东北农业大学生物工程系
- 作品数：172 被引量：1,439H指数：21
- 相关作者：秦鹏春周琪王守德宣世纬郑稚莺更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国科学院发育生物学研究所遗传与发育生物学研究所中山大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 哺乳动物的卵母细胞成熟机理被引量：4
- 1995年
- 卵母细胞的成熟(包括细胞核成熟和细胞质成熟)是完成正常受精及早期胚胎发育所必须的,是指卵母细胞获得完成减数分裂、为受精及胚胎发育做好准备的能力。在哺乳动物,这一过程非常复杂,有许多问题至今仍没搞清。 一、卵母细胞减数分裂能力的恢复 在大多数哺乳动物,出生前后卵原细胞停止有丝分裂,进入减数分裂,并停滞于第一次减数分裂前期的双线期。性成熟以后,每一繁殖周期都有一批卵母细胞在迄今未知的某些信号的作用下,进入生长期,卵母细胞体积快速增加。接近生长期结束时,获得减数分裂的能力,但仍停滞于双线期。在许多动物,该期细胞核明显。
- 孙青原秦鹏春
- 关键词：卵母细胞成熟哺乳动物卵丘细胞颗粒细胞CAMP蛋白质合成
- 9203菌株RNA对蕃茄花叶病(TM)的防治作用被引量：1
- 1997年
- 对真菌9203菌株进行液体培养，从其菌丝体中分别用稀碱法、浓盐法、酚水法及酚试剂法提取RNA．用核酸粗提液及KNA提取液，在蕃茄植株上进行病毒免疫抑制试验，证明9203菌株RNA对番茄花叶病（TM）的防治有一定的效果．
- 张丕奇郑稚莺
- 关键词：真菌番茄番茄花叶病RNA
- 猪不同直径卵泡中卵母细胞体外培养的成熟潜力被引量：9
- 2000年
- 比较研究了猪卵巢表面直径 0 .5～ 1 mm、1～ 2 mm、2～ 6mm、>6mm卵泡中卵母细胞所处的生发泡阶段。结果表明 ,0 .5～ 1 mm卵泡中卵母细胞主要处于 GV- 期和 GV- 期 2个阶段 ,比例分别为 67.2 %和2 0 .6%;而 1～ 2 mm和 2～ 6mm直径卵泡中 ,卵母细胞大部分则处于 GV- 期 ,比例分别为 91 .9%和89.6%;>6mm直径卵泡中 ,卵母细胞逐渐发生老化 ,GV- 期比例仅为 53 .2 %,一部分处于 GV- 期和GVBD期。体外培养试验表明 ,1～ 2 mm卵泡中卵母细胞的体外成熟率比较低 ,其中一部分卵母细胞不能发生 GVBD( 2 5.1 %) ,另有一部分卵母细胞 ( 3 9.8%)达到第 1次减数分裂中期后 ,不能继续向前发育。培养 0～ 2 0 h时 ,添加 1 mmol/ L dbc AMP,能够显著抑制 1～ 2 mm和 2～ 6mm直径卵泡中卵母细胞发生 GVBD。培养 2 0 h后 ,去除 dbc AMP,显著增加了培养到 4 4h阶段的 M- 期比率。 dbc AMP主要是降低了培养 4 4h阶段 GV期阻滞的比率 ,而对 M- 期阻滞的比例没有影响。因此 ,dbc
- 韩毅冰施维民秦鹏春
- 关键词：卵泡卵母细胞减数分裂体外成熟DBCAMP
- 应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌被引量：2
- 1998年
- 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙门氏菌，使用了２对引物ＨＩ和ｐｈｏＰ。ＨＩ引物对各长２０ＮＴ，根据鞭毛Ｉ相抗原基因自行设计，扩增序列长２６９ｂｐ；ｐｈｏＰ引物对各长２１ＮＴ，根据ｐｈｏＰ／ｐｈｏＱ基因设计，扩增片段长２９９ｂｐ。ＰＣＲ采用５０μＬ反应体系。ｄＮＴＰＳ各１００μｍｏｌ／Ｌ，引物各１μｍｏｌ／Ｌ，Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，酶２Ｕ。三温段ＰＣＲ循环条件为：９７℃预变性７ｍｉｎ；９４℃变性６０ｓ、５５℃复性４０ｓ、７２℃延伸６０ｓ，３５个循环；７２℃延伸７ｍｉｎ。检测８株标准阳性菌，结果都出现了ＨＩ引物和ｐｈｏＰ引物特异带，标准阴性菌３株只出现ｐｈｏＰ特异带，说明ＨＩ引物特异性很强。
- 李景鹏李成梅虞塞明何成强丁乃峥吴丹
- 关键词：聚合酶链反应沙门氏菌PCR兽医诊断学
- 家兔胚胎细胞核移植与连续移植
- 1999年
- 将发育不同时期的兔胚和移核胚的卵裂球细胞核与去核的成熟卵母细胞共同组成移核胚，通过中间受体培养和移植实验检验胚胎的发育能力。结果表明，（１）兔囊胚之前各个时期的胚胎细胞核均可使移核胚发育到囊胚；（２）胚胎极化前后的卵裂球参与组成的移核胚发育到囊胚的比例无显著差异。但极化后 ６４细胞胚的卵裂球与去核卵母细胞的融合率低于极化前的 ８细胞胚胎卵裂球；（３）兔 １６细胞胚与去核的卵母细胞组成的移核胚可以发育到期，产仔率为 ３．１６％ ；（４）兔移核胚卵裂球用于连续核移植，其后 ２ 代均可发育成囊胚，其中第 １ 代移核胚与第 ２ 代移核胚发育率相似，但显著高于第 ３ 代移核胚；（５）兔移核胚和各代连续移核胚卵裂球与去核卵的融合率无显著差异。
- 周琪李子义谭景和文兴豪孙兴参刘忠华贺桂馨李德雪
- 关键词：家兔胚胎细胞核移植极化
- 猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达被引量：6
- 2003年
- 根据猪细小病毒 (porcineparvovirus ,PPV)NADL 2株非结构蛋白基因NS1序列设计引物 ,扩增出了PPVSY 99株的NS1基因 ,将其克隆到原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组质粒SYNS1/pET2 8a。将SYNS1/pET2 8a转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导 ,使PPVNS1基因获得了表达 ,运用ELISA和Westernblotting证实了表达产物的特异性。经表达产物细胞定位分析 ,表达的NS1蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变诱导时间或诱导剂IPTG的浓度 ,确定了表达NS1蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 .6mmol·L-1,诱导时间为 3h ,在大肠杆菌中最高表达含量为 17.8%。亲和层析后 ,得到了纯化的NS1蛋白 ,在Westernblotting检测中 ,纯化蛋白大大降低了反应背景。表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂来检测PPV的发生 。
- 吴丹童光志仇华吉薛强周艳君李景鹏
- 关键词：细小病毒非结构蛋白原核表达
- 牛卵泡卵母细胞冷冻损伤的研究被引量：21
- 1994年
- 把牛卵泡卵母细胞进行平衡、冷冻和玻璃化冷冻解冻后，对其微细结构损伤和成熟培养后的变化进行了研究。冷冻解冻后经台盼蓝染色判断为存活的卵母细胞，表现为不同程度的结构损伤，包括微绒毛几乎消失，有的部位质膜模糊甚至破裂；线粒体膨胀，电子密度下降，帽及峪消失；囊泡变形融合；高尔基复合体及微管消失；内质网囊池扩大；细胞基质出现空白区。台盼蓝染色判为死亡的卵母细胞，表现为细胞基质、细胞膜及细胞器崩解。体外培养后的冷冻卵母细胞微细结构呈现某些恢复及成熟迹象，但不能与正常情况相提并论。冷冻解冻后卵丘细胞除内质网囊池膨大外，结构保存完好。
- 孙青原秦鹏春刘国艺杨庆章徐立滨冯怀亮
- 关键词：卵母细胞冷冻保存
- 氯前列烯醇(Cloprostenol)在奶牛繁殖中应用的研究
- 1998年
- 岳奎忠张宝金范有胜
- 关键词：奶牛繁殖氯前列烯醇
- 大岩桐叶片培养再生植株的研究被引量：10
- 1995年
- 以大岩桐（ＳｉｎｎｉｇｉａｓｐｅｃｉｏｓａＢｅｎｔｈ．ｅｔＨｏｏｋ）叶片为试材，接种于ＭＳ附加不同激素组合的培养基上，成功地经愈伤组织亚球状体至不定芽途径形成大量再生植株并移栽成活。在各种细胞分裂素中，６－苄基嘌呤（ＢＡ）的效果优于激动素（ＫＴ）。生长素萘乙酸（ＮＡＡ）与ＢＡ及ＫＴ配合使用时愈伤组织诱导、球状体分化及不定芽增殖均有明显的增效作用。其最适宜的培养基组成为：ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ在这个培养基上，愈伤组织诱导率为９４％，球状体分化率为１８８％，不定芽在口周内增殖５倍。最适宜的生极培养基为：ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，生根率在９０％以上，试管苗移栽成活率在８０％以上。
- 刘本叶张艳萍张喜春吴绛云张丽梅张建光
- 关键词：大岩桐愈伤组织花卉
- 牛卵母细胞冷冻保存的研究进展被引量：7
- 1993年
- 1977年,Whittingham 首次用-196℃保存的小鼠成熟卵母细胞培育出后代。目前,小鼠成熟卵母细胞的冷冻保存方法已趋于完善。1986年,Chen 第一次报道冷冻人成熟卵母细胞成功,获双胎妊娠。家畜的卵母细胞冷冻保存研究起步较晚,但随着卵母细胞体外成熟、体外受精、细胞核移植、基因转移等,以卵母细胞为材料的生物技术的迅猛发展,人们对超低温冷冻保存家畜卵母细胞的兴趣大增,渴望象建立“精子库”和“胚胎库”那样,建立起“卵子库”。
- 孙青原
- 关键词：卵母细胞冷冻保存
