中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
- 作品数：3,260 被引量：11,240H指数：39
- 相关作者：步志高曲连东刘长明孔宪刚相文华更多>>
- 相关机构：东北农业大学动物医学学院东北农业大学生命科学学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 蓝舌病病毒核酸通用检测方法的建立
- 目的：建立具有群特异性的BTV通用核酸检测方法，为有效的防控蓝舌病奠定了基础。方法：利用DNAMAN生物学软件，比对了GenBank中26个不同血清型BTV的共104条S10基因的核酸序列，选取最保守的序列区域设计特异性...
- 冯瑜菲徐青元杨涛孙恩成李俊平吴东来
- 关键词：动物医学蓝舌病病毒核酸检测
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型衣壳蛋白(Cap)在293T细胞中的亚细胞定位被引量：4
- 2010年
- 猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因编码病毒的核衣壳蛋白(Cap),该蛋白属于病毒保护性抗原,具有重要免疫功能。本研究以PCV2871毒株基因组为模板,用特异性上下游引物扩增获得ORF2基因,利用真核表达载体构建了表达PCV2Cap蛋白的重组质粒pCAGGS-ORF2。采用脂质体将pCAGGS-ORF2转染至293T细胞,用抗PCV2-Cap单克隆抗体对重组质粒转染细胞进行了免疫活性分析和免疫荧光检测,表明Cap蛋白在细胞中获得表达;利用共聚焦显微镜对Cap蛋白在293T细胞中的亚细胞定位观察结果表明,转染24h后可见Cap蛋白的表达随培养时间延长显著增多,72h达到高峰,表达的Cap蛋白主要分布在细胞核中。构建的pCAGGS-ORF2真核表达重组质粒在293T细胞中的表达,为进一步PCV2基因疫苗的研制奠定了基础。
- 符芳李曦李雪松李海忠陈欣王伟魏萍
- 关键词：猪圆环病毒2型核衣壳蛋白亚细胞定位
- 蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定被引量：3
- 2014年
- 为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同时利用ELISA法验证该氨基酸区域突变后对BTVvP7蛋白抗原性的影响。结果表明被BTVMAb4H7所识别的BTVVP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位由175FQG177、185YL186和278WH279组成，其中aal75～aal77和aal85～aal86为该抗原表位的关键性氨基酸，本研究初步阐明了BTvVP7蛋白竞争抑制特异性的分子基础，对VP7蛋白功能研究和建立BTV群特异性检测方法具有重要意义。
- 魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜刘二战钱爱东邸英华吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒VP7蛋白
- J亚群禽白血病流行病学研究新进展被引量：3
- 2014年
- J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康发展。ALV-J与其他免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中普遍存在,使得鸡群免疫力低下,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,使疫病的诊断和防控难度加大。本文从分子流行病学的角度对ALV-J的发生发展进行综述,以期揭示ALV-J致病性增强的分子机制。
- 邓小芸祁小乐张久丽华育平高玉龙王笑梅
- 关键词：J亚群禽白血病流行病学
- 莱斯顿型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的构建与免疫原性研究被引量：2
- 2016年
- 莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV GP蛋白嵌合型VSV(r VSV△G*GFP-REBOV-GP),并对其生物学特性进行分析,评估其作为REBOV活疫苗的安全性和有效性。激光共聚焦和western blot试验显示REBOV GP蛋白在嵌合病毒中获得正确表达;病毒生长动力学结果显示,r VSV△G*GFP-REBOV-GP与亲本株具有不同的生长特性;将r VSV△G*GFP-REBOV-GP接种小鼠,未引起小鼠发病,体重增长趋势与对照组一致,表明嵌合病毒具有良好的安全性;中和试验结果表明该嵌合病毒能够诱导小鼠产生针对REBOV GP的高滴度中和抗体。本研究制备的r VSV△G*GFP-REBOV-GP为进一步的动物免疫实验奠定了基础。
- 祖述龙宋继军邵钰刘任强温志远周微微王雪莲葛金英步志高
- 关键词：水泡性口炎病毒
- 表达PCV2-Cap蛋白的TK-/gE-/gG-重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性研究
- <正>伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科水痘病毒属。自2011年以来,临床上用经典Bartha-k61弱毒活疫苗免疫猪只频发伪狂犬病强毒感染的病例,经研究证实由PR...
- 夏德利黄立平杜文娟王一平危艳武谢永兴刘丹吴红丽冯力刘长明
- 关键词：活载体疫苗免疫原性
- 文献传递
- 流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达被引量：5
- 2000年
- 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子 ｐＵＣＨ５。然后将 ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体 ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ，筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后，在脂质体转染试剂介导下，ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒 ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－Ｂｌｕｅ ＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化，获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验结果表明 ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞，血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达，为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 刘明于康震张云孔宪刚徐宜为
- 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒
- 猪瘟病毒囊膜蛋白E2的锚定序列部分缺失对其在细胞内表达的影响被引量：1
- 2010年
- 为了将猪瘟病毒(CFSV)的囊膜蛋白表达在细胞表面,本研究根据与CSFV同属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的囊膜蛋白E2锚定序列,推测出CSFV的E2锚定序列。利用生物信息学软件对CSFV的E2锚定序列进行分析、建模与部分缺失,构建成4种不同的表达CSFV囊膜蛋白EmsE1E2的片段。将以上4种片段分别连接到真核表达载体pCAGGS中,转染幼仓鼠肾(BHK21)细胞,利用抗E2蛋白的单克隆抗体对表达蛋白进行westernblot检测与间接免疫荧光(IFA)检测,研究结果表明:跨膜区中锚定序列的部分缺失会降低E2在细胞内的表达,为猪瘟伪型病毒的研制提供了实验依据。
- 贺番王靖飞郝永清仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒分子模拟技术
- 蛋鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定被引量：12
- 2020年
- 传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在成为养禽业健康发展新的重要威胁。目前报道的IBDV新型变异株均来自肉鸡群的感染。为了解IBDV新型变异株感染蛋鸡的情况,通过对黑龙江省一个疑似非典型IBD发病蛋鸡群样品进行RT-PCR检测及相关分析,结果显示,引起该鸡群非典型IBD的病原是IBDV新型变异株。这是蛋鸡感染IBDV新型变异株的首次报道,对于更全面了解IBDV新型变异株的流行态势具有重要意义。
- 王雨龙范林进姜楠高玉龙李凯李凯刘长军高立潘青刘长军崔红玉祁小乐
- 关键词：传染性法氏囊病病毒蛋鸡
- 鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究被引量：4
- 2014年
- 为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体,并研究鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用,本研究以ILTV—LJS09毒株基因组为模板,应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建pET-32a—gC质粒,经IPTG诱导表达并纯化,获得His—gC重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot结果表明,所制备的兔抗-ILTV gC抗体能与纯化的His—gC蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gC蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,所制备的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多抗能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298毒株反应,特异性良好。采用获得的抗gC抗体观测LJS09-gC蛋白在LMH细胞内的分布,发现gC蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上,细胞核和未感染的细胞中没有gC蛋白。利用抗体中和ILTV gC蛋白的试验结果表明,gC蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播,从而影响病毒蚀斑的形成。本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多克隆抗体,并证实LJS09 gC蛋白在分布及功能上具有a-疱疹病毒的保守性,为gC蛋白生物学特性和ILTV感染机制的研究提供了重要数据。
- 孙永珍赵妍崔红玉王云峰
- 关键词：ILTV多克隆抗体细胞定位
