扬州大学医学院妇产与生殖医学研究所
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
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- 兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)多克隆抗体的制备与应用
- 2023年
- 目的制备兔抗小鼠睾丸表达蛋白38(TEX38)的多克隆抗体。方法以小鼠TEX38真核表达质粒pCDNA3.1-TEX38为模板扩增出TEX38可读框全长序列,并将其与pET-30a(+)连接,构建pET-30a-TEX38原核表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌E.coli BL21中,并采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。将其纯化和复性后,作为抗原免疫新西兰大白兔,抽取血清获得TEX38多克隆抗体。用ELISA检测免疫后的血清效价,Western blot法和免疫荧光染色法分别鉴定多克隆抗体的特异性。结果成功构建了pET-30a-TEX38重组质粒,并成功表达和纯化了TEX38原核蛋白。免疫后,5只兔血清的抗体滴度均达到1∶1000000。通过Western blot法和免疫荧光染色验证,表明抗体特异性较好,TEX38主要定位于小鼠睾丸生精细胞和精子。结论成功制备了兔抗小鼠TEX38多克隆抗体,并确定TEX38可在小鼠睾丸生精细胞和精子表达。
- 杨玲袁露杨凡葛婷婷徐文华许林巍牛长敏郑英
- 关键词：多克隆抗体精子发生
- 兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用被引量：8
- 2017年
- 目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。
- 马海涛郭佳倩夏静牛长敏申雪沂孙红亚郑英
- 关键词：多克隆抗体
- 兔抗小鼠Tubby样蛋白2(TULP2)多克隆抗体的制备与应用被引量：4
- 2022年
- 目的制备兔抗小鼠Tubby(Tub)样蛋白2(TULP2)多克隆抗体并检测TULP2蛋白在小鼠睾丸中的表达情况。方法分别将TULP2蛋白编码序列全长和TULP2蛋白含Tub结构域的羧基端(TULP2-C)插入pET-30a(+)质粒中,构建pET-30a(+)-TULP2和pET-30a(+)-TULP2-C原核表达重组质粒。将两种质粒分别转化入大肠杆菌E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核蛋白表达。利用组氨酸(His)融合蛋白纯化柱纯化TULP2和TULP2-C原核蛋白,用梯度浓度的尿素复性。分别以复性后的TULP2和TULP2-C原核蛋白为抗原免疫成年雄性新西兰大白兔,获得两种类型的TULP2多克隆抗体。应用ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法及免疫荧光技术确定自制多克隆抗体的有效性及特异性。结果成功构建了pET-30a(+)-TULP2以及pET-30a(+)-TULP2-C重组质粒,并且通过IPTG诱导,表达出TULP2和TULP2-C原核重组蛋白。ELISA检测两种抗体滴度均达到1∶1000000。Western blot法、免疫荧光染色结果显示,利用TULP2-C原核蛋白为免疫原制备的抗体特异性较差。而利用TULP2全长蛋白为免疫原制备的多克隆抗体可以特异识别成年野生型小鼠睾丸中内源性的TULP2蛋白,而且可用于免疫荧光组织化学染色,结果显示TULP2在成年野生型小鼠的圆形精子细胞及其后变形期的精子细胞中表达。结论应用TULP2全长蛋白为抗原可成功制备兔抗小鼠TULP2多克隆抗体,可同时用于Western blot法及免疫荧光组织化学染色。
- 徐文华翁子睿葛婷婷陆雯婷孟诗奇牛长敏郑英
- 关键词：多克隆抗体精子发生
