江苏大学基础医学与医学技术学院检验医学研究所
- 作品数：78 被引量：236H指数：8
- 相关作者：许逊杨恒朱晨露魏衍财秦伟更多>>
- 相关机构：南京师范大学生命科学学院南京医科大学附属苏州医院扬州大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- 转录因子T-bet和GATA-3对婴幼儿喘息性支气管炎免疫调控作用的初步研究
- 目的:初步探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫凋控作用。方法:对32 例小儿喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5ml,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终浓度为10...
- 王锁英张赟健忻悦许小朋杨敏邱谷凤马洁眭建许化溪
- 文献传递
- T-bet的研究进展被引量：12
- 2005年
- 自2000年T-bet被发现后,有关其基础及临床研究均取得了一定进展,从T-bet的产生细胞、诱导表达及其调控,到T-bet介导IFN-γ的基因转录和对Th1细胞分化的影响,以及T-bet在Th1/Th2漂移性疾病中的作用都进行了研究,现就其进展情况作一综述。
- 王锁英许化溪
- 关键词：T-BETIFN-ΓTH细胞
- 髓源性抑制细胞抑制机制及其抗肿瘤免疫治疗被引量：1
- 2010年
- 髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是一群表型异质细胞群,来源于骨髓祖细胞和未成熟髓细胞,在癌症、炎症和感染中大量扩增,可通过多种机制抑制机体抗肿瘤免疫,促进肿瘤生长和转移。本文就MDSCs的一般生物学特征、免疫抑制机制和靶向MDSCs的抗肿瘤治疗策略等研究进展作一综述。
- 高晶晶焦志军许化溪
- 关键词：髓源性抑制细胞免疫抑制抗肿瘤治疗
- 去甲雄三烯醇酮的化学修饰及其免疫原性的构建
- 2010年
- 目的:制备去甲雄三烯醇酮(又称群勃龙,trenbolone,TR)抗体以建立TR特异性检测方法。方法:TR与琥珀酸酐反应生成TR-半琥珀酸酯(TR-HS),采用混合酸酐法和对乙基-N,N-二甲基丙基碳二亚胺(EDC)法将TR-HS与牛血清蛋白(BSA)偶联制备其偶联物;质谱、核磁共振分析偶联结果;免疫家兔并用双向免疫扩散和ELISA检测抗血清效价,判断偶联物的免疫原性。结果:经质谱鉴定显示,所获得的修饰物TR-HS相对分子质量为370;核磁共振分析表明,各吸收峰与理论相符;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱分析表明,TR-BSA相对分子质量明显增加、紫外最大吸收峰漂移;TR与BSA混合酸酐法和EDC法偶联比分别为1∶18和1∶12;混合酸酐法偶联物免疫家兔获得的抗血清效价ELISA测得TR特异性抗体效价为1∶320 000;双向免疫扩散测得的抗血清效价为1∶16。结论:成功制备了具有明显免疫原性的TR-BSA偶联物,为TR单克隆抗体的制备和建立TR残留量的快速检测方法奠定了基础。
- 周成林苏兆亮朱卫华王胜军李平许化溪
- 关键词：偶联
- 小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2005年
- 目的:克隆小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的全长编码区cDNA。方法:利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,并将其连接到pGEM-T载体上,进行测序和核酸分析。结果:扩增得到的小鼠T-bet基因cDNA全长1 592 bp,编码530个氨基酸,包含一个189个氨基酸残基组成的能与T盒DNA结合的结构域;b last结果分析表明,该cDNA与Genbank中发表的序列具有99.8%的同源性。结论:获得小鼠T-bet基因的克隆,为进一步研究转基因免疫干预奠定了基础。
- 王锁英许化溪王胜军黄新祥仝佳王文兵陈巧林马斌眭建姜旭淦胡嘉波
- 关键词：T-BET基因克隆RT-PCR
- Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立
- 2010年
- 目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆。通过观察EGFP的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定。结果:构建了PIRES2-mHlx-EGFP真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和EGFP修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/EGFP)。结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础。
- 何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪
- 关键词：DC2.4EGFP
- 白细胞介素17体外抑制小鼠髓源抑制性细胞的凋亡被引量：2
- 2017年
- 目的:体外观察白细胞介素17(interleukin17,IL-17)对小鼠髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)凋亡的影响。方法:通过皮下注射Lewis细胞构建荷瘤小鼠模型,采用免疫磁珠分选技术(MACS)分离脾脏MDSCs,常规培养。经IL-17处理24 h后,采用流式细胞术检测MDSCs凋亡率;经IL-17处理6 h后通过蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2的表达。结果:IL-17处理组活细胞数量为(9.547±0.962 6)×10~4,明显高于对照组活细胞数[(4.123±0.259 8)×10~4,P<0.01];IL-17处理组活细胞比例为(59.55±2.831)%,明显高于对照组[(45.33±1.556)%,P<0.05];对照组晚期凋亡细胞比例为(22.87±1.349)%,明显高于IL-17处理组[(13.70±1.003)%,P<0.01]。蛋白质印迹检测结果显示,IL-17处理后的MDSCs抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显上调(P<0.05)。结论:IL-17体外可明显抑制MDSCs的凋亡。
- 王娟田洁田新宇王运刚许化溪王胜军
- 关键词：白细胞介素17凋亡BCL-2
- 人T-bet基因转染U937探讨T-bet对白血病细胞的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性。方法采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U937细胞T-bet的mRNA水平;westen-blot检测表达的T-bet蛋白;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。试验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照。结果电穿孔转染U937细胞后,在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞(转染细胞),其荧光细胞阳性率80%左右,提示转染成功;转染T-bet的U937细胞,分别经RT-PCR及westen-blot检测到T-bet的mRNA和表达的蛋白,而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞,均未见目的基因的转录和蛋白表达;T-bet转染细胞的培养上清中含有较高水平的IFN-γ,而转染前及对照质粒转染的细胞IFN-γ的分泌水平极低。结论通过电穿孔方法成功将人T-bet基因转染到白血病细胞株U937中,并检测到大量IFN-γ的产生。T-bet是免疫应答调节的重要转录因子,对其研究将有助于进一步探讨T-bet基因或其表达产物作为Th1应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性。
- 许小朋王锁英杨敏邱谷风王胜军邵启祥许化溪
- 关键词：基因转染T-BET干扰素ΓU937
- Bcl-6基因3'UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-346靶向关系的验证被引量：1
- 2014年
- 目的:构建Bcl-6基因3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)荧光素酶报告质粒,分析miR-346对Bcl-6的调控作用。方法:通过PicTar数据库和miRanda数据库预测可能与Bcl-6基因3'UTR作用的miRNA;将人工合成的Bcl-6基因3'UTR区序列克隆至荧光素酶报告质粒psiCHECK-2;将重组荧光素酶报告质粒和miRNA mimics共转染293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果:PicTar数据库和miRanda数据库预测交叉结果显示,miR-346与Bcl-6基因3'UTR存在互补结合位点;构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确;重组质粒和miR-346 mimics共转染293T细胞后,荧光素酶报告质粒表达的荧光素酶活性降低66%左右。结论:成功构建了Bcl-6基因3'UTR荧光素酶报告质粒,筛选出和Bcl-6表达相关的miRNA即miR-346。
- 陈娟袁靖吴晶晶田洁汤新逸芮棵田新宇张悦刘海冰耿丽娜杨珺许化溪王胜军
- 关键词：BCL-6基因微小RNA
- 转录因子Hlx修饰树突状细胞系DC2.4的功能研究
- 2011年
- 目的:在鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时表达Th1特异的核转录Hlx,探讨该转录因子对树突状细胞系DC2.4的功能的影响。方法:含有Hlx基因全部编码序列的真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx通过脂质体转染的方法转入DC细胞,转染效率应用FACS鉴定;Hlx基因在DC中表达情况应用RT-PCR和Real-time PCR检测。转染48 h后,分别从细胞因子,表面分子,吞噬功能,单向混合淋巴细胞反应方面对DC功能进行探讨。结果:真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx成功转入DC细胞,转染率可高达60%;在树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可以有效的增进成熟标志CD80,CD86,MHCII分子的表达,减弱DC的吞噬功能,IL-12表达量增加,但同时却高表达IL-10,TGF-β并表现为可抑制淋巴细胞增殖。结论:在小鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可有效地促进DC2.4的成熟,但是在功能方面多表现为调节性DC的功能。
- 周成林苏兆亮朱金连何志强王胜军李平许化溪
- 关键词：IL-10树突状细胞
