温州医科大学基础医学院虫媒病毒研究所
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
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- 登革病毒血清型2 E蛋白Ⅲ区单克隆抗体的制备及其诊断特异性研究被引量：1
- 2019年
- 本研究旨在制备抗登革病毒(dengue virus,DENV)血清型2 (DENV2)E蛋白Ⅲ区(envelope protein domainⅢ,EDⅢ)单克隆抗体(简称单抗)并研究其诊断特异性。合成编码DENV2-EDⅢ的基因并将其克隆入原核表达质粒pET21a;将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21;用重组表达的EDⅢ免疫小鼠;将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合;将可产生识别抗EDⅢ单抗的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔;采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化单抗;采用间接ELISA和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)评估所制备的单抗识别DENV血清型1～4 (DENV1～4)的能力。本研究成功表达了DENV2-EDⅢ,并制备出3株杂交瘤细胞,杂交瘤细胞所分泌的小鼠源性单抗既可识别DENV2,又可交叉识别DENV1、DENV3和DENV4。
- 段志良周湧超杨澜陈新宇陈新宇金胜威
- 关键词：登革病毒单克隆抗体
- 小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备被引量：6
- 2018年
- 目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。
- 周湧超徐志刚杨澜陈新宇段志良文金生
- 登革病毒高度保守的HLA-A*1101限制性T细胞表位鉴定和体内免疫反应研究
- 2016年
- 目的:鉴定登革病毒2型(DENY-2)HLA-A~*1101限制性T细胞表位并探讨其诱导的T细胞反应的特征。方法:基于DENV-2的氨基酸序列,采用T细胞表位预测软件预测HLA-A~*1101限制性候选T细胞表位;基于HLA-A~*1101转基因小鼠,采用ELISPOT实验、ELISA实验和CD8^+T细胞(CTL)杀伤实验研究候选表位的HLAA~*1101限制性和所诱导的T细胞反应的特征。结果:在合成的14条候选表位中,9条肽(NS1_(161-170)、NS1_(263-272)、NS3_(6-15)、NS4b_(44-53)、NS3_(33-42)、C_(58-67)、E_(30-38)、NS3_(576-584)和NS4a_(72-80))免疫HLA-A~*1101转基因小鼠可诱导产生肽特异性分泌IFN-γ的T细胞。除了分泌IFN-γ,C_(58-67)和NS3_(576-584)特异性T细胞也可分泌TNF-α,而E_(30-38)特异性T细胞更可同时分泌TNF-α和IL-6。DENV-2感染的HLA-A~*1101转基因小鼠体内也可检测到针对NS4b_(44-53)、NS3_(33-42)、C_(58-67)、E_(30-38)、NS3_(576-584)和NS4a_(72-80)的分泌IFN-γ的T细胞。采用上述6条肤的混合物免疫HLA-A~*1101转基因小鼠所诱导的效应细胞可显著杀伤DENV-2感染的小鼠脾单核细胞。结论:本研究鉴定出了9条全新的DENV-2特异性HLA-A~*1101限制性T细胞表位。
- 陈新宇段志良江明华贾庆军徐娟娟陈柏坤文金生
- 关键词：登革病毒转基因小鼠
- 结核分枝杆菌esxN特异性细胞表位的鉴定及其在肺结核诊断中的应用被引量：1
- 2017年
- 目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A~*0201分子结合力;采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)研究候选表位在HLA-A~*0201转基因小鼠中的免疫原性;基于鉴定的CTL表位、ESAT-6和培养滤液蛋白10(CFP-10),采用ELISPOT检测肺结核患者体内表位及蛋白特异性CTL的水平。结果 6条候选CTL表位中,esxN_(15-24)(AMIRAQAASL)和esxN_(48-57)(VACQEFITQL)与HLA-A~*0201分子有较高结合力;候选表位免疫HLA-A~*0201转基因小鼠,esxN_(48-57)诱导产生可分泌γ干扰素(IFN-γ)的T细胞反应;在HLA-A~*0201阳性肺结核患者中检测到esxN_(15-24)、esxN_(48-57)、ESAT-6、CFP-10特异性分泌IFN-γ的T细胞;esxN_(15-24)、esxN_(48-57)诊断肺结核的敏感率与ESAT-6、CFP-10相近。结论从结核分枝杆菌esxN中鉴定出两条HLA-A~*0201限制性CTL表位,其有望用于辅助肺结核病的诊断。
- 徐志刚李德周陈新宇段志良毛嘉媛文金生
- 关键词：结核分枝杆菌表位
