昆明医学院基础医学院分子生物学实验室
- 作品数：15 被引量：44H指数：4
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- 介绍一种大鼠肝细胞的分离和培养方法被引量：4
- 2004年
- 介绍分离、纯化大鼠肝细胞 (用胶元酶二步灌流和Percoll不连续密度离心 )及分离后的培养 .此方法可靠易行 ,可制备出质量合格的肝细胞 (实质细胞 ) .讨论了保证分离和纯化成功的一些关键步骤、条件和原理 .提出分离肝细胞应首选胶元酶Ⅳ ,Percoll的渗透压和pH也是影响肝细胞的漂浮密度和存活能力的因素 .
- 曹西南杨远和
- 关键词：肝细胞
- 二磷酸果糖对低温保存兔心肌组织蛋白质的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究二磷酸果糖(FDP)对低温保存兔心肌组织蛋白质的影响。方法兔心肌组织分别在4℃保存于含5mmol.L-1FDP或无FDP的StThomas液中,提取心肌组织蛋白质经SDS凝胶电泳比较,肽质量指纹谱质谱分析和Westernblot鉴定蛋白质分子。结果肽质量指纹谱分析鉴定到β-肌球蛋白重链、莱恩素受体(ryanodinereceptor)、α肌动蛋白、电压依赖的阴离子通道蛋白1(VDAC1)和腺苷酸激酶3等5种蛋白质差异,Westernblot鉴定到β-肌球蛋白重链、蛋白激酶Cε(PKCε)和IgG重链3种蛋白质差异。加入FDP后心肌组织中β-肌球蛋白重链、α肌动蛋白和PKCε得到更好保存。结论FDP可以增加低温保存的兔心肌组织中一些与心功能相关的重要的蛋白质的保存量,以上所述的存在差异的蛋白质,在心脏低温保存条件研究中,具有作为生物标记分子的潜在应用价值。
- 曹西南杨远和
- 关键词：二磷酸果糖心脏肽质量指纹谱
- PKCε与Lck在细胞内直接相互作用的荧光共振能量转移证据被引量：2
- 2002年
- 蛋白激酶Cε亚型 (PKCε)和蛋白酪氨酸激酸Lck均在心肌缺血预适应的信号转导中起着十分重要的作用 .构建PKCε和Lck与绿色荧光蛋白的融合蛋白的真核细胞表达载体 .将其共转染H2 93细胞进行表达 .用荧光显微镜观察到荧光共振能量转移现象 。
- 曹西南平佩佩宋昌旭
- 关键词：PKCΕLCK荧光共振能量转移缺血预适应蛋白质相互作用HELA细胞
- 受精卵原核显微穿刺导入DNA制备转基因兔被引量：2
- 2005年
- 目的:受精卵原核显微DNA注射是转基因动物制备的最常用、最可靠的方法.研究技术上更为简易的受精卵原核显微穿刺导入DNA制备转基因兔的可行性.方法:重组转基因载体pCA-CHA,采用细胞原核显微穿刺将DNA导入兔受精卵制备转基因兔,用PCR和Southern Blot方法鉴定转基因兔.结果:转基因处理后获得仔兔92只,以PCR检测结果计算,转基因总效率为1.63%～2.40%,整合率为11.54%～16.13%;以Southern Blot检测结果计算,转基因总效率为0.27%,整合率为1.92%.结论:受精卵原核显微穿刺导入DNA与受精卵原核显微DNA注射制备转基因兔的结果相当.
- 曹西南熊亚隆纳冬荃
- 关键词：转基因
- 重组质粒pUC-CK在大肠杆菌中表达条件的优化
- 2004年
- 目的 :优化含PKCε催化功能域基因的重组质粒 pUC -CK在大肠杆菌中表达的最佳条件 方法 :含重组质粒大肠杆菌培养、表达产物的SDS -PAGE电泳及Westernblot检测 结果 :PKCε催化功能域在大肠杆菌中表达的最佳条件为 :含重组质粒大肠杆菌过夜培养时加入 0 1%的葡萄糖增加质粒拷贝数 ;诱导剂(IPTG)的最适工作浓度为 0 5mmol/L ;诱导最适培养温度为 30℃ ;诱导培养时间为 2～ 3h用于检测 ,6～2 4h用于分离纯化 结论 :PKCε催化功能域在大肠杆菌中成功表达 ,为今后大量表达、纯化该酶蛋白作了前期铺垫 .
- 王芳曹西南
- 关键词：重组质粒CK大肠杆菌质粒拷贝数IPTG
- 高效氯氰菊酯对人皮肤表皮细胞的直接刺激损害被引量：4
- 2006年
- 目的探讨高效氯氰菊酯对人皮肤表皮细胞的直接刺激损害。方法以体外浸泡式培养的人皮肤表皮细胞为生物材料,以培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性为指标,检测了在不同染毒浓度条件下培养基中的LDH活性,并进行了电镜观察。结果随着染毒剂量的增加,培养基中LDH活性升高,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组相比,差异亦有统计学意义(P<0.01);电镜观察显示,在低浓度条件下,细胞虽可保持结构完整,但表面的绒毛状突起减少,少数细胞胞核内出现空泡(水肿),细胞受到轻微损害。随染毒剂量增加,细胞胞膜破裂,细胞核溶解呈空泡状,乃至细胞大量坏死。结论高效氯氰菊酯对人皮肤表皮细胞有直接刺激损害作用,在一定条件下,可损害皮肤屏障,使其更易被吸收,造成机体中毒,应特别注意劳动防护。
- 杨远和周梅贺铭李文辉曹西南
- 关键词：高效氯氰菊酯表皮细胞乳酸脱氢酶电镜观察
- 离体心脏保存技术的研究进展被引量：1
- 2009年
- 心脏保存在心脏移植过程中维持离体心脏的正常生理功能扮演重要的角色。改进供心的保存技术可以延长供心的保存时间，扩大供心的来源。本文简介了心脏保存的现状和原则；总结了各种离体心脏保存方法，从保护离体心脏功能的角度分析各种保存方法的机制和优缺点。但是，目前心脏保存并没有取得实质性进展，在一些方面仍然存在诸多不明和争议，尚需进一步探究。
- 贺铭曹西南
- 关键词：心脏移植心脏保存
- 急性胰腺炎大鼠内皮素-3基因表达的逆转录检测
- 2007年
- 目的研究内皮素-3(endothelin-3,ET-3)mRNA的表达水平与急性胰腺炎时胰腺炎症程度的关系。方法将54只SD大鼠编号后随机分为4组,其中假手术组9只,胰腺炎组、动脉给药组和静脉给药组〔多巴胺:5μg/(kg.min)〕各15只,按Aho法用4.5%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射制作急性胰腺炎模型,分别在1、6及24h取胰腺组织,采用半定量逆转录聚合酶链式反应检测ET-3基因的转录水平,并观察各组胰腺组织病理变化,确定ET-3mRNA的表达水平与胰腺炎炎症程度的关系。结果模型制作后1、6及24h均可见到ET-3mRNA表达,各组(除假手术组外)均以6h时ET-3mRNA表达最强。除1h外,动脉给药组ET-3mRNA表达量明显低于静脉给药组及胰腺炎组(P<0.05,P<0.01);而假手术组在任何时相均明显低于另外3组(P<0.05,P<0.01)。各组胰腺组织病理学评分按假手术组→动脉给药组→静脉给药组→胰腺炎组的顺序逐渐升高。结论ET-3mRNA的表达与胰腺炎炎症程度有一定关系,ET-3mRNA表达量随胰腺炎严重程度的加重而增加;急性胰腺炎中,多巴胺动脉给药比静脉给药有效。
- 张勇郭永章李立曹西南
- 关键词：MRNA胰腺炎微循环
- 丹参在心脏保存中应用的研究进展被引量：5
- 2009年
- 在心脏保存中，丹参具有清除氧自由基、降低钙超载，减轻缺血／再灌注损伤；保护线粒体，改善能量代谢；扩张冠状动脉、抗凝，减少再灌注心律失常；保护内皮细胞；抑制细胞凋亡；抗菌消炎等作用，在心脏保存中具有良好的应用前景。本文对丹参在心脏保存中的作用机制，应用研究进展进行概述。
- 梁文曹西南
- 关键词：心脏保存丹参
- 介绍一种成年兔心肌细胞的分离与培养方法被引量：6
- 2003年
- 详细介绍了成年兔心肌细胞的分离方法 (胶原酶二步灌流法 )以及分离后的心肌细胞的培养 .根据实践经验 ,强调了灌流失败的主要原因是灌流管道末端插入过深以及胶原酶的用量不适 .同时提出在整个灌流和细胞制备过程中 ,要严格控制灌流液及胶原酶液的pH为 7 35～ 7 4 5 ,保持灌流液温度在 37℃ ,以减少细胞的损伤和死亡 .还提醒读者 。
- 杨远和曹西南
- 关键词：胶原酶
