中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP20917)
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 相关作者：吴敬吴丹陈坚陈晟纪丽萍更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 不同宿主来源的α-环糊精葡萄糖基转移酶分离纯化及化学修饰提高其热稳定性被引量：3
- 2013年
- 研究了不同宿主来源的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)经化学修饰后的热稳定变化,首先通过阴离子交换和疏水色谱分离纯化了来源于Paenibacillus macerans的天然α-CGT酶以及来源于Escherichia coli和Bacillus subtilis的重组α-CGT酶,再将α-CGT酶置于50℃水浴30min测残酶活,发现α-CGT酶残酶活分别为28%,30%和25%。首次采用戊二醛交联的方法研究了化学修饰对提高重组α-CGT酶稳定性的影响,E.coli重组表达的α-CGT酶经戊二醛交联成大分子聚合物后,与对照相比50℃水浴30 min后酶的热稳定性明显提高,水浴后仍有78%的酶活,酶活保有率相对未交联的酶提高了2.9倍。
- 吴丹郑贤良吴敬
- 关键词：酪蛋白补铁
- 麦芽糖诱导软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的表达
- 2010年
- 通过PCR扩增软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶基因,将基因片段克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pGJ103中,转化枯草杆菌WB600得基因工程菌进行外源表达。在1.5%的麦芽糖初始发酵培养基上摇瓶培养,48 h后重组枯草杆菌产酶活性为6.1U/ml。通过单因素分析和响应面分析对重组枯草杆菌产CGT酶摇瓶发酵条件进行优化。分析得到培养基关键组分麦芽糖,玉米淀粉和酵母粉三者最佳浓度分别为:15.5g/L,13g/L和20g/L。在此条件下,摇瓶培养36h后α-CGT酶活性为17.6U/m l,5L罐分批发酵30h后酶活达到20U/ml(水解活性为1.4×104IU/ml)。
- 张佳瑜吴丹陈晟陈坚吴敬
- 关键词：枯草杆菌响应面优化发酵
- 复合与合成培养基对大肠杆菌胞外生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的影响被引量：4
- 2010年
- 为实现来源于Paenibacillus macerans JFB05-01的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)的高效胞外表达,以含分泌型信号肽OmpA的大肠杆菌E.coliBL21(DE3){pET-20b(+)/α-cgt}为研究对象,比较了其在不同诱导条件下复合与合成培养基中生长产酶的规律。结果表明在添加甘氨酸的条件下采用合成培养基,以0.8g/L/h的乳糖进行流加诱导所得的胞外酶活和生产强度最高。在该条件下发酵30小时后胞外α-CGT酶的环化活性达113.0U/ml(水解活性为79100.0IU/ml),是复合培养基胞外产酶的2.3倍,完全满足工业化生产的需求。
- 程婧吴丹陈晟吴敬陈坚
- 关键词：PAENIBACILLUSΑ-环糊精葡萄糖基转移酶大肠杆菌合成培养基
- 重组大肠杆菌产γ-环糊精葡萄糖基转移酶的摇瓶发酵优化被引量：4
- 2011年
- 为了实现来源于碱性芽孢杆菌Alkalophilic Bacillus clarkii 7364的γ-环糊精葡萄糖基转移酶的高效胞外表达,对OmpA信号肽介导的E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-γcgt基因工程菌进行发酵培养基及发酵条件的优化,并进行正交试验,获得最优培养基:甘油5g/L、蛋白胨6g/L、酵母膏24g/L、钙离子6mmol/L、镁离子2mmol/L、甘氨酸0.75%、PO43-0.1mol/L;在此基础上最适发酵条件:pH 6.5、25℃培养、装液量30ml/250ml、转速220r/min、0.02%SDS、在发酵10h时利用5g/L乳糖进行诱导,使得酶活从初始的5189.2U/ml提高到20268.8U/ml。研究结果得到高效表达的培养条件,为实现该酶的工业化应用打下了基础。
- 纪丽萍吴丹吴敬陈坚
- 关键词：重组大肠杆菌环糊精葡萄糖基转移酶发酵优化
- 亚位点7处突变对碱性芽胞杆菌CGT酶产物特异性的影响被引量：2
- 2012年
- 为了研究来源于碱性芽胞杆菌的γ-环糊精葡萄糖基转移酶(CGT酶)具有较高产物特异性的作用机理,对其氨基酸序列和模拟结构进行了分析,确定其亚位点7处氨基酸的缺失可能影响其产物特异性。运用重叠PCR的方法,在其亚位点7处添加缺失的6个氨基酸,造成插入突变。将突变基因与pET-20b(+)连接并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以可溶性淀粉为底物进行酶转化,HPLC分析转化产物中的环糊精含量。结果表明,相对于野生型γ-CGT酶,突变酶转化生成的3种环糊精中,γ-环糊精所占的比例从76.0%降至12.5%,α-、β-环糊精分别从8.7%和15.2%提高至37.5%和50%。分析其可能机理为:与α-、β-CGT酶相比,野生型γ-CGT酶的亚位点7处缺失6个氨基酸,该构象为葡萄糖的结合提供了更大的空间,从而更适合γ-环糊精的生成;而在其亚位点7处插入6个氨基酸,造成插入突变后,葡萄糖链结合的空间变小,这种构象不利于γ-环糊精的生成。
- 杨冬田靖斐陈晟吴敬
- 关键词：环糊精环糊精葡萄糖基转移酶突变
