国家自然科学基金(30570088)
- 作品数：10 被引量：30H指数：3
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- OmpR与PhoP高渗应激下交叉调节伤寒沙门菌基因表达
- 2010年
- 为了探寻OmpR和PhoP之间的交叉调节关系,构建了ompR-phoP双缺陷变异株,运用基因芯片分析技术比较了伤寒沙门菌ompR缺陷株、phoP缺陷株及ompR-phoP双缺陷株之间基因表达谱的差异.结果显示OmpR与PhoP共同激活11个基因的转录,主要为外膜孔蛋白相关基因、脂多糖修饰相关基因等,两者在调节特定的膜蛋白、孔蛋白及表面结构成分的表达水平方面发挥着协同作用,OmpR与PhoP对未知功能蛋白基因t0563、t0564也具有协同激活效应,值得进一步关注.OmpR与PhoP共同抑制nanT的转录,阻止唾液酸的转运.另外,ompR缺陷株和phoP缺陷株中未见变化,而ompR-phoP双缺陷变异株中差异表达基因也可能是OmpR和PhoP的共同调节元,但需要进一步验证.
- 生秀梅徐顺高张海方许化溪黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌OMPRPHOP基因表达调节
- 伤寒沙门菌rpoE基因缺陷变异株的制备及其生存能力被引量：4
- 2009年
- 目的为深入研究rpoE基因在伤寒沙门菌侵袭致病中的作用,制备rpoE基因缺陷变异株;观察rpoE基因缺陷变异株在应激条件下的生存能力。方法根据伤寒沙门菌rpoE基因序列,设计PCR特异性引物,制备rpoE基因缺陷性同源性核苷酸片段导入自杀质粒PGMB151后再导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组,用PCR观察重组现象;绘制生长曲线,对比rpoE基因缺陷变异株与野生株在应激条件下的生存情况。结果PCR及序列分析证实,缺陷变异株的rpoE基因缺失288个碱基;生长曲线提示rpoE基因缺陷变异株在氧、酸、高渗应激条件下生存能力明显低于野生株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了伤寒沙门菌rpoE基因缺陷株,并发现在氧、酸、高渗应激条件下其生存能力明显降低,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。
- 杜鸿邹昕夏秋风高宇琳黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌同源重组
- 伤寒沙门菌Mig-14蛋白部分密码子优化后的表达及多克隆抗体制备
- 2014年
- 通过原核表达Mig-14蛋白,制备相应多克隆抗体,用于后续Mig-14分子功能研究,为探寻Mig-14拮抗PB分子机制奠定基础.经密码子偏爱性分析显示mig-14基因含有8%的稀有密码子,综合考虑密码子偏好性、GC含量、限制性酶切位点等影响因素对密码子进行优化,重新合成mig-14基因,PCR获得周质空间部分,克隆至表达载体pET22b(+),并转入大肠埃希菌JM109中表达,KCl染色后切胶纯化的蛋白作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体.Mig-14蛋白多克隆抗体的制备为后续免疫共沉淀研究Mig-14的作用蛋白奠定了基础.
- 张红生秀梅徐顺高黄新祥许化溪
- 关键词：伤寒沙门菌密码子优化多克隆抗体
- 伤寒沙门菌fljB∶∶lacZ变异株的制备被引量：2
- 2008年
- 目的:为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表达调节机制,建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)插入变异株。方法:采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物,用PCR扩增获得fljB基因的上、下游同源性DNA片段,并与用KpnⅠ和SalⅠ酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体(pSV-β-galactosidase vector)的片段定向连接,将连接片段克隆至自杀质粒pGMB151,再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌,在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果:经筛选获得阳性克隆,经PCR及序列分析证实,fljB基因中的763 bp被3550 bp的lacZ片段替代。结论:成功构建伤寒沙门菌flj∶∶lacZ突变株,为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。
- 朱超望茅凌翔徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌Β-半乳糖苷酶基因基因融合
- 伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株的制备被引量：18
- 2007年
- 目的:为深入研究伤寒沙门菌调节因子phoP的功能,制备伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌phoP基因序列,设计PCR特异性引物,并在5′末端加接酶BglII位点,PCR扩增phoP基因上、下游片段后,用BglII消化,再定向连接成phoP基因的缺损性同源性核苷酸片段。将此片段胶回收后并导入自杀质粒pG-MB151的BamHI位点,将阳性质粒用电转化导入伤寒沙门菌野生株,进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为phoP基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的phoP基因缺失297个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌phoP基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌中的功能奠定了基础。
- 茅凌翔朱超望许化溪黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌PHOP同源重组
- 伤寒沙门菌fljA样基因表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的:进一步明确二相伤寒沙门菌鞭毛抗原表达调节机制,系统分析伤寒沙门菌fljA样基因功能,构建含fljA样基因的表达载体并验证其表达。方法:根据fljA样基因两端序列设计引物,以z66抗原阳性伤寒沙门菌G IFU10007基因组为模板,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后,重组体转化至大肠杆菌JM109中诱导培养,并通过RT-PCR观察fljA样基因表达情况。结果:基因克隆和序列分析结果显示伤寒沙门菌fljA样基因被成功导入载体pET22b,RT-PCR结果提示大肠杆菌JM109可利用此重组载体进行fljA样基因表达。结论:成功获得能在大肠埃希菌中表达伤寒沙门菌fljA样基因的载体。
- 周丽萍邹昕张伟利徐顺高许化溪黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌基因表达
- mig-14对伤寒沙门菌在高渗应激早期基因表达的调节被引量：2
- 2009年
- 目的:探查伤寒沙门菌mig-14在高渗应激下对若干基因表达的调节作用。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌mig-14基因缺陷变异株,用基因芯片分析高渗应激早期野生株和mig-14缺陷株基因表达差异,并对部分结果采用实时荧光定量PCR进行验证。结果:成功制备伤寒沙门菌mig-14缺陷株,高渗应激早期mig-14变异株与野生株相比有77个基因表达下调和72个基因表达上调。结论:mig-14可能是一种调节基因,主要参与调节细菌的物质和能量代谢。
- 夏秋风邹昕杜鸿高宇琳黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌基因芯片分析
- LuxS/AI-2对伤寒沙门菌基因表达的调节被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨伤寒沙门菌luxS基因在葡萄糖存在下对细菌对数生长中期基因表达调控的影响。方法:应用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌luxS基因缺陷变异株;比较野生株与缺陷株的生长情况及动力差异;用哈氏弧菌BB170作为报告菌株检测不同时期野生株与缺陷株的生物发光;利用伤寒沙门菌全基因组芯片技术,比较在葡萄糖存在下伤寒沙门菌野生株和luxS基因缺陷变异株的对数生长中期基因表达谱差异,并选择部分差异表达基因进行实时定量PCR验证。结果:经PCR及序列分析证实,伤寒沙门菌luxS基因缺陷变异株制备成功;在葡萄糖存在下野生株发光均比无葡萄糖时强,在对数生长中期时AI-2产生的荧光最强,而luxS缺陷株不发光;luxS不影响细菌生长但影响细菌的动力;基因表达谱比较分析结果表明,与野生株相比,luxS缺陷株有47个基因表达上调,27个基因表达下调;实时定量PCR结果与芯片分析一致。结论:伤寒沙门菌中luxS基因能参与信号分子AI-2的合成,且LuxS/AI-2在细菌对数生长中期的基因表达调控中发挥重要作用。
- 罗哲王敏杜鸿王菲孟彦辰倪斌徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌LUXS生物发光基因芯片
- PmrA对伤寒沙门菌高渗应激后期基因表达调节初探
- 2009年
- 目的:探讨伤寒沙门菌调节因子PmrA在高渗应激后期对基因表达调节的影响。方法:应用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌pmrA基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片分析技术,比较伤寒沙门菌野生株和pmrA基因缺陷变异株在高渗应激后期的基因表达谱差异,并选择部分差异表达基因进行RT-RCR验证。结果:经PCR及序列分析证实,伤寒沙门菌pmrA基因缺陷变异株制备成功;基因表达谱比较分析结果表明伤寒沙门菌pmrA基因缺陷变异株在高渗应激后期有81个基因表达上调,有22个基因表达下调。结论:PmrA在伤寒沙门菌高渗应激后期的基因表达调节中发挥重要作用。
- 高宇琳张海方邹昕杜鸿夏秋风生秀梅徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌基因芯片
- 伤寒沙门菌调节因子UhpA的功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨伤寒沙门菌调节因子UhpA的功能。方法:用载体pBAD介导回补uhpA至伤寒沙门菌uhpA基因缺陷变异株,用qRT-PCR观察cysM和treB基因表达,用表达载体pET-22b原核表达UhpA蛋白,用凝胶阻滞试验观察UhpA蛋白与cysM和treB启动子区域DNA片段的结合。结果:成功构建pBADuhpA重组质粒,在uhpA缺陷变异株中回补uhpA基因后,cysM和treB的表达明显恢复,但UhpA-H is6蛋白与cysM和treB的启动子区域DNA片段无明显结合。结论:伤寒沙门菌UhpA在高渗应激条件下能促进硫代谢及海藻糖代谢相关基因表达,且可能为间接作用。
- 李君辉罗哲谢新民李安平杜鸿生秀梅黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌基因表达调节
