遵义医学院基础医学院形态学实验室 作品数:12 被引量:25 H指数:3 相关作者: 黄跃 刘光海 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 博士科研启动基金 贵州省科学技术基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 更多>>
利用转录组测序筛选低切应力作用下人脐静脉内皮细胞的差异表达基因 2019年 目的:通过转录组测序分析获得不同切应力作用下人脐静脉内皮细胞的基因的表达谱,为进一步探索切应力影响内皮细胞形态和功能的机制提供依据。方法:以人脐静脉内皮细胞为材料,通过Streamer系统建立6通道可调控切应力的流体动力学细胞模型,以层流切应力(15 dynes/cm^2)为对照,以低切应力(0.1 dynes/cm^2)为实验组,分别加载细胞18 h。提取总RNA逆转录合成cDNA,建立文库,以二代测序平台Illumina HiSeq中进行扩增和测序。结果:序列比对结果显示,有19986个基因比对上,新转录本分析显示各组新转录本数约占总转录本数的50%。基因表达差异分析显示,较对照组,低切应力组表达上调基因983个,表达下调基因701个。GO分析显示,有18499个基因得到了归类注释,绝大多数基因富集到生物学过程。KEGG分析显示,富集Top20的信号通路与细胞周期、DNA复制和细胞分裂、细胞应激和凋亡等生物学过程相关。结论:低切应力作用不仅仅激活内皮细胞中细胞的增殖相关基因,同时也涉及到DNA损伤修复和凋亡相关基因。 生欣 生燕 谢夏丹 王俊华 郜双林关键词:人脐静脉内皮细胞 切应力 转录组测序 血流切应力对血管内皮细胞PCP信号通路与初级纤毛发生的影响 2019年 目的研究不同血流切应力(fluid shear stress, FSS)对内皮细胞平面细胞极性通路(planar cell polarity, PCP)的调节作用,进一步探讨FSS、PCP信号通路以及纤毛发生之间的关系。方法建立可调控FSS的流体动力学细胞培养模型,qPCR以及免疫荧光检测不同FSS作用下PCP信号通路核心蛋白Dvl2及纤毛装配蛋白IFT88的mRNA表达与细胞定位以及两者的共定位,Western bolt (WB)检测不同FSS作用18 h时Dvl2蛋白表达。结果 qPCR结果显示,与1.5 Pa比较,Dvl2 mRNA的表达量在0.1 Pa FSS作用6 h和18 h时均升高(P<0.05)、12 h时显著升高(P<0.01);IFT88 mRNA表达量在0.1 Pa FSS作用18 h时显著升高(P<0.01)。WB结果显示,与0 h比较,Dvl2蛋白的表达在0.1 Pa FSS作用18 h时升高(P<0.05),在1.5 Pa FSS作用18 h时显著降低(P<0.05);与1.5 Pa FSS比较,Dvl2蛋白的表达在0.1 Pa FSS作用18 h时升高(P<0.05)。免疫荧光结果显示,Dvl2蛋白阳性表达随FSS作用时间的增加增多,且逐渐聚集于细胞核周边一点;IFT88蛋白阳性表达在0.1 Pa FSS作用下逐渐由细胞核向细胞质转移并聚集为一点,1.5 Pa FSS作用下逐渐减少且解聚;蛋白Dvl2、IFT88在0.1 Pa FSS作用下均定位于细胞的同一位置,在1.5 Pa FSS作用18 h内均定位于细胞的同一位置,18 h后由于蛋白IFT88发生解聚,未观察到共定位。结论层流FSS作用能够抑制PCP信号通路的转导并阻碍纤毛发生,低FSS促进其转导,且PCP信号通路可能通过Dvl2调控FSS诱导的初级纤毛发生。 刘月华 生燕 欧刚卫 生欣关键词:血管内皮细胞 抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定 被引量:3 2017年 目的在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究。方法构建pFastBac^(TM) HTA质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10细胞,通过蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。构建Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞,提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白,纯化,SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定。结果重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞,细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象;培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测,在22 KD出现了1条特异性条带;通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达;通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性。结论与E.coli BL21(DE3)原核表达系统相比,家蝇胚胎细胞系灵敏度较好,但仍有较大提升空间。 王灵军 王鑫 贺莉芳 马元芬 生燕 刘晖关键词:抗菌肽 真核表达 CaMK Ⅱ介导20-HETE诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及肥大作用研究 被引量:5 2017年 目的探究CaMK Ⅱ在20-HETE诱导的乳鼠心肌细胞凋亡和肥大中的作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(Con组),20-HETE组,20-HETE+KN-93组以及KN-93组;采用CCK-8法检测细胞活性、TUNEL法检测凋亡、HE染色后检测心肌细胞表面积、BAC法检测细胞内蛋白浓度;RT-q PCR检测心肌肥大特征性基因心钠肽(ANP)的表达;Western Blot检测CaMK Ⅱ及其磷酸化蛋白表达。结果与对照组相比,20-HETE组心肌细胞活性显著下降,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);同时,20-HETE明显促进心肌细胞表面积增加、蛋白浓度升高以及肥大基因ANP的表达上调(P<0.05);使用CaMK Ⅱ抑制剂KN-93共孵育后,阻断了20-HETE诱导的细胞凋亡和肥大的作用(P<0.05);20-HETE促进心肌细胞CaMK Ⅱ蛋白以及磷酸化CaMK Ⅱ蛋白表达(P<0.05),具有激活CaMK Ⅱ作用。结论 20-HETE激活CaMK Ⅱ信号通路诱导心肌细胞肥大和凋亡。 贺滟 贾蝉忆 韩勇 郭立荣 陈远寿关键词:CAMK 细胞肥大 细胞凋亡 微信公众平台在人体形态学实验教学中的建立及应用探讨 被引量:2 2017年 人体形态学是一门综合性学科,由多门学科共同组成,显微镜观察组织结构、细胞特征、寄生虫形态是人体形态学的基本组成部分,学会看图说话尤为重要。微信作为现代网络的产物,以其特有多样的功能运用到各个领域中。建立微信公众平台并应用于人体形态学实验教学中,可使学生在时间和空间上达到自主学习、移动学习的效果。 刘光海 何倩倩关键词:人体形态学 实验教学 联合抗原修复法在免疫组化法检测家兔颈动脉粥样硬化陈旧性蜡块组织MMP-9及TIMP-1表达中的应用 被引量:1 2017年 目的探讨联合抗原修复法对免疫组织化学(免疫组化)法检测家兔颈动脉粥样硬化陈旧性蜡块组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法对家兔颈动脉粥样硬化陈旧性蜡块组织连续切片198张,分别采用胰蛋白酶、加热、联合抗原修复法,检测MMP-9、TIMP-1的免疫组化染色效果。结果 0.1%胰蛋白酶(pH 7.6)37℃孵育20 min为胰蛋白酶抗原修复法的最佳条件,0.01 mol/L乙二胺四乙酸缓冲液(pH 8.0)进行微波抗原修复为加热抗原修复法的最佳条件,胰蛋白酶与微波联合进行的抗原修复法明显优于单用胰蛋白酶抗原修复法、加热抗原修复法,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合抗原修复法更适于免疫组化法检测家兔颈动脉粥样硬化陈旧性蜡块中MMP-9、TIMP-1的表达。 江齐昌 徐刚 黄跃 陆红玲关键词:基质金属蛋白酶-9 组织金属蛋白酶抑制物-1 20-HETE对大鼠心肌缺血再灌注损伤中NADPH氧化酶活性及ROS生成的影响 被引量:4 2016年 目的探讨20-HETE加重大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的作用及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(Con组),缺血再灌注模型组(IR组),IR+20-HETE合成酶抑制剂(HET0016)组,Con+HET0016组,每组12只,通过Langendorff灌流系统建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型,全心缺血35 min再灌注40 min,Power Lab/8P系统实时监测心肌力学指标;灌流结束后取心肌组织TTC法检测心肌梗死面积;DHE荧光探针法检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量;Western blot检测NADPH氧化酶亚基p47^(phox)磷酸化水平;细胞色素C的还原法检测NADPH氧化酶活性。结果离体心脏缺血再灌注后,加入20-HETE合成酶抑制剂HET0016(1μmol/L)后明显改善了IR导致的心肌力学指标下降,LVDP由IR组的(48.6±3.4)%升至(71.7±3.5)%,+d P/dt_(max)由(51.9±2.1)%升至(69±3.2)%,-d P/dt_(max)由(47.1±3.6)%升至(64.1±3.8)%(P<0.05);IR+HET0016组心肌梗死面积比IR组减小了37.2%(P<0.05)。DHE荧光探针检测发现IR+HET0016处理组心肌组织中ROS含量比IR组降低了45.8%(P<0.05);最后通过对NADPH氧化酶活性检测发现,HET0016显著减少了IR引起的NADPH氧化酶p47^(phox)亚基磷酸化水平及全酶活性的升高(P<0.05)。结论 20-HETE通过激活NADPH氧化酶诱导过量ROS的生成,加重心肌缺血再灌注损伤。 韩勇 郭立荣 贺滟 刘万力 王梅 赵红艳 何娅关键词:心肌缺血再灌注损伤 活性氧簇 NADPH氧化酶 冰冻切片的制作 被引量:2 2017年 临床手术及科学研究过程中的冰冻切片对临床病理诊断或科学研究观察均至关重要。要制作优良的冰冻切片,需要对取材、温度控制、切片、固定及染色等许多环节进行把控。该文结合工作实践对冰冻切片的制作进行经验总结。 黄跃 张睿 吴德江 陆红玲关键词:冰冻切片 病理学 标本 手机APP在学生自学《人体寄生虫学》图片中的实践与思考 被引量:4 2018年 人体寄生虫学是医学生在医学基础课中学习的一门必修课程,是连接临床和基础的形态学课程,而实验教学在人体寄生虫教学中具有不可忽视的地位和作用,学生学习的好坏直接影响着后续课程的学习。为了方便学生自主而有效的学习,利用网络APP(application)平台制作了一款基于《人体寄生虫学》图片自主学习的软件。该手机软件基于Android和IOS系统开发,学生端可以实现移动学习,教师端可以实时进行教学管理。并在我校2014级本科生中进行了试用,用后激发了学生学习的积极性,提高了教师的工作效率,也为实验教学的信息化注入了新的活力。对这种新型的自主学习模式进行了探索,文章对该教学模式进行了总结。 生燕 李秀毛 江楠 张睿关键词:人体寄生虫学 网络数码显微互动系统在形态学实验教学中的应用及维护 被引量:1 2017年 阐述麦克奥迪显微互动系统在形态学实验教学中的使用优势、使用中的注意事项、常见故障处理方法以及系统维护,通过广大师生熟练运用系统,了解各模块功能和常见故障处理方法,进而在加强任课教师以及学生使用系统的技术培训,提高各技术管理员的管理技能,完善实验教学设备的管理改进制度等方面有很大促进作用,从而提升教师教学质量,提高学生学习成绩。 刘光海 何志全关键词:形态学实验教学 故障处理