汕头大学医学院生物分析实验室
- 作品数：12 被引量：14H指数：2
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- 微量酸消化-原子荧光检测血汞方法被引量：1
- 2014年
- 目的:用微量酸消化-双道原子荧光光度计测定法建立人外周血汞的优化检测方法。方法:200皿全血在80℃烤箱中低温烘烤至焦化,置80℃水浴装置中加入200μLHNO_3消解2 h,用5%HNO_3(含0.05%K_2Cr_2O_7)稀释至10 mL;AFS-8130双道原子荧光光度计样品基体匹配工作曲线检测血汞浓度。结果:样品基体匹配工作曲线回归方程为Y=1342.022X-44.83,相关系数R^2=0.998 5,加标回收率92.3%~99.0%,方法标准偏差2.77,相对标准偏差3.3%,检出限低至6.2×10^(-3)μg/L。结论:微量酸消化血样,能做到用简单消解仪器,消耗极少的优质酸消解样本。该法具有操作简便、分析时间短、检出限低、方法重现性好等优点,非常适用于同时处理大批量样品。
- 庄冰容张源章宇霍霞徐锡金
- 关键词：原子荧光汞外周血
- 胰蛋白酶和胶原酶灌注法分离提取小鼠原代肝细胞的比较
- 2022年
- 目的:胰蛋白酶和胶原酶灌注法分离提取小鼠原代肝细胞的比较。方法:改良Seglen两步灌注法,选用胰蛋白酶和胶原酶D分别对同批生长的10~16周C57BL/6J雄性小鼠进行在体灌注分离肝实质细胞,比较分离肝细胞的存活率、纯度、形态、活性、获取数量等。结果:两种方法分离得到的小鼠原代肝细胞的存活率和纯度均达到90%以上,且在形态学上无明显差异,不同培养时间的细胞活性基本一致。胶原酶灌注法所得到的细胞数量多于胰蛋白酶灌注法。结论:胰蛋白酶和胶原酶灌注法均适用于分离提取小鼠原代肝细胞,可根据实验条件选择不同的灌注方法。
- 任文洁林哲绚
- 关键词：小鼠原代肝细胞胰蛋白酶胶原酶
- 同步荧光光谱法研究肿瘤芳香族氨基酸残基含量的变化被引量：4
- 2017年
- 用同步荧光光谱法评估原发性肝细胞癌患者血浆、肝癌荷瘤小鼠以及培养细胞(HepG2和HL-7702)中酪氨酸(Tyr)和色氨酸(Trp)残基水平变化。固定发射波长λem和激发波长λex之间的波长差Δλ分别为20和60nm,激发和发射单色器同时进行扫描,确定350nm为Trp的同步特征发射峰位置,318nm为Tyr的同步特征发射峰位置。结果表明,肝癌患者及荷瘤小鼠血浆蛋白质所含Tyr和Trp残基的荧光强度明显增加。相反,肝癌细胞或荷瘤小鼠肿瘤组织中Tyr和Trp残基荧光强度却随生长时间增长而减少。进一步实验表明,具有抗癌活性的苦参碱处理癌细胞后,细胞Tyr和Trp残基的荧光强度升高。这些结果表明,Tyr和Trp残基的变化可能参与了肿瘤的发生发展。
- 张源林哲绚韩溟
- 关键词：同步荧光光谱色氨酸残基肝细胞癌
- 液液萃取-GFAAS法测定生物样品中的Cu(Ⅰ)被引量：1
- 2020年
- 建立液液萃取-石墨炉原子吸收法测定生物样品中Cu(Ⅰ)方法。200μL血清及细胞匀浆、细胞膜液等样本与200μL 30%三氯乙酸混匀后,离心去蛋白,取上清液400与1500μLpH为12.5的甘氨酸-NaOH-缓冲溶液混至pH约为9,加入含1000μL 0.05%2,2′-联喹啉的正戊醇溶液,旋涡振荡1 min,静置分层后取有机层500μL置于2 mL特氟隆消化管,于95℃烘箱烘6 h挥发有机溶剂,冷却至室温后分别加入200μL硝酸和双氧水,80℃水浴消化,室温加入600μL 1%硝酸后用石墨炉原子吸收法,测定的结果为Cu(Ⅰ)含量。另取100μL血清(200μL细胞匀浆、细胞膜液)置于2 mL特氟隆消化管,于80℃烘箱烘5 h至样品干燥,冷却至室温分别加入200μL硝酸和双氧水,80℃水浴消化后,室温用1%硝酸稀释成1000μL,用石墨炉原子吸收法测定总铜含量。方法检测限:0.04μg·L-1,相对偏差<5%。回收率:95%~102%。用此法检测了一些无机样品和生物样品。测定的结果表明,宫颈癌患者血清Cu(Ⅰ)比正常人要高,总铜含量差别不大。一些无机样品如自来水、农夫山泉水、尿液含Cu(Ⅱ)离子不含Cu(Ⅰ)离子,而生物样品如肝细胞及肝细胞膜含有Cu(Ⅰ)离子不含Cu(Ⅱ)离子。本法可以在混有Cu(Ⅱ)离子的情况下测定Cu(Ⅰ)离子,且10倍Cu(Ⅱ)离子浓度存在下测定痕量Cu(Ⅰ)离子无干扰。
- 张源吴鹏李慧罗红军罗文鸿林哲绚
- 关键词：甘氨酸
- 高效液相色谱法分析米屈肼给药后大鼠心肌游离氨基酸的变化被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨米屈肼对大鼠心肌氨基酸代谢的影响及其意义。方法:36只SD雄性大鼠随机分为对照组、米屈肼低剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1),M100)和高剂量(300 mg·kg^(-1)·d^(-1),M300)组,每组12只。连续灌胃15 d后,开胸取心脏;Waters AccQ·Tag法测定3组心肌游离氨基酸浓度。结果:与对照组比,M100组中组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、苏氨酸(Thr)、丙氨酸水平下降(P<0.05);M300组中谷氨酸(Glu)、His、Arg水平下降,天冬氨酸(Asp)、甘氨酸、Thr、脯氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)水平上升(P<0.05)。随着米屈肼给药剂量提高,Asp、Met、Lys水平逐渐上升,Glu水平逐渐下降。结论:米屈肼能影响大鼠心肌氨基酸代谢。
- 李维罗红军陈旭阳李慧罗文鸿
- 关键词：氨基酸代谢
- 重组氨基脲敏感型胺氧化酶在293T细胞中的定位及酶活性测定
- 2017年
- 目的:构建氨基脲敏感型胺氧化酶(SSAO)基因真核表达载体,并在293T细胞中进行瞬时表达,确定SSAO体外表达效率、亚细胞定位及酶活性。方法:以pcDNA3-SSAO质粒为模板,PCR扩增获取SSAO编码区全序列,分别构建SSAO与绿色荧光蛋白(GFP)的融合表达质粒pEGFP-N3-SSAO和共表达质粒pIRES2-EGFP-SSAO,并通过酶切和测序验证。再分别将pcDNA3-SSAO、pEGFP-N3-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和pcFLAG-SSAO重组质粒瞬时转染293T细胞,在荧光显微镜下观察目的蛋白的分布及表达情况。采用高效液相色谱法(HPLC)测定转染上述4种重组质粒及相应空质粒细胞的SSAO活性。结果:测序结果表明重组真核表达质粒构建正确。在瞬时转染pEGFP-N3-SSAO和pIRES2-EGFP-SSAO重组质粒的293T细胞中,转染后3~36 h各组均可观察到绿色荧光,且转染36 h为最佳观察时间点。转染pIRES2-EGFP-SSAO质粒的绿色荧光分布于细胞质中;转染pEGFP-N3-SSAO和pcFLAG-SSAO质粒的绿色荧光及红色荧光均分布于细胞膜上。酶活性检测结果显示转染pcFLAG-SSAO、pIRES2-EGFP-SSAO和pcDNA3-SSAO载体质粒的293T细胞中的SSAO活性分别为111.50±7.07、117.22±9.54、215.74±21.44 nmoL/(mg·h),较各自的空白质粒对照组均显著升高(P均<0.01),但转染pEGFP-N3-SSAO质粒的细胞SSAO活性极低,仅为2.09±0.29 nmoL/(mg·h)。结论:293T细胞中,体外重组表达的SSAO蛋白主要分布于细胞膜上,以pcDNA3为载体外源表达的天然状态SSAO活性最高。
- 钱九战李蕊罗红军林哲绚施金婉罗文鸿
- 关键词：亚细胞定位酶活性测定
- 亲水色谱-超高效液相色谱荧光检测法快速检测牛奶中三聚氰胺
- 2016年
- 目的：建立亲水色谱-超高效液相色谱荧光检测法对牛奶中三聚氰胺的快速测定。方法：牛奶样品经乙腈超声提取三聚氰胺,用Agilent ZORBAX RRHD HILIC Plus色谱柱,以乙腈-甲酸水溶液为流动相,通过荧光检测器进行测定。结果：三聚氰胺在（0.0510.00）μg/m L范围内呈良好线性关系（r=0.999 9）;回收率100.9%103.7%。检出限和定量限分别为0.060和0.171μg/m L。结论：该法简便、准确且特异性高,可用于牛奶中三聚氰胺的快速检测。
- 罗红军李慧罗文鸿
- 关键词：三聚氰胺超高效液相色谱法
- 甘露醇诱导人肾小管上皮细胞的氧化应激作用被引量：2
- 2016年
- 目的观察甘露醇是否通过引起人肾小管上皮细胞（HK-2）的氧化应激反应而损伤细胞。方法MTT法检测不同浓度甘露醇（50,100,150,200,250,300,350和400 mmol·L^-1）处理HK-2细胞4,10,24,48和72 h对细胞活性的影响;甘露醇100和250 mmol·L^-1作用细胞4~72 h,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧（ROS）水平,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒分别检测MDA含量、SOD活性和GSH含量。结果甘露醇250 mmol·L^-1作用72 h,细胞增殖活性约为溶剂对照组的50%（P〈0.05）;孵育4 h,细胞ROS的荧光强度（68.7±3.6）显著高于溶剂对照组（50.3±4.6）（P〈0.05）;孵育4~72 h,细胞形态出现细胞肿胀、空泡化,细胞脱落;细胞内MDA含量明显增高（P〈0.05）,SOD活性和GSH含量明显下降（P〈0.05）。孵育4 h时,溶剂对照组和甘露醇250 mmol·L^-1处理组细胞内MDA含量分别为（3.1±1.6）和（20.9±5.7）μmol·g-1蛋白,SOD活性分别为（71.8±6.5）和（47.3±8.8）k U·g^-1蛋白,GSH含量分别为（60.8±2.3）和（13.6±3.3）μmol·g^-1蛋白。甘露醇100 mmol·L^-1处理组GSH含量显著降低（P〈0.05）,其余各项指标变化不明显。结论高浓度（250 mmol·L^-1）甘露醇可能通过氧化应激途径损伤肾小管上皮细胞而产生细胞毒性作用。
- 张琼丽罗文鸿林哲绚
- 关键词：甘露醇肾小管上皮细胞氧化应激丙二醛
- 大鼠股动脉插管——一种有创血压监测及短时连续采血方法被引量：2
- 2016年
- 目的:建立一种简便有效的大鼠BP监测及连续采血法。方法:无菌条件下分离SD大鼠股动脉,结扎远心端、夹闭近心端,剪口、插管、连接三通阀,监测BP及采集动脉血。结果:该法监测大鼠股动脉BP为(130.9±10.8)mm Hg;同时可进行6 h内间隔0.5 h连续采血(500~600μL/次)。结论:该法能为大鼠实验研究奠定基础。
- 文科林哲绚林文昊韩溟
- 关键词：采血
- 二价金属离子转运体1在肝细胞癌中的表达及意义被引量：1
- 2015年
- 目的检测肝细胞癌组织中二价金属离子转运体1(DMT1)的表达,探讨其临床及病理学意义。方法收集1999年7月-2011年7月汕头大学医学院第二附属医院肝细胞癌患者手术切除标本存档蜡块中的肝癌标本57例,设为肝癌组织组,另有7例尸检的正常肝组织和8例肝内胆管结石肝组织蜡块作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测15例正常肝组织及57例肝细胞癌组织中DMT1的表达。不同分化程度肝细胞癌组织DMT1的比较采用单因素方差分析,率的比较采用χ2检验;DMT1的表达与肿瘤大小的相关性采用Pearson相关性分析。结果正常对照组的肝组织DMT1呈阴性或弱阳性,阳性率20%(3/5),肝癌组织组阳性率78.9%(45/57),其中强阳性率15.8%(9/57);两组阳性率差异有统计学意义(P<0.01);不同癌组织分化程度的患者DMT1的表达差异有统计学意义(F=4.011,P<0.05),DMT1的阳性表达率在不同临床分期及肿瘤是否有血管浸润的患者中的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。相关分析显示DMT1的表达强度与肿瘤的大小无相关性(r=-0.047,P>0.05)。结论肝细胞癌组织DMT1阳性表达率显著升高且与肿瘤分化程度密切相关,有助于肝癌的临床病理分级。
- 吴学钦程红球林哲绚韩溟
- 关键词：临床对照试验
