江苏省高技术研究计划项目(BE2008308)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省高技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 腐生葡萄球菌M36耐有机溶剂脂肪酶基因的克隆与原核表达被引量：3
- 2009年
- 脂肪酶是重要的工业用酶,在食品加工、生物柴油的合成等领域具有广泛的应用。但是在应用中有机溶剂对脂肪酶具有一定的毒性,因此获得耐有机溶剂的脂肪酶基因并实现高效表达是脂肪酶规模化应用的前提。本研究应用PCR技术首次从耐有机溶剂脂肪酶产生菌腐生葡萄球菌M36基因组DNA中扩增得到脂肪酶Ⅲ基因lip3(GenBank AccessionNo.FJ979867),其编码区长度为741bp,编码247个氨基酸,推测蛋白分子量大小为31.6kD。它与腐生葡萄球菌lip3推测的基因(GenBank AccessionNo.AP008934)只有83%的同源性。将该基因与大肠杆菌表达载体pET-DsbA连接,转化大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)获得重组菌株BL21(DE3)/pET-DsbA-lip3,在pH8、25oC条件下,OD600为1.0时用0.4mmol/LIPTG诱导12h酶活达到25.8U/mL。重组酶在甲醇、正己烷、异辛烷、正庚烷等有机溶剂中具有较好的耐性。lip3基因的克隆及在大肠杆菌中有效表达的研究为进一步进行基因工程改造和脂肪酶应用奠定了基础。
- 汤彦翀卢亚萍吕凤霞别小妹郭瑶陆兆新
- 关键词：腐生葡萄球菌基因克隆原核表达
- 高效产脂肪酶菌株Burkholderia cepacia C1产酶条件优化被引量：1
- 2010年
- 从油菜地土壤中分离到一株高效产脂肪酶菌株C1,经鉴定为Burkholderia cepacia。为了进一步提高C1脂肪酶的产量,对其产酶的发酵条件进行优化。首先采用单因子试验筛选出最佳碳源为麸皮,最佳氮源为蛋白胨。通过Plackett-Burman设计对发酵产酶的11个相关因子进行试验,筛选出3个主效因子,即蛋白胨质量浓度、橄榄油质量浓度及装液量。利用Box-Behnken试验设计和响应曲面法分析确定主效因子的最优水平,得出产脂肪酶菌株C1的最优产酶条件:1.50g/100mL麸皮、1.05g/100mL蛋白胨、1.63g/100mL橄榄油、0.2g/100mLK2HPO4、0.05g/100mLMgSO4、初始pH值为7.0、装液量为30mL。在优化条件下30℃,180r/min培养72h,脂肪酶活力达到89.65U/mL,比未优化前的28.50U/mL提高了2.15倍。
- 于玉凤陆兆新汪瑾陈舟舟卢亚萍
- 关键词：PLACKETT-BURMAN设计响应曲面发酵优化
- 高效产脂肪酶菌株C1的分离鉴定与酶学性质研究
- 2010年
- 采用平板筛选的方法从油菜地土壤中分离到一株高效产脂肪酶菌株C1,通过生理生化实验及16S rDNA序列分析鉴定为Burkholderia cepacia。研究其酶学性质,得出该菌脂肪酶的最适温度为65℃,最适pH为8.0,具有优良的耐温性和pH稳定性;对正己烷、乙醇耐性较好,对乙腈和乙酸耐性较差;K+、Mg2+对其酶活性有明显促进作用,Ca2+、Cu2+对其酶活性有严重抑制作用。
- 于玉凤陆兆新卢亚萍刘茜茜陈舟舟
- 关键词：脂肪酶酶学性质
- 普通变形杆菌位置非特异性脂肪酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2010年
- 【目的】本文拟克隆普通变形杆菌(Proteus vulgaris)脂肪酶基因,并实现其在大肠杆菌中的高效表达,并检验外源表达脂肪酶的催化性质。【方法】通过PCR方法,从P.vulgaris基因组中扩增其脂肪酶基因(PVL),并将其开放读码框区域连接到表达载体pET-DsbA及pMBP-P上,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达。我们对培养基组分及培养条件进行优化,以获得最高的酶产量。用Ni柱亲和层析法对所得重组脂肪酶进行纯化,并考察其酶学性质。【结果】PVL基因编码区含864个碱基,编码含287个氨基酸的酶蛋白。该序列在GenBank的登录号为FJ643627。PVL基因在大肠杆菌BL21内诱导表达的最佳条件为:在pH8.5的LB培养基中添加15g/L葡萄糖及200mg/L氨苄青霉素,在培养至OD600为1.2时加入100mg/LIPTG,15℃诱导15h,最高酶活达到192.2U/mL。通过亲和层析纯化了重组脂肪酶,得到一个约31kDa的蛋白条带。外源表达的脂肪酶的催化特性与野生菌脂肪酶相似,具有催化的位置非特异性,对长链脂肪酸酯亲和性最高。【结论】PVL基因在大肠杆菌中的高效表达为P.vulgaris脂肪酶的进一步研究与应用奠定基础。
- 卢亚萍顾菁汤彦翀吕凤霞别小妹陆兆新
- 关键词：PROTEUS基因克隆原核表达
- Burkholderia cepacia S31细菌高产位置非特异性脂肪酶的发酵条件优化被引量：3
- 2012年
- 从油脂污染的土壤中分离获得了1株高效产脂肪酶的细菌S31,经鉴定为Burkholderia cepacia(洋葱伯克霍尔德菌)。B.cepacia S31所产脂肪酶具有活性高、耐高温、耐有机溶剂和位置非特异性水解甘油三酯等优良特性。为了进一步提高S31菌株的产酶量,对该菌产酶的发酵条件进行优化。通过单因子试验筛选出最佳碳源为麸皮,最佳氮源为蛋白胨,最佳诱导物为Tween-80。通过对培养基各组分及外部培养条件因素的正交试验,确定S31菌产脂肪酶的摇瓶发酵最优条件为:以20 g.L-1麸皮、10 g.L-1蛋白胨、40 g.L-1Tween-80、0.5 g.L-1MgSO4和2 g.L-1K2HPO4为培养基(pH 7.0),250 mL三角瓶装40 mL培养基,3%接种量,30℃、180 r.min-1培养66 h可获得最理想的酶产量,达283.6 U.mL-1,比优化前提高2.73倍。
- 卢亚萍汪瑾张充吕凤霞别小妹陆兆新
- 关键词：BURKHOLDERIA脂肪酶发酵优化
