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耐有机溶剂蛋白酶高产菌Pseudomonas aeruginosa PT121的发酵条件: 2009年; 优化了耐有机溶剂蛋白酶产生菌株Pseudomonas aeruginosa PT121的产酶发酵条件。通过单因子试验探索了碳源、有机氮源对菌株发酵产酶的影响;通过正交试验对甘油、果糖、胰蛋白胨进行了水平组合优化。正交试验的方差分析表明,培养基中各成分显著性排列顺序为:胰蛋白胨>甘油>果糖。采用优化后培养基发酵72h,发酵液蛋白酶酶活达到12758U/mL,比优化前提高了6.3倍,为现有国内外报道中耐有机溶剂蛋白酶最高发酵产量。; 许家兴唐啸宇张赣道何冰芳; 关键词：PSEUDOMONAS AERUGINOSA 正交设计发酵优化

耐有机溶剂蛋白酶产生菌Bacillus cereus WQ9-2发酵条件及酶学性质: 2012年; 以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus WQ9-2为产耐有机溶剂蛋白酶的出发菌株,对其产酶条件进行优化并初步研究了其酶学性质。在单因素实验基础上,通过中心复合实验确定了产酶的最佳发酵条件为酵母粉8 g/L,葡萄糖17 g/L,KH2PO40.5 g/L,无水MgSO40.3 g/L,CaCl20.5 g/L,NaCl 1.0 g/L;pH 7.5。实验中发现采用低温发酵能大大缩短菌体产酶周期;通过优化发酵时间由最初84 h缩短到48 h,最高比酶活为3 921 U/mL。金属离子螯合剂1,10-菲罗啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶有较强的抑制作用,表明该酶可能为金属蛋白酶;Ca2+对该酶的活力及热稳定性有显著提高作用。; 许家兴李振东承龙飞何冰芳; 关键词：BACILLUS CEREUS 酶学性质

新型耐有机溶剂蛋白酶产生菌的筛选及粗酶性质研究: 天然有机溶剂耐受性蛋白酶为近年来发现的一类新型蛋白酶，具有在有机溶剂中稳定的天然特性。这类蛋白酶通常由耐有机溶剂极端微生物筛选获得。耐有机溶剂酶的发现及酶在有机介质中的催化作用的相关研究，大大拓宽了生物催化剂的应用范围。...; 万茂华庄宇周云何冰芳; 关键词：蛋白酶 SERRATIA

溶剂稳定性蛋白酶产生菌Bacillus licheniformis YP1的发酵优化: 2008年; 溶剂稳定性蛋白酶产生菌Bacillus licheniformisYP1分离自油田土样。考察了碳源、氮源、金属离子等营养因素对YP1菌株发酵产溶剂稳定性蛋白酶的影响。YP1菌株发酵产胞外蛋白酶的最佳碳源为淀粉,果糖、甘露糖和乳糖显著抑制产酶;最佳氮源为酵母膏,干酪素、酵母粉和牛肉膏促进产酶,玉米浆和尿素显著抑制产酶。Mn2+可以显著促进酶活,Mg2+可以促进产酶,在初步优化的培养条件下,YP1菌株的胞外蛋白酶产量达980 U。; 李霜陈加罡何小丹何冰芳; 关键词：BACILLUS LICHENIFORMIS

溶剂稳定性蛋白酶产生菌的筛选和鉴定被引量：5: 2007年; 自油污土样等样品中分离获得一株具有产胞外溶剂稳定性蛋白酶的耐有机溶剂极端微生物,经BIOLOG系统鉴定及16S rDNA序列(GenBank,EF105377)分析,该菌株为Bacillus licheniformis YP1。该菌株能耐受中浓度盐、强碱性环境(pH12)及多种不同浓度的有机溶剂,但对多种抗生素敏感。在YP1产蛋白酶发酵过程中添加各种有机溶剂结果表明,丙酮虽抑制了菌体生物量的生长却促进了单位菌体的蛋白酶分泌,而长链烷醇如辛醇、十二醇等能强烈抑制该蛋白酶的分泌。该菌株所产蛋白酶经11种50%(V/V)有机溶剂处理后均能保留高活力。该溶剂稳定性蛋白酶在有机相生物催化等领域具有良好的应用前景。; 李霜徐娴羊亚平何冰芳; 关键词：极端微生物

烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌YP1产胞外蛋白酶的影响被引量：1: 2008年; 考察了添加5%(V/V)浓度的正庚烷、正辛烷、正癸烷、十二烷、十四烷、十六烷等烷烃溶剂对耐有机溶剂极端微生物地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)YP1的生长及产胞外蛋白酶的影响。结果表明5%(V/V)浓度的各种烷烃溶剂对YP1蛋白酶的稳定性及菌体生物量均无显著影响,正庚烷、正辛烷、正癸烷等溶剂显著抑制YP1产蛋白酶,而十二烷、十四烷、十六烷能提高YP1产蛋白酶1倍以上。发酵液中十四烷的浓度(1%-8%,V/V)与蛋白酶的活力呈正相关性,添加十四烷后发酵过程中蛋白酶活力的显著增加出现在菌体生长的对数后期。培养过程中添加十四烷能导致YP1菌体形态显著变小。首次报道了烷烃溶剂对极端微生物产蛋白酶的影响。; 李霜唐啸宇潘瑶何冰芳; 关键词：极端微生物烷烃蛋白酶

耐有机溶剂蛋白酶产生菌PT121基因的克隆及异源表达: 蛋白酶催化的最普通的反应是水解蛋白质中的肽键，而在有机相中能进行水解的逆反应，可表现为酰胺酶活力或酯酶活力。利用蛋白酶在有机相中合成肽的衍生物，不仅使得底物中的氨基酸部分侧链不需保护，而且避免了在化学法合成中存在的产物消...; 何小丹李秀婷吴光耀何冰芳; 关键词：大肠杆菌枯草杆菌

Pseudomonas aeruginosa PT121发酵条件优化与耐有机溶剂蛋白酶的高效生产: 近些年，随着酶类耐有机溶剂性能的发现，蛋白酶在合成领域中的应用得到了进一步拓展。在有机溶剂中，耐有机溶剂酶催化的反应具有提高有机底物溶解度、减少不良的副反应等众多优点。目前为止有机相酶催化多处于实验研究阶段，离工业化还有...; 许家兴李平陈超何冰芳; 关键词：PSEUDOMONAS AERUGINOSA 正交设计

地衣芽孢杆菌YP1A耐有机溶剂蛋白酶基因的克隆与功能表达被引量：5: 2009年; 根据B.licheniformisYP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B.licheniformisYP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因(1 264 bp)包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框(ORF),ORF包括信号肽、前肽及编码254个氨基酸的成熟肽序列。相关基因分析表明,YP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因与地衣芽孢杆菌ATCC14580的碱性蛋白酶基因仅有6个氨基酸残基差异。构建2种含YP1A碱性蛋白酶CDS的组成型穿梭表达载体pHY/aprYP与pHY/aprP43,前者采用YP1A蛋白酶自带的启动子,后者则采用来自于质粒pP43NMK的P43强启动子。利用这2种表达载体在枯草芽孢杆菌WB800中成功进行蛋白酶的功能表达,其中P43强启动子的表达能力明显优于碱性蛋白酶自带的启动子,表达的蛋白酶比酶活为395 U/mL。重组菌表达的碱性蛋白酶在体积分数50%的亲水及疏水有机溶剂中表现出了很好的耐受性,验证了克隆基因为地衣芽孢杆菌YP1A的高强度耐有机溶剂碱性蛋白酶基因。; 何小丹李霜孙蓓蓓何冰芳; 关键词：克隆

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国家高技术研究发展计划(2006AA02Z202)