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鲢骨骼肌过敏原小清蛋白的分离纯化及多克隆抗体制备与应用被引量：9: 2010年; 小清蛋白是鱼类的主要过敏原,对该蛋白的研究不仅有利于过敏原检测方法的建立也可为低致敏性水产品的开发提供理论依据。通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Superdex75凝胶过滤等方法从鲢白色肉中纯化得到过敏原小清蛋白。Tricine-SDS-PAGE显示,在非还原条件下,该蛋白呈分子量分别为12ku、14ku、24ku的3个条带。而在还原条件下,仅有分子量为12ku的条带。Western-blotting分析表明,分子量为12ku、14ku和24ku的这3个条带都与小鼠抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)发生特异性反应,提示它们均为小清蛋白的不同形态。用纯化的小清蛋白制备多克隆抗体,经Protein A Sepharose亲和层析纯化得到高纯度的免疫球蛋白G(IgG)。Dot-blot检测发现,抗体稀释至1/51200时仍能与纯化的小清蛋白有显色反应。用制备的多克隆抗体进行Western-blotting分析,能特异地检测4种鱼(鲤、鲢、鲫、黄鳍鲷)中的小清蛋白。; 汪宁蔡秋凤刘光明陈昭华王锡昌苏文金曹敏杰; 关键词：小清蛋白纯化多克隆抗体

锯缘青蟹主要过敏原的纯化与鉴定被引量：9: 2010年; 以锯缘青蟹为研究对象,从免疫鉴定、分离纯化、抗体制备和免疫学分析等方面对其主要过敏原进行研究。首先利用过敏者血清的免疫印迹法,确定锯缘青蟹的主要过敏原为分子量约38kD的蛋白。然后通过制备丙酮粉、等电点沉淀、硫酸铵沉淀及加热处理对分子量为38kD的主要过敏蛋白进行了高度纯化。该蛋白的pI约为4.5,与虾的原肌球蛋白Pena1性质相近,证实了锯缘青蟹的主要过敏原为原肌球蛋白。通过免疫新西兰大白兔,制备了原肌球蛋白的抗血清,采用Protein A Sepharose亲和层析柱对动物抗体进行了纯化。该抗血清效价高,经4×105倍稀释后仍能与抗原进行反应。该抗体与甲壳类动物及软体动物的原肌球蛋白具有较强的免疫交叉反应,可用于食品过敏原检测。; 刘光明梁银龙翁凌苏文金黄园园曹敏杰; 关键词：锯缘青蟹原肌球蛋白纯化

酶水解海蟹加工下脚料制备调味品原料被引量：12: 2009年; 以海蟹加工下脚料为原料,通过单因素及正交试验,结合免疫检测、氨基酸及多肽分析等研究蛋白酶水解海蟹下脚料制备调味品原料。蛋白酶水解海蟹下脚料粉碎样的优化组合条件为温度45℃、加酶量4500U/g、时间5h;蛋白酶水解海蟹下脚料蒸煮浓缩液的优化组合条件为温度60℃、加酶量4000U/g、时间3h。免疫胶体金层析检测结果表明,水解液中原肌球蛋白被彻底分解,无过敏原性;水解液中多肽分子质量在78～24711Da之间占90.6%,水解液的蛋白含量13.32%,游离氨基酸总量51.75mg/g,7种人体必需氨基酸(色氨酸未检测)占49.12%,含量约25.42mg/g。柠檬酸与苹果酸之比为2:1时水解产物脱腥效果较优。喷雾干燥产品的得率为5.25%,冷冻干燥产品的得率为21.17%。所制备的低过敏原性海蟹调味品原料(酶解蛋白液和蛋白粉)可添加在各类食品中。; 刘光明曹敏杰袁静静翁凌方忠兴苏文金; 关键词：蛋白酶水解免疫检测原肌球蛋白

淡水鱼类主要过敏原的模拟肠胃液消化被引量：6: 2010年; 采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)方法,通过模拟肠胃液消化实验分析淡水鱼类肌肉中主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)的消化特性。Tricine-SDS-PAGE结果显示,纯化的鲫、鲢PV在模拟胃液消化实验中反应5～30min明显分解,而在模拟肠液消化实验中4h仍未见明显分解。鲫、鲢肌浆蛋白在模拟胃液消化实验中,肌浆蛋白中的PV比纯化PV的分解时间明显延长,消化30～60min仍未被完全分解,而其它肌浆蛋白消化10～30min就完全分解。采用抗PV多克隆抗体的Western-blot显示,该抗体能特异识别PV及其降解产物。研究结果表明,淡水鱼类PV相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而胃蛋白酶能较好地分解该过敏原。; 刘光明黄园园蔡秋凤翁凌苏文金曹敏杰; 关键词：小清蛋白

鱼类肌肉中过敏蛋白的检测与分析被引量：9: 2008年; 采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western blot）方法，分别对淡水鱼（鲤鱼、鲢鱼、鲫鱼）和海水鱼（黄鳍鲷、金鲳）等5种鱼肌肉，鳕鱼丸、鲢鱼丸两种鱼糜制品以及鲮鱼、沙丁鱼、鳗鱼3种鱼罐头中过敏原（小清蛋白）的含量进行了分析．结果显示，应用抗蛙小清蛋白单克隆抗体（PARV-19）可以分别在5种鱼白色肉和红色肉的肌浆蛋白中检测到特异性杂交条带，其分子量大小约为12-14．4ku，且白色肉中的含量明显高于红色肉．但在5种鱼的肌原纤维蛋白、2种鱼糜制品和3种鱼罐头中，均未检测到小清蛋白．因此得到结论，无论是淡水鱼还是海水鱼，小清蛋白主要存在于白色肉肌浆蛋白中；经过加工的鱼制品中小清蛋白的含量有很大程度的降低．; 汪宁王锡昌蔡秋凤刘光明曹敏杰; 关键词：小清蛋白鱼糜 SDS-PAGE WESTERN BLOT

鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化被引量：9: 2010年; 首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原（胶原蛋白）,依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液（胃蛋白酶）消化15min出现较为明显的降解,消化1h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰蛋白酶）消化30min出现较为明显的降解,消化3h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰凝乳蛋白酶）消化1～4h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.; 刘光明钟永嘉曹敏杰蔡秋凤张凌晶苏文金; 关键词：鲤鱼胶原蛋白 SDS-PAGE 免疫印迹

锯缘青蟹原肌球蛋白过敏者血清的筛选被引量：2: 2010年; 为了解集美大学学生的饮食及食物过敏情况,对在校学生进行了问卷调查.调查共分发了4 000份,主要涉及水产品食物过敏的种类、过敏症状等.调查收到有效问卷3 890份,应答率为97.3%.自诉过敏的学生为1 149人,约占29.5%.对水产品食物过敏的有545人(占自诉过敏的47.4%),其中31例经ELISA检测,IgE为对蟹的原肌球蛋白呈阳性反应(占水产品食物过敏的5.7%,占蟹过敏的11.3%).男女之间无统计学差异.自诉对蟹、虾、贝、鱼等水产品的过敏症状相似,多为皮疹和皮肤瘙痒.调查结果表明,蟹、虾、贝类和鱼是主要的水产品过敏食物.食物过敏症患者血清食物过敏原特异性IgE升高明显,采用ELISA检测法,方便,安全,准确,对临床确诊与防治食物过敏症有重要意义.; 李兵刘光明蔡秋凤黄园园苏文金曹敏杰; 关键词：食物过敏水产品 ELISA

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福建省自然科学基金(2008J0067)