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不同龋敏感性儿童口腔变异链球菌信号分子AI-2活性检测: 2022年; 目的探索不同龋敏感性儿童口腔变异链球菌(streptococcus mutans,S.mutans)临床分离株的群体感应信号分子AI-2(autoinducer-2,AI-2)的表达差异。方法以不同龋敏感性儿童口腔分离得到的变异链球菌株(高龋株、中龋株、无龋株)为实验对象,以哈维弧菌BB170(vibrio harveyi BB170)检测各组菌株AI-2的产量,通过实时荧光定量核酸检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,RTqPCR)测定高龋株在不同生长时期LuxS与pfs基因的表达量情况,分析AI-2的合成与LuxS、pfs基因的关系。结果各组菌株均能产生AI-2,其中以高龋株产量最多;高龋株在生长的不同时期均有AI-2的表达,在迟缓期、对数前期表达量较少,到对数后期达到峰值(19.00±0.90,P<0.05),为阴性对照的19倍,至稳定期开始下降。RT-qPCR结果显示,高龋株在对数后期LuxS、pfs基因的表达量最高,分别为10.47±0.35、7.22±0.06;LuxS、pfs基因的转录水平与AI-2的产生保持一致,但AI-2的产生与LuxS的相关性更高(P<0.05)。结论致龋敏感性越高的儿童口腔变异链球菌临床分离株产生的信号分子AI-2越多;且AI-2活性与LuxS基因转录水平相关性较pfs基因转录水平相关性高。; 陈岚韩林秀吴菊徐皑刘兴容; 关键词：变异链球菌 LUXS PFS

高温需要蛋白A对乳牙变异链球菌果糖基转移酶表达的影响: 2020年; 目的:研究乳牙高致龋性变异链球菌(streptococcus mutans,S.mutans)高温需要蛋白A(high temperature requirement serine proteinase A,HtrA)基因缺陷株和HtrA高毒力株在体外非应激环境中的果糖基转移酶(fructosyltransferase,FTF)表达能力的差异。方法:选用课题前期已获得的HtrA高毒力株及以此构建的HtrA基因缺陷株、S.mutans国际标准株UA159在脑心浸出液肉汤(brain heart infusion broth,BHI)培养基培养16 h后,用实时荧光定量核酸扩增检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,RT-qPCR),检测三菌株FTF基因的扩增情况。用相对定量分析-2-△△Ct法计算并比较HtrA基因缺陷株与HtrA高毒力株和UA159标准株FTF基因的相对表达能力的差异。结果:HtrA高毒力株的FTF基因的表达量约是HtrA基因缺陷株23.588倍;UA159标准株的FTF基因的表达量约是HtrA基因缺陷株10.556倍。结论:乳牙变异链球菌的FTF的表达受到HtrA的调控。; 毛玲杨维虹徐仕珍王玲韩林秀刘兴容; 关键词：乳牙龋病变异链球菌果糖基转移酶

不同条件下臭氧溶液对牙周致病菌的体外抑制作用: 2022年; 目的探讨小型电解式臭氧机制备的臭氧溶液在不同条件下对3种牙周致病菌的体外抑制作用。方法以碘量法检测臭氧机产生的臭氧溶液浓度,通过定量悬液杀菌法测定其在不同浓度(1.12、1.96、2.85 mg/L)、不同温度(10、15、20℃)下对牙龈卟啉单胞菌(P.g)、黏性放线菌(A.v)和具核梭杆菌(F.n)处理不同时间(30、60 s)后的菌落总数,分析其抑菌效果。结果1.12、1.96、2.85 mg/L 3种浓度的臭氧溶液在不同温度及作用时间下对P.g、A.v和F.n均有不同程度的抑制作用(P<0.05);当温度相同时,作用浓度越高,抑菌效果越强。当温度为20℃、浓度为2.85 mg/L,作用30 s时对P.g抑制作用最强(82.35%),作用60 s时对F.n作用最强(86.36%);当温度为15℃、浓度为2.85 mg/L,作用60 s时对A.v抑菌作用最强(81.25%)。结论小型电解式臭氧机所制备的3种不同浓度的臭氧溶液在不同温度下对3种牙周致病菌均有明显的抑菌效果,但抑菌敏感性不一致。; 陈岚杨洋刘兴容徐皑; 关键词：臭氧溶液牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌黏性放线菌具核梭杆菌

HtrA对乳牙高致龋性变异链球菌生物膜形成的影响: 2020年; 目的研究乳牙高致龋性变异链球菌(S.mutans)高温需要蛋白A(HtrA)基因缺陷株和HtrA高毒力株在体外非应激环境中生物膜形成的差异。方法用分光光度计比浊法测定前期获得的乳牙高致龋性S.mutans HtrA高毒力株、基因缺陷株和S.mutans国际标准株UA159的生长情况;体外构建三菌株生物膜模型,扫描电镜下观察生物膜形态结构;结晶紫染色实验评估形成生物膜的量。结果3组S.mutans增殖的各个阶段,与HtrA基因缺陷株相比,HtrA高毒力株与UA159标准株的细菌浓度(OD_(600)值)更高(P<0.05)。扫描电镜下观察HtrA高毒力株密度最大,UA159标准株次之,HtrA缺陷株密度最低。与HtrA基因缺陷株相比,生物膜结晶紫半定量测定4、8、12、24 h HtrA高毒力株OD_(600)值差异均有统计学意义(P<0.001)。结论S.mutans生物膜的形成受到HtrA的影响,HtrA基因的缺失会降低细菌的黏附和减缓生物膜的形成。; 徐仕珍杨维虹毛玲刘兴容; 关键词：变异链球菌生物膜

HtrA对乳牙高致龋性变异链球菌GTFs表达及活性的影响被引量：3: 2016年; 目的:研究乳牙高致龋性变异链球菌(S.mutans)高温需要A蛋白(HtrA)基因缺陷株和HtrA高毒力株在体外非应激环境中的葡萄糖基转移酶(GTFs)表达能力及其生物学活性的差异。方法:选用前期已获得的乳牙高致龋性S.mutans HtrA基因缺陷株和高毒力株(HtrA高毒力株和HtrA基因缺陷株),在BHI培养基培养至指数期第10 h后。以实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测2菌株gtfB,gtfC,gtfD的表达情况。提取蛋白,以蒽酮硫酸法检测其生物学活性,以蛋白免疫印迹(Western Blot)检测其表达量。结果:GTFs蛋白和基因在乳牙S.mutans HtrA基因缺陷株中的表达高于HtrA高毒力株但其生物学活性低于高毒力株。结论:HtrA基因在乳牙S.mutans GTFs的分泌过程中起重要的调控作用。; 李政朱虹倩谢茹李菲菲刘兴容; 关键词：变异链球菌致龋性

不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株与HtrA关系的研究被引量：4: 2013年; 目的探讨不同龋敏感儿童口腔变异链球菌HtrA mRNA和蛋白质的表达情况与乳牙龋坏程度和HtrA的关系。方法以高龋、中龋和无龋儿童口腔中分离得到的变异链球菌为实验菌株,复苏,增菌,分离纯化核酸,采用逆转录PCR(RT-PCR)法,提取变异链球菌临床分离株总RNA,凝胶电泳检测RNA完整性,合成cDNA,PCR扩增,将扩增产物凝胶成像系统下观察记录结果,将目的基因HtrA及内参的电泳图像利用凝胶定量分析软件Gel-Pro analyzer 4.0进行灰度扫描,分析计算基因相对表达值;采用蛋白质印迹(Western blot)法,验证变异链球菌临床分离株总蛋白,结果用Bio-Rad凝胶摄像分析系统扫描入计算机中,凝胶定量分析软件Quantity One 4.4.0分析其灰度值,计算蛋白的相对表达水平。结果高龋、中龋及无龋儿童口腔变异链球菌临床分离株HtrA mRNA的表达和HtrA蛋白的表达均存在差异,从高到低为高龋组、中龋组、无龋组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离菌株HtrA mRNA的表达和HtrA蛋白的表达均存在差异,龋敏感性越高,HtrA mRNA的表达和HtrA蛋白的表达越高。; 杨江华郭夕源王光平李明霞刘兴容; 关键词：龋齿乳牙变异链球菌 HTRA

HtrA对乳牙变异链球菌产酸、黏附的体外研究被引量：2: 2019年; 目的:探讨HtrA对乳牙变异链球菌产酸、黏附的影响。方法:选用课题组前期筛选并鉴定的乳牙变异链球菌HtrA高毒力株和构建的HtrA基因缺陷株,测定这两组菌株分别在不同pH值的BHI液体培养基中培养48 h后pH值的变化;由荧光标记的乳牙变异链球菌HtrA高毒力株和HtrA基因缺陷株,与被唾液包被的羟基磷灰石共同孵育,测定羟基磷灰石沉淀的荧光值,比较黏附率的差异。结果:在pH值为6.5、7.0时,两组菌株产酸能力的差异无统计学意义(P>0.05);在pH值为5.0、5.5、6.0时,HtrA高毒力株产酸能力强于HtrA缺陷株,差异具有统计学意义(P<0.05);在pH值4.5时,两组菌株产酸能力均受到明显抑制,几乎不产酸,差异无统计学意义(P>0.05)。HtrA缺陷株在唾液包被的羟基磷灰石表面的黏附率[(39.33±1.61)%]低于HtrA高毒力株[(54.67±1.38)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HtrA基因的缺陷影响了乳牙变异链球菌非应激状态下的生长能力,并且降低了它的产酸、黏附能力。; 王玲刘瑶韩林秀刘兴容; 关键词：乳牙变异链球菌 HTRA 产酸

乳牙高毒力变异链球菌HtrA缺陷株的构建及转化力的研究被引量：4: 2015年; 目的:构建乳牙高毒力变异链球菌HtrA基因缺陷株(简称HtrA缺陷株),比较HtrA缺陷株和高毒力株的转化力。方法:将乳牙变异链球菌HtrA高毒力菌株复苏,厌氧培养,应用基因同源重组技术进行HtrA基因缺陷株的构建。以含有HtrA基因的变异链球菌标准株DNA作为参照进行PCR鉴定。将乳牙变异链球菌HtrA高毒力株与HtrA缺陷菌株分别在TPY液体培养基中增菌,厌氧培养,以菌落计数来比较二者的转化力。结果:凝胶自动成像分析结果显示,HtrA缺陷株在500 bp未出现HtrA基因片段的特异性电泳条带,而在710、1 200、1 100 bp处分别出现了红霉素抗性基因片段、HtrA基因上游引物序列合并红霉素抗性基因引物HtrAUF/P1以及HtrA基因下游引物序列合并红霉素抗性基因引物HtrAUR/P2的特异性条带。而HtrA高毒力株的表现则相反。转化力检测结果显示:6、9、12、24、48 h,高毒力株的菌落数量均明显多于HtrA基因缺陷株(P<0.05)。结论:通过基因重组等方法可以将变异链球菌高毒力株中的Htr A基因敲除,构建高毒力变异链球菌Htr A基因缺陷株;变异链球菌高毒力株的转化力高于HtrA基因缺陷株,提示HtrA与变异链球菌的致龋性有关。; 张宏柱黄萍刘兴容; 关键词：变异链球菌毒力因子 HTRA 基因重组

HtrA对乳牙变异链球菌高毒力株gbpC表达的影响: 2020年; 目的:在体外非应激条件下,研究乳牙变异链球菌(streptococcus mutans,S.mutans)高温需要A蛋白(high temperature requirement serine proteinase A,HtrA)基因缺陷株和HtrA高毒力株的葡聚糖结合蛋白C(glucan-binding protein C,gbpC)表达能力的差异,探讨HtrA基因对gbpC表达的影响。方法:选用前期已获得的乳牙HtrA高毒力株和高致龋性HtrA基因缺陷株,在BHI培养基培养至指数期第12 h后进行细菌革兰染色及生化鉴定。以qPCR和Western Blot分别检测两组S.mutans菌株中gbpC基因和蛋白的表达情况。结果:HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的gbpC基因和蛋白表达量。结论:S.mutans gbpC的表达会受HtrA的影响。HtrA基因可能是S.mutans高致龋性的重要因素之一。; 韩林秀王望王玲杨维虹刘瑶刘兴容; 关键词：变异链球菌

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四川省卫生厅科研基金(100247)

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