郑州大学基础医学院食管癌研究室
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“211”工程河南省自然科学基金更多>>
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- 雄性无毛小鼠睾丸、附睾的发育及组织形态学观察
- 2007年
- 目的：研究雄性无毛小鼠生殖器官的发育及组织形态学改变。方法：取8—10周龄雄性无毛小鼠5只，昆明种雄性小鼠10只。用天平称取动物体质量后，颈椎脱臼处死，摘取睾丸、附睾、前列腺，并用分析天平称重，根据每只小鼠体质量计算脏器指数。所有组织切片后行HE染色，在光学显微镜下观察睾丸曲细精管、生精细胞及间质细胞的形态和数量及附睾组织结构。结果：雄性无毛小鼠睾丸、附睾及前列腺脏器指数与昆明种小鼠相比差异无统计学意义。但睾丸组织学存在曲细精管细胞层次减少，粗线期初级精母细胞减少，胞核结构模糊。附睾及前列腺组织未见明显异常。结论：雄性无毛小鼠睾丸组织学改变可能是导致繁种、育种困难的原因之一。
- 王纯耀阴志刚阎爱华薛敬礼宋国英杜春燕史崇敏
- 关键词：无毛小鼠雄性睾丸附睾发育
- 融合基因pEGFP-C3-B7．2-hTERT诱导小鼠免疫应答及抑制肝癌移植瘤被引量：1
- 2008年
- 目的:构建融合DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT,观察其诱导小鼠免疫应答的能力和抗小鼠肝癌H22细胞移植成瘤的作用。方法:通过RT-PCR扩增B7.2和hTERTcDNA,以pEGFP-C3为载体构建pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒,肌肉注射接种C57BL/6小鼠,间隔7d,共3次,以注射接种pEGFP-C3-B7.2、pEGFP-C3-hTERT、pEGFP-C3和PBS为对照。检测免疫小鼠脾淋巴细胞CTL杀伤活性、脾细胞培养上清IL-2和IFN-γ水平、外周血淋巴细胞亚群变化及血清中抗hTERT抗体水平。将融合基因pEGFP-C3-B7.2-hTERT免疫已负荷肝癌细胞H22/hTERT或H22/B7.2的小鼠,观察小鼠成瘤时间、生存时间。结果:琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列测定证实,成功构建了融合基因质粒pEGFP-C3-B7.2-hTERT。融合基因免疫小鼠的脾淋巴细胞对B7.2-hTERT阳性靶细胞的杀伤活性明显高于各对照组(P<0.01),每只pEGFP-C3-B7.2-hTERT免疫小鼠都产生了抗体,免疫鼠外周血CD4+、CD8+T细胞和脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平较各对照组明显升高(均P<0.01)。pEGFP-C3-B7.2-hTERT融合基因质粒免疫已负荷肝癌细胞H22/hTERT或H22/B7.2的小鼠后,小鼠60d未成瘤,其他各组22d时所有小鼠均已成瘤,60d时均死亡。结论:DNA疫苗pEGFP-C3-B7.2-hTERT在体内能诱导出明显的B7.2-hTERT特异性的抗肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤。
- 艾敏杨胜利姜爱华
- 关键词：DNA疫苗B7.2HTERT免疫应答移植瘤
- 食管鳞状细胞癌中MGMT和p16基因启动子甲基化关系分析
- 目的：探讨食管鳞状细胞癌中O6-甲基鸟噤呤-DNA甲基转移醇(MGMT)基因和p16基因启动子的甲基化情况,并对二者甲基化的频率进行统计学分析,从而了解这两个基因启动子甲基化与食管癌发生的关系。
方法：采用甲基...
- 杨霞闫爱华丁兰平宫亚欧杨胜利
- 关键词：基因甲基化
- 文献传递
- pcDNA3.1-hTERT真核表达载体的构建
- 现已证实端粒酶的激活是细胞摆脱限分裂次数的方式之一.端粒酶是种特殊的核糖核蛋白酶.笔者主要介绍了PCDNA3.1-hTERT真核表达载体的构建.
- 刘红梅杨胜利
- 关键词：端粒酶食管癌
- 文献传递
- 食管鳞状细胞癌中MGMT和p16基因启动子甲基化关系分析
- 背景与目的:探讨食管鳞状细胞癌中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA methyltransferase,MGMT)基因和p16基因启动子的甲基化情况,并对二者甲基化的频率进行统计...
- 杨霞闫爱华丁兰平宫亚欧杨胜利
- 关键词：高甲基化MGMT基因P16基因
- 文献传递
- 冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤作用的影响被引量：8
- 2005年
- 目的 探讨冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤的抑制作用。方法 用小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验和大白鼠肝原代细胞非程序DNA合成(unscheduledDNAsynthesis ,UDS)实验检测冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤的影响。结果 冬凌草甲素可明显地抑制环磷酰胺(CP)诱导的小鼠骨髓PCE微核发生率(P <0 .0 1)及盐酸氧芥(NH2 ·HCl)诱导的小鼠肝原代细胞UDS(P<0 .0 1)。结论 冬凌草甲素具有明显的抑制哺乳动物细胞DNA损伤的作用。
- 闫剑婷杨胜利宫亚欧丁兰平宋爱云
- 关键词：冬凌草甲素微核试验非程序DNA合成
- hTERT片段真核表达质粒的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建人端粒酶逆转录酶 (hTERT)片段的真核表达质粒 ,方法 :从肿瘤组织中提取总RNA ,采用RT PCR法扩增hTERT基因并克隆入PGEM TEasy载体中 ,然后再亚克隆于pcDNA3.1真核表达载体 ,用PCR扩增及限制性酶切法筛选重组真核表达质粒 ,并以DNA测序鉴定。结果 :PCR扩增及限制性酶切法证实重组真核表达质粒的构建成功。测序表明 ,hTERT基因片段与GenBank公布的相应基因同源性比较 ,核苷酸序列的同源性为 98.73% ,氨基酸序列的同源性为 99.6 8%。结论 :成功构建了hTERT真核表达质粒 。
- 刘红梅赵国强杨胜利
- 关键词：HTERT克隆
- 人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建被引量：3
- 2005年
- 中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。
- 张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利
- 关键词：人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒
- 真核荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1的构建与表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建表达B7.2和MAGE-1的绿色荧光共表达载体pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1,并在真核细胞中表达。方法:根据GenBank中的序列,对B7.2、MAGE-1各设计一对两端带有特定限制性酶切位点的引物,分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA,进行RT-PCR后,将两扩增产物分别克隆在pGEM-T载体,经测序证实碱基序列无误后,双酶切pGEM-T载体,回收目的片段,将两目的片段亚克隆至真核绿色荧光蛋白共表达载体(pEGFP-C3)上,并转染真核细胞,观察其在真核细胞中表达。结果及结论:pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1真核表达载体经酶切及基因序列分析验证,PCR扩增片段与选择的目的片段序列相符,pEGFP-C3-B7.2-MAGE-1真核表达载体构建成功。该表达载体转染EC9706细胞后,用免疫荧光显微镜观察和RT-PCR分析,该重组载体能够在真核细胞中广泛表达。
- 艾敏张巧赵国强杨胜利
- 关键词：B7.2MAGE-1真核表达载体肿瘤免疫
- 食管鳞状细胞癌中MGMT和p16基因启动子甲基化关系分析
- 背景与目的:探讨食管鳞状细胞癌中O-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O-methylguanine DNA methyltransferase,MGMT)基因和p16基因启动子的甲基化情况,并对二者甲基化的频率进行统计学分...
- 杨霞闫爱华丁兰平宫亚欧杨胜利
- 关键词：高甲基化MGMT基因P16基因
- 文献传递
