-1~4分别与p IRES2/KLF6共转染GMC后发现,p GL3-CCL5-4的启动活性显著降低。提示KLF6可能结合在CCL5基因启动子的-343nt^-191nt区域。结论:本实验成功构建了大鼠CCL5基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出KLF6在CCL5基因启动子上可能的结合部位在-343nt^-191nt区域。
- 刘玉虞天一张婧何风霞卢燕来周梦雅王璐璐赵聃邱文王迎伟
- 关键词：CCL5肾小球系膜细胞启动子活性
- 大鼠IL-6基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其与C/EBP β结合位点的鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的 :构建大鼠IL-6基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒并予鉴定,观察人胚肾细胞(HEK293)中过表达CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)对该质粒基因启动子活性的影响。同时,筛选C/EBPβ与IL-6基因启动子区的结合位点。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠IL-6基因启动子全长序列(-1 791～+30 nt),将IL-6基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。将IL-6基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-IL-6-1)和大鼠野生型C/EBPβ表达质粒(pIRES2-EGFP-C/EBPβ)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定C/EBPβ对IL-6基因的启动作用。另用生物信息学软件预测IL-6基因启动子上C/EBPβ潜在的结合位点,并构建IL-6基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-IL-6-2～5)。将上述IL-6基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和C/EBPβ过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选出C/EBPβ的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将pGL3-IL-6-1和pIRES2-EGFP-C/EBPβ共转染HEK293细胞发现,IL-6基因启动子活性显著增加。另将pGL3-IL-6-1、pGL3-IL-6-2～5和pIRES2-EGFP-C/EBPβ共转染HEK293细胞后发现,pGL3-IL-6-5的启动活性显著低于其他组。提示C/EBPβ可能结合在IL-6基因启动子的-618 bp～-126 bp区域。结论:成功构建了大鼠IL-6基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出了C/EBPβ在IL-6基因启动子上的结合部位。
- 庞蓉蓉李妍张婧单锴邱文何风霞赵聃王迎伟
- 关键词：IL-6CCAAT启动子活性
