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靶向乙型肝炎病毒的外源性microRNA的构建及作用: 2017年; 【目的】探讨靶向乙型肝炎病毒的外源性microRNA(amiRNA)的构建及其抑制HBV复制的作用。【方法】应用Invitrogen公司miRNA在线设计软件(BLOCK-iT^(TM) RNAi Designer)针对HBV基因设计4条amiRNA序列;构建amiRNA真核表达质粒,Lipofectamine2000转染至人肝癌细胞株HepG2.2.15;荧光定量PCR检测HBV-DNA,ELISA检测HBsAg和HBeAg表达水平。【结果】设计合成的4条amiRNA均可下调培养体系中HBV-DNA水平以及HBsAg和HBeAg水平,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中以miR3抑制HBV-DNA复制的效果最为显著。【结论】靶向HBV基因适当位点设计合成的amiRNA在体外可以有效抑制HBV的复制。; 迟作华刘爱梅孙艳; 关键词：MICRORNA 乙肝病毒 RNA干扰

缓释型重组人骨形态发生蛋白2/壳聚糖生物骨修复材料诱导骨形成被引量：11: 2011年; 背景:重组人骨形态发生蛋白2在体内半衰期短、易降解代谢,达不到理想的骨再生效果。目的:制备缓释型重组人骨形态发生蛋白2/壳聚糖生物骨修复材料,并观察其缓释性能、骨诱导活性。方法:将重组人骨形态发生蛋白2与壳聚糖混合制备壳聚糖膜,涂覆于生物骨修复材料表面,ELISA方法检测其体外释药性能。茜素红染色检测缓释型人骨形态发生蛋白2/壳聚糖生物骨材料、重组人骨形态发生蛋白2生物骨材料、单纯骨填充材料诱导C2C12细胞骨钙蛋白的形成,观察其诱导成骨细胞能力。同时将3种骨修复材料植入清洁级KM小鼠股部肌袋内,2周后检测新生骨Ca2+离子含量,评价其异位骨诱导能力。结果与结论:材料表面的壳聚糖膜分布均匀,负载的重组人骨形态发生蛋白2呈团簇状。重组人骨形态发生蛋白2/壳聚糖生物骨修复材料体外释药存在突释,前4d释放量达总药量的50%,持续至12d,释药量达到90%,第18天时释放完全。与单纯骨填充材料、重组人骨形态发生蛋白2生物骨材料相比,缓释型人骨形态发生蛋白2/壳聚糖生物骨修复材料诱导C2C12细胞向成骨晚期分化能力与异位骨形成能力显著增强(P<0.05)。结果提示缓释型人骨形态发生蛋白2/壳聚糖生物骨修复材料缓释性能好,促进骨形成能力强。; 王丁丁曾戎杨敏儿何鉴贤陈阳何水连陈安安周智优袁丽颖汪炬; 关键词：人骨形态发生蛋白2 壳聚糖缓释骨修复材料骨形成

Sonic hedgehog阻断抗体增强外周血单个核细胞抗宫颈癌HeLa细胞的作用被引量：2: 2011年; 目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)阻断抗体对外周血单个核细胞(PBMCs)抗宫颈癌HeLa细胞作用的影响。方法:免疫细胞化学技术和RT-PCR法检测Shh及其信号分子在HeLa细胞中的表达;Ficoll密度梯度离心法分离正常人PBMCs,并与HeLa细胞建立共培养体系;于共培养体系中加入Shh阻断抗体,流式细胞术检测CD3、CD69和CD71分子表达;ELISA法检测细胞因子IFN-γ、IL-10和IL-4分泌;显微镜观察PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结果:HeLa细胞表达Shh及其信号分子,HeLa细胞传代6次对Shh的表达水平没有影响;共培养体系中CD3+细胞增多;Shh阻断抗体可以促进CD69、CD71表达和IFN-γ的分泌,但抑制IL-10分泌,对IL-4分泌没有显著影响;Shh阻断抗体增强PBMCs对HeLa细胞的杀伤。结论:Shh阻断抗体可以促进PBMCs活化,增强PBMCs抗宫颈癌HeLa细胞的作用。; 孙艳黄莉霞黄文浩黄斌; 关键词：宫颈肿瘤淋巴细胞

阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响被引量：5: 2016年; 目的:研究阻断Sonic Hedgehog(Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法:RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched(Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G0/G1期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论:阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导肝癌细胞凋亡。; 刘爱梅余功旺黄莉霞孙艳迟作华; 关键词：肝癌细胞 HEDGEHOG 细胞凋亡

一种融合抗体ScFv-Fc通用表达载体的构建被引量：2: 2011年; 为了构建一个可供自由替换的ScFv区,表达人小分子融合抗体ScFv-Fc的通用载体,利用RT-PCR技术扩增人抗体IgG1的Fc片段克隆至毕赤酵母表达载体pPICZα,将一段人工合成的互补寡核苷酸链插入重组载体pPICZα/Fc中Fc区的上游,引入2个可供小分子抗体ScFv-Fc的ScFv区自由替换的限制性酶切位点。分别扩增人抗狂犬病毒以及抗乙型肝炎表面抗原的ScFv片段,克隆至已构建的通用载体pPICZα/Fc,在毕赤酵母中诱导表达。进一步在1L条件下对活性抗体进行发酵,并利用proteinA亲和层析柱进行纯化。应用酵母基因组PCR、ELISA、Western blotting、活性检测等试验对此小分子抗体的表达进行生物学及免疫学分析。结果表明具有狂犬病毒抗原结合活性以及乙肝表面抗原结合活性的人源抗体分子均获得成功表达,1L发酵条件下表达量达到20～30mg/L,protein A亲和层析纯化后纯度>95%。研究构建了可用于功能性抗体分子ScFv-Fc筛选和表达的通用载体并对其发酵、纯化条件进行了摸索,为重组抗体分子诊断、治疗试剂的开发以及抗体的人源化奠定了物质基础。; 王丁丁苏曼曼胡丽莉袁丽颖孙艳汪炬颜炜群; 关键词：毕赤酵母

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用被引量：7: 2013年; 目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。; 黄莉霞钟文彬黄树林胡耀华王丁丁孙艳; 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯肝癌

重组人小分子抗体ScFv-Fc发酵条件的优化及纯化: 2011年; 目的:研究重组人小分子抗体ScFv-Fc在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件,以及ScFv-Fc的纯化方法。方法:分别从甲醇浓度、pH、诱导时间等方面对毕赤酵母重组菌株产生ScFv-Fc的发酵过程进行了优化;通过硫酸铵沉淀结合protein A亲和层析柱,对ScFv-Fc的纯化方法进行了研究。结果:确定ScFv-Fc在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件为:在pH5.2的条件下,以0.5%甲醇诱导72 h。经过protein A亲和层析柱纯化后,ScFv-Fc纯度可达94%以上。结论:确定了ScFv-Fc在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件以及纯化方法,为重组抗体分子诊断、治疗试剂的开发以及抗体的人源化奠定了物质基础。; 王丁丁苏曼曼胡丽莉袁丽颖颜炜群; 关键词：毕赤酵母发酵优化纯化

小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型的建立被引量：17: 2014年; 目的体外建立小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型,为体外研究中药抗炎机制提供实验模型。方法分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞;形态学观察巨噬细胞的生长;流式细胞术鉴定所分离细胞的纯度;以不同质量浓度(0、0.1、1、10μg/m L)的脂多糖(LPS)作用细胞24 h及1μg/m L的LPS作用细胞不同时间(0、4、8、16、24、48 h),荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达。结果获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态特征,纯度为84.55%;在一定范围内,LPS以浓度依赖和时间依赖的方式上调IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达。结论 1μg/m L的LPS作用细胞24 h能建立较为合理的炎症模型。; 余功旺黄文浩刘爱梅孙艳; 关键词：巨噬细胞脂多糖炎症模型

右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16增殖及细胞周期的影响被引量：3: 2011年; 目的:探讨右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:右旋一叶萩碱作用于小鼠黑色素瘤细胞B16,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期。结果:右旋一叶萩碱以时间和浓度依赖的方式抑制B16细胞生长;药物作用72 h IC50为63.34μmol/L;右旋一叶萩碱诱导B16细胞凋亡并显著减少S期、G2/M期细胞。结论:右旋一叶萩碱可以抑制黑色素瘤细胞的恶性增殖,其作用机制与诱导细胞凋亡、减少S期和G2/M期细胞有关。; 李朋军沈伟哉叶文才苏晓朴孙艳; 关键词：黑色素瘤凋亡增殖细胞周期

Sonic hedgehog调控T细胞分化和功能的研究: 2011年; T细胞是体内重要的免疫细胞,T细胞介导的细胞免疫应答参与了肿瘤、自身免疫性疾病等疾病的病理生理过程.研究T细胞分化和功能调控机制将有助于阐明相关疾病的发病机制,并为疾病防治提供思路.近来有国外研究显示,早期胚胎发育过程中的关键成形素(mophorgen)——Sonic hedgehog(SHH)不仅调控T细胞发育的各个阶段,还对外周成熟T细胞的增殖、活化产生影响,因此可能是T细胞分化和功能实现的重要调控机制之一.本研究就SHH信号通路及其生物学功能、SHH对T细胞分化各个阶段的调控及功能的影响作一综述.; 孙艳李朋军; 关键词：T细胞发育

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国家自然科学基金(81000923)

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