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军事医学科学院军事兽医研究所: 作品数：3,084 被引量：5,651H指数：25; 相关作者：扈荣良张守峰金扩世冯书章黄耕更多>>; 相关机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林农业大学动物科学技术学院吉林大学动物医学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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猴源细小病毒的分离鉴定: 2008年我国某实验动物养殖基地发生猴传染性腹泻并引起死亡，临床症状类似犬猫细小病毒性肠炎。采集发病猴肠内容物，通过细胞培养进行病毒分离。采用血凝试验、PCR检测、免疫组织化学检测、电镜观察、直接免疫荧光检测、理化学鉴定...; 杨松涛孙兆增孟轲音王泽夏咸柱王淑君冯浩张仁舟曾林夏志平邹啸环王承宇连海; 关键词：细小病毒传染性腹泻细胞培养病毒分离; 文献传递

委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：5: 2015年; 委内瑞拉马脑炎(Venezuelan equine encephalitis,VEE)是由委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)复合物引起的一种人兽共患病。我国目前尚无该病,因此建立一种快速准确的检测方法对预防和控制该病至关重要。本研究通过分析委内瑞拉马脑炎病毒nsp1基因序列的保守性,设计了一对能检测VEEV复合物所有亚型毒株的特异性引物和Taqman探针。通过反应体系和反应条件优化,建立了检测委内瑞拉马脑炎病毒复合物的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测VEEV经体外转录获得的RNA,检测的灵敏度达3.27×102拷贝/μL。以该方法检测与VEEV同属的东方马脑炎病毒(EEEV)和西方马脑炎病毒(WEEV)nsp1基因相同区段的RNA以及同属的基孔肯雅病毒(CHIKV),结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法将为可能在我国出现的委内瑞拉马脑炎的侦检提供有效技术手段。; 千莎莎何彪涂忠忠郭焕成涂长春; 关键词：委内瑞拉马脑炎病毒

大肠杆菌磺胺类药物抗性基因的检测被引量：2: 2017年; 为了解不同来源大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)对磺胺类药物的抗性,从鸡(128)、鸽子(86)和鹌鹑(36)的病变器官以及养殖场周围水(45)、土壤(35)中共分离到330株E.coli,应用肉汤微量稀释法和PCR方法,分离、鉴定磺胺类药物抗性菌株,检测抗生素抗性基因,分析抗生素抗性。结果显示,不同来源的330株E.coli分离株中,对磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶和磺胺甲氧嘧啶的敏感菌株分别为118株(35.8%)、109株(33.0%)、95株(28.8%)、81株(24.5%)。磺胺类药物敏感菌株对抗生素的耐受能力依次为:氯霉素、青霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素、利福平;且病变器官分离菌株的抗生素抗性高于水、土壤中分离的菌株,鸡源分离菌株抗生素抗性高于鸽子、鹌鹑;菌株的磺胺类抗性基因sul1、sul2、int1检出率较高,Int2、sul3检出率较低。磺胺类抗生素抗性菌的抗性基因检出率依次为鸡、鸽子、鹌鹑、水、土壤。病变组织、水、土壤分离株中共检出182个抗性基因,其中,97株只含1种抗性基因,11株含2种抗性基因,6株含3种抗性基因,5株含有4种抗性基因,5株含有5种抗性基因。磺胺类抗生素抗性菌株有11株未检出抗生素抗性基因,而无磺胺类抗生素抗性的菌株有7株检出磺胺类抗生素抗性基因。结果表明,不同来源菌株的磺胺类药物抗性不同,E.coli的磺胺类抗生素抗性较高,且磺胺类抗生素抗性菌株具有多重抗生素抗性,E.coli磺胺类抗生素抗性的表现型与其基因型之间存在不完全吻合现象。; 金明兰孟庆玲陈松曾庆雄窦梦雪徐莹莹陆海金宁一; 关键词：磺胺抗性菌株抗性基因大肠杆菌

猪链球菌2型新毒力相关基因lin0523的功能研究: 本研究利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s,定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因,构建基因缺失突变菌株458△lin,利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染实验表明...; 李鹏刘军祝令伟齐翀周博孙洋纪雪刘爽冯书章; 关键词：猪链球菌2型毒力因子; 文献传递

A型H3579亚型流感多表位核酸疫苗构建及实验免疫研究: 目前流感病毒的流行多亚型并存,禽流感不断突破种间屏障感染人类,而以传统灭活疫苗预防流感的策略已难以应对流感迅速变异的趋势。本研究设计并合成了含有H3、H9的HA和H5N1 NA中和表位,M、NP基因保守序列CTL表位的多...; 南文龙金宁一鲁会军陈义锋赵翠青田明尧白靓张金双徐一鸣田宇飞朱占波; 关键词：流感核酸疫苗多表位; 文献传递

狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：4: 2016年; 为表达狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基质蛋白(M)蛋白,进而制备多克隆抗体。本研究以狂犬病病毒BD06株RNA为模版,通过RT-PCR扩增M蛋白基因全序列,将其插入质粒pFastbac I中,获取的重组质粒pFastbac I-M,经酶切鉴定后,转化到DH10Bac E.coli感受态中,以获取重组穿梭质粒Bacmid-M。用lipofectamine2000介导Bacmid-M转染Sf9细胞获取重组杆状病毒AcMNPV-M。用抗His标签的单体、犬抗RV阳性血清及兔抗RV阳性血清通过Western-Blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,用Western-Blot和FAVN试验鉴定多克隆抗体的反应原性及其病毒中和效价。结果表明:(1)利用杆状病毒表达系统成功的表达了大小约为25kD的重组M蛋白;(2)重组M蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;(3)制备的多克隆抗体与狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能发生特异性反应,但其无病毒中和能力。本研究完成了重组M蛋白的表达、纯化并制备了其多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了物质基础。; 郑光来卢晓冉张静远陈腾王东方严妍张守峰扈荣良; 关键词：狂犬病病毒基质蛋白杆状病毒纯化多克隆抗体

肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备被引量：4: 2017年; 目的制备可高效、特异性富集肠出血性E.coli O157(enterohemorrhagic Escherichia coli O157,EHEC O157)的免疫磁珠。方法分别用5种不同规格磁珠与E.coli O157特异性单克隆抗体偶联制备免疫磁珠,通过比较磁珠蛋白偶联量,选取包被效果最佳的磁珠规格;对制备工艺进行优化(包括活化时间、温度,偶联缓冲液p H值,偶联温度、时间);对制备的O157免疫磁珠选择性集菌的敏感性和特异性进行评价,并与进口磁珠吸附率进行比较。结果直径0.5~1.0μm羧基磁珠抗体包被效果及目的菌分离效果最好。加入NHS后,活化30 min为最佳时间;4℃磁珠活化温度、0.01 mol/L PBS(p H 7.4)构成的体系对磁珠偶联单克隆抗体效果最佳;偶联温度为37℃、偶联时间为120 min时,偶联蛋白量最高,且波动范围较小,为最佳偶联温度及时间。在复杂的微生物环境中,O157免疫磁珠的敏感性达到20 CFU/ml。在混合菌液中,E.coli O157菌含量在1.4×10~3 CFU/ml时,免疫磁珠特异性捕获率达到90%。结论获得羧基磁珠与E.coli O157单克隆抗体偶联的最佳条件。制备的免疫磁珠能够特异性富集EHEC O157,具有操作简便,分离速度快,捕获率高等特点,可用于临床样品或食品中EHEC O157的分离鉴定。; 梁冰张雅洁纪雪祝令伟郭学军刘彦晶刘军周伟李丽红冯书章孙洋; 关键词：单克隆抗体免疫磁珠

内蒙古动物狂犬病流行病学研究被引量：5: 2018年; 狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus，RABV）引起的几乎所有温血动物都易感的人兽共患病。近年来，内蒙古地区发生了多起家养动物和野生动物疑似狂犬病疫情，给当地养殖业造成巨大损失。利用直接荧光抗体试验对2014—2016年内蒙古自治区发生的5起野生狐狸、牛、骆驼和犬的疑似狂犬病疫情进行诊断。经确诊，上述疫情均为RABV引起的。通过RT-PCR和核苷酸序列测定，获得6株病毒全长N基因序列，使用DNAStar和MEGA等软件将上述序列与周边省份和临近国家的流行毒株进行同源性比较和系统进化分析。研究结果显示，6株毒株核苷酸同源性为98．8％～99．9％，6株毒株均属于世界群草原型RABV，该型毒株在俄罗斯、蒙古、哈萨克斯坦的野生狐狸、狼群中广泛传播，本研究首次发现该型毒株已经由野生狐狸传播至犬群。进一步研究发现，内蒙古动物狂犬病传播来源包括野生狐狸、貉、犬等，流行的毒株类型包括亚洲1群、世界群和北极相关群，这些使得内蒙古成为我国狂犬病疫情最为复杂的地区之一，增加了该地区狂犬病防控难度。本研究通过对近年来内蒙古动物狂犬病进行流行病学分析，针对性地提出了内蒙古动物狂犬病防控措施。; 于明洋于明洋阿拉腾和力王万新桂佳勇张全文魏银鸿许炜迪涂忠忠张岩刘婷芳涂长春涂长春; 关键词：野生动物家畜狂犬病系统进化分析

不同日龄SPF鸡接种传染性法氏囊病病毒的免疫反应研究被引量：6: 2010年; 为探讨鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)对不同日龄鸡的免疫病理、免疫反应和法氏囊、脾、胸腺占体重比,将其分别接种15日龄和30日龄无特殊病原体(SPF)鸡,通过临床观察、PCR、ELISPOT,进行法氏囊病理损伤、IFN-γ表达水平、抗体消长规律,法氏囊、脾及胸腺占体重比研究。另外,将其分别接种15日龄鸡胚和1日龄SPF鸡,检测致病力。在接种3 d、5 d后,SPF鸡的法氏囊、盲肠淋巴结和脾脏均出现不同程度损伤,检测到病毒的目的基因,IFN-γ表达差异显著;在接种后7～28 d检测到特异性抗体、中和抗体,各组抗体水平差异不显著;在接种后22 d,胸腺、法氏囊与体重之比最高,之后开始下降;在56 d内,脾脏和体重比逐渐升高。结果表明不同日龄的鸡在接种后3 d、5 d,法氏囊、脾、盲肠淋巴结等组织IFN-γ表达水平差异十分显著,鸡胚接种病毒引起的损伤比雏鸡接种损伤更严重,为后期评价免疫水平和疫病诊断提供了参考数据。; 金明兰朱占波刘存霞韩松金宁一; 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒免疫发病机制免疫器官

缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选被引量：4: 2011年; 通过在E3L同源重组臂中插入含有增强型痘苗病毒早晚期启动子(pE/L)、增强型绿色荧光蛋白基因和同向Loxp(Locus of X-over P1)序列的表达盒构建穿梭质粒pTE-EGFP。利用pTE-EGFP和野生型天坛株痘苗病毒共转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过对绿色荧光蚀斑的10次筛选,构建缺失E3L基因并含有EGFP基因的重组痘苗病毒rTTVV-TE--EGFP+。利用rTTVV-TE--EGFP+和含有Cre(Cyclization recombination)重组酶基因的重组质粒pVAX1-Cre共转染BHK-21细胞,通过对无荧光蚀斑的10次筛选,构建无筛选标记的天坛株痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--,并利用聚合酶链式反应(PCR)对其进行鉴定。鉴定结果显示,rTTVV-TE--中无E3L基因转录和EGFP基因表达。以上结果说明,所构建的痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--完全缺失了E3L基因和外源筛选标记EGFP基因,且具有良好的遗传稳定性。; 王宇航李霄王浩然阚式绂王卓越齐延新吴娜杜寿文金宁一; 关键词：病毒载体

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