成都中医药大学药学院药理学教研室
- 作品数：7 被引量：42H指数：4
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- 以慢病毒为载体的整合素β8 RNAi在新生鼠脑内干扰效率的研究被引量：3
- 2018年
- 目的制备稳定表达pSicoR-β8 shRNA的慢病毒载体系统,并评估其在新生鼠脑内RNA干扰(RNAi)效率。方法将慢病毒表达载体pSicoR-β8 shRNA、pSicoR-对照序列与慢病毒包装质粒系统pDM2G、g/pRRE和pRSV Rev分别进行扩增及质粒酶切鉴定,然后共转染293T包装细胞株,通过293T细胞的包装和分泌以收集携带目的干扰片段的慢病毒颗粒。利用PEG-it病毒浓缩试剂进行浓缩,50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。将浓缩后的慢病毒颗粒通过侧脑室注射对新生SD乳鼠中枢神经系统野生表达的整合素β8进行干扰,荧光显微镜下观察慢病毒侧脑室注射后脑组织中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,结合RT-PCR和Western blot方法检测β8 mRNA和蛋白在干预后表达水平的变化,以评估RNAi效率及选择最佳干预时间。结果质粒扩增及酶切结果显示各质粒片段大小分别与质粒图谱大小一致,浓缩后测得的病毒滴度为LV-对照序列:1.0×10~8 PFU/mL,LV-β8 shRNA:5.0×10~8 PFU/mL。慢病毒侧脑室注射后1d,侧脑室周围即可观察到携带GFP的慢病毒整合到宿主细胞基因组并发出绿色荧光,注射后2d、3d和5d可在脑组织切片中观察到较强的绿色荧光。β8 mRNA表达水平在RNAi后1~3d出现降低(P<0.05),第3天达到最大抑制作用,其β8 mRNA抑制率约为56%。β8蛋白表达变化趋势与β8 mRNA表达变化趋势基本一致,RNAi后第3天达到最大抑制作用,其β8蛋白抑制率约为51%。结论成功获得滴度达到体内实验要求的含有β8 shRNA的慢病毒颗粒,并具有较好的体内干扰活性,为进一步研究整合素β8在新生鼠脑组织中的生理功能奠定了基础。
- 唐彬秩屈艺赵凤艳童煜王德健
- 关键词：慢病毒载体RNAI
- 人参皂苷Rg1抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡的研究被引量：12
- 2010年
- 目的人参皂苷Rg1可增强神经元对缺氧缺血应激的耐受能力,在缺氧缺血性脑损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)中发挥一定的抗凋亡作用。观察人参皂苷Rg1对新生鼠HIBD后神经元凋亡及神经功能恢复的影响,并探讨其可能机制。方法 10天龄SPF级SD大鼠54只,体重16～22g,随机分为假手术对照组(假手术组,n=6)、HIBD模型组(模型组,n=24)和人参皂苷Rg1组(Rg1组,n=24)。模型组及Rg1组大鼠采用结扎右侧颈总动脉并低氧通气制备HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉,不结扎,不进行低氧通气。Rg1组于术后即刻腹腔内注射0.1mL含人参皂苷Rg1(40mg/kg)的生理盐水,此后每隔24h按相同剂量注射人参皂苷Rg1;模型组和假手术组相同时间点腹腔内注射0.1mL生理盐水。术后观察大鼠一般情况,于术后4、8、24、72h采用Longa评分法行神经行为学评价后,处死大鼠取右侧脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和活化的半胱天冬氨酸酶3(cleaved caspase3,CC3)蛋白表达;TUNEL法检测原位神经元凋亡情况。结果术后大鼠均存活至实验完成。与假手术组比较,模型组和Rg1组大鼠均出现不同程度的神经行为学异常;两组Longa评分与假手术组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);术后72h时Rg1组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示,各组各时间点均有HIF-1α、CC3蛋白表达;模型组及Rg1组各时间点HIF-1α蛋白表达均较假手术组有明显增加(P<0.05),Rg1组均较同一时间点模型组有明显上调(P<0.05)。模型组各时间点CC3蛋白表达均较假手术组明显增加(P<0.05),Rg1组仅术后4h与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Rg1组各时间点均较模型组明显下调(P<0.05)。免疫组织化学染色可见HIF-1α蛋白、CC3蛋白定位主要集中在胞核及胞浆,各组各时间点蛋白表达强度与Western blot观察�
- 王德健黄源芳李巧云徐世军刘小康
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡人参皂苷RG1缺氧诱导因子1Α
- 胞外信号相关蛋白激酶1/2信号通路与人参皂苷Rg1抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡被引量：4
- 2016年
- 目的探讨人参皂苷Rg 1在新生鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemia brain damage,HIBD）中的抗凋亡作用,分析可能的信号通路机制。方法 10日龄SPF级SD大鼠48只,体质量17~21 g,随机分为4组（n=12）,假手术组、模型组（HI组）、模型＋人参皂甙Rg 1组（HI＋Rg 1组）、模型＋人参皂甙Rg 1＋U 0126干预组（HI＋Rg 1＋U 0126组）。HI组、HI＋Rg 1组及HI＋Rg 1＋U 0126组大鼠采用结扎单侧颈总动脉并低氧通气方法制备HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉。HI＋Rg 1＋U 0126组于造模前1 h右侧脑室注射5μL含U 0126（25μg/kg）的PBS,其余3组同法注射5μL PBS。HI＋Rg 1组及HI＋Rg 1＋U 0126组于术后即刻腹腔内注射0.1 m L含Rg 1（40 mg/kg）的生理盐水;HI组和假手术组注射0.1 m L生理盐水。术后4、24 h处死各组大鼠,取右侧半球皮层和海马脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测胞外信号相关蛋白激酶1/2（extracellular signalrelated protein kinase 1/2,Erk 1/2）及磷酸化Erk 1/2（phospho-Erk 1/2,p-Erk 1/2）、缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）和活化的半胱天冬氨酸酶3（cleaved Caspase-3,CC 3）蛋白表达;TUNEL法检测原位神经元凋亡情况。结果 Western blot检测示,各时间点各组均有Erk 1/2、p-Erk 1/2、HIF-1α、CC 3蛋白表达;术后4、24 h,HI组HIF-1α、CC 3蛋白表达均较假手术组明显增加（P〈0.05）;术后4 h,HI组p-Erk 1/2蛋白表达较假手术组明显增加（P〈0.05）;术后4、24 h,HI＋Rg 1组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI组明显上调（P〈0.05）,CC 3蛋白表达则明显下调（P〈0.05）;术后4、24 h,HI＋Rg 1＋U 0126组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI＋Rg 1组明显下调（P〈0.05）,CC 3蛋白表达则明显上调（P〈0.05）。各时间点各组间Erk 1/2蛋白表达比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。免疫组织化学染色可见HIF-1α蛋白、CC 3蛋白定位主要集中在细胞核及细胞质
- 唐彬秩王德健吴青李茂军阳倩陈昌辉
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡人参皂苷RG1
- 中医药防治低蛋白饲料致豚鼠胆色素结石实验研究现状
- 本文对国内近年来有关中医药防治低蛋白饲料致豚鼠胆色素结石的实验研究情况进行整理。结果表明四种低蛋白饲料配方的平均致石率高达81.35％,但徐长生等人研制的配方最为常用;应用中药和针灸治疗后,平均致石率降至16.45％,说...
- 孟宪丽王张
- 关键词：胆色素结石低蛋白饲料中医治疗
- 文献传递
- 乌头类生物碱对bcl-2基因表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的研究乌头类生物碱对大鼠视网膜神经细胞细胞增殖周期和bcl-2基因表达的影响,探讨乌头类中药神经毒性的作用机制。方法体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5min后,流式细胞仪检测。结果与阴性对照组比较,乌头碱作用组G2/M期细胞比例从2.3%增加到19.5%,细胞增殖活动被抑制;而bcl-2基因表达量显著增加,表达荧光均值从0.78增加到1.45。新乌头碱和次乌头碱作用组结果与乌头碱类似。结论在本试验条件下,bcl-2基因可能在乌头类生物碱的神经毒性作用机制中具有重要意义。
- 饶朝龙彭成
- 关键词：乌头类生物碱视网膜神经细胞BCL-2基因神经毒性
- 氨酚麻美干混悬剂联合蓝芩口服液治疗儿童上呼吸道感染的疗效观察被引量：12
- 2016年
- 目的探讨氨酚麻美干混悬剂联合蓝芩口服液治疗儿童上呼吸道感染的临床效果。方法选择2015年12月至2016年4月四川省人民医院儿科急诊诊断为上呼吸道感染的患儿共240例,按照随机数字表法分成治疗组和对照组各120例,两组均给予蓝芩口服液口服治疗,治疗组在此基础上给予氨酚麻美干混悬剂口服,对照组给予氨酚伪麻那敏分散片口服。观察两组患儿治疗后的临床疗效,以及药物不良反应的发生情况。结果治疗组临床有效率高于对照组(P<0.05),发热与咳嗽症状改善情况优于对照组(P<0.05);两组药物不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论氨酚麻美干混悬剂联合蓝芩口服液口服治疗能有效减轻患儿上呼吸道感染症状,且不良反应发生率低。
- 唐彬秩王德健郑植
- 关键词：蓝芩口服液儿童上呼吸道感染
- 人参皂苷Rg1对新生鼠HIBD后血管再生的影响被引量：6
- 2011年
- 目的观察人参皂苷Rg1对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后血管再生的影响,并探讨其可能机制。方法 10日龄SPF级SD大鼠54只,随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=24)和Rg1组(n=24)。模型组及Rg1组采用单侧结扎颈总动脉并低氧通气制备新生鼠HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉,不结扎,不进行低氧通气。Rg1组于术后即刻腹腔内注射0.1 mL含Rg1(40 mg/kg)的生理盐水,此后每隔24 h按相同剂量注射Rg1,共注射3 d;模型组和假手术组相同时间点腹腔内注射0.1 mL生理盐水。术后观察动物一般情况,于术后4、8、24、72 h处死大鼠取右侧脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达;Ⅷ因子相关抗原(vwf)免疫组织化学染色标记微血管。结果术后新生大鼠均存活至实验完成。与假手术组比较,模型组和Rg1组均出现不同程度的神经行为学异常。模型组4、8、247、2 h各时间点HIF-1α蛋白表达均较假手术组增加(P<0.05),Rg1组各时间点HIF-1α蛋白表达水平均较同一时间点模型组上调(P<0.05)。模型组4、8、24 h VEGF蛋白表达较假手术组增加(P<0.05),Rg1组247、2 h VEGF蛋白表达较同一时间点模型组增加(P<0.05)。模型组24 h和72 h脑缺血区vwf阳性细胞较假手术组增多(P<0.05),Rg1组72 h脑缺血区vwf阳性细胞数目较同一时间点模型组增加(P<0.05)。结论 Rg1通过增强并稳定HIF-1α/VEGF信号轴,促进新生鼠HIBD后血管再生。
- 王德健李巧云徐世军曾南
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤人参皂苷RG1缺氧诱导因子1Α血管再生
